HPLC法测定清开灵注射液中猪去氧胆酸的含量

HPLC法测定清开灵注射液中猪去氧胆酸的含量 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 HPLC法测定清开灵注射液中猪去氧胆 酸的含量 (作者:___________单位: ___________邮编: ___________) 【摘要】 目的 建立清开灵注射液中猪去氧胆酸的含量测 定方法。方法 采用HPLC法,色谱柱为UltimateXB-C18 (5 μm,250 mm×4.6 mm),流动相为乙腈-水-磷酸(35?65?0.1),流速为1 mL/min, 柱温为40 ?,检测波长为192 nm。结果 猪去氧胆酸在0.201 35, 1.006 75 mg/mL范围内线性关系良好,r,0.999 6,平均加样回收率为 98.25%,RSD,1.26%。结论 方法准确、可靠,重复性好,可用于清开 灵注射液的质量控制。 【关键词】 高效液相色谱法,清开灵注射液,猪去氧胆酸 Abstract,Objective To establish a method for content determination of hyodeoxycholic acid in Qingkailing Injection. Methods An UltimateXB-C18 column (5 μm, 250 mm×4.6 mm) was used with a mobile phase of acetonitril-water-phosphoric acid (35? 65?0.1). The flow rate was 1 mL/min. The temperature of the column was 40 ?. The detection wavelength was 192 nm. Results DOC格式论文,方便您的复制修改删减 There was a good linear relationship between the concentration of hyodeoxycholic acid and absorption area value in range of 0.201 35,1.006 75 mg/mL, r,0.999 6. The average recovery was 98.25% with RSD,1.26%. Conclusion This method was accurate, credible and repeatable which can be used to control the quality of Qingkailing Injection. Key words,HPLC,Qingkailing Injection,hyodeoxycholic acid 清开灵为安宫牛黄丸改良的复方注射液,具有清热解毒、化痰 通络、醒神开窍之功,用于热病神昏、中风偏瘫、神志不清,亦可用于 急慢性肝炎、乙型肝炎、上呼吸道感染、肺炎、高烧以及脑血栓形成、 脑出血见上述证候者。其原方中牛黄具有镇静开窍的作用,主要成分 为胆酸和猪去氧胆酸,二者具有与牛黄相似的药效活性[1]。清开灵注 射液已收录于2005版《中华人民共和国药典》(一部),其中含量测定 包含了胆酸的测定方法[2]。由于胆酸和猪去氧胆酸均为清开灵注射液 的活性成分,且结构相似,故而研究了同时测定胆酸和猪去氧胆酸的含 量的方法,结果较好。 1 仪器与试药 Waters 2695高效液相色谱仪。胆酸对照品(中国药品生物 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 制品检定所,供含量测定用,批号10078-0013),猪去氧胆酸对照品(Sigma,纯度98%),清开灵注射液(市售样品3批, 10 mL/支,吉林省集安益盛药业股份有限公司生产)。乙腈为色谱纯,其余所用试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 参考2005版《中华人民共和国药典》(一部)清开灵注射液中胆酸含量测定的色谱条件[2]。经比较色谱峰分离情况以及分离度,确定的色谱条件为色谱柱UltimateXB-C18 (5 μm,250 mm×4.6 mm),流动相为乙腈-水-磷酸(35?65?0.1),流速为1 mL/min,柱温为40 ?,检测波长为192 nm。 2.2 溶液制备 2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取猪去氧胆酸对照品适量,加60%乙腈制成每1 mL含2.013 5 mg的溶液,作为对照品溶液。 2.2.2 供试品溶液的制备 精密量取本品10 mL,加稀盐酸0.5 mL,用醋酸乙酯提取4次(20、20、15、15 mL),合并醋酸乙酯液,蒸干,残渣加60%乙腈适量使溶解,并转移至25 mL量瓶中,用60%乙腈稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液,即得。 2.2.3 阴性溶液的制备 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 取缺胆酸、猪去氧胆酸的阴性制剂,按供试液溶液制备方法制备,即得。 2.3 专属性试验 分别吸取猪去氧胆酸对照品溶液、供试品溶液与阴性溶液,按上述色谱条件进行检测,结果供试品、猪去氧胆酸对照品在相应时间出现猪去氧胆酸特征吸收峰,阴性溶液无干扰吸收峰。结果见图1。 2.4 曲线及线性范围 分别精密吸取猪去氧胆酸对照品溶液1、2、3、4、5 mL,加60%乙腈稀释至10 mL,在上述色谱条件下,进样10 μL,测定峰面积值。以峰面积平均值和对照品溶液浓度进行回归处理,回归方程为,A,5.755 10×105C,2.114 200×103,r,0.999 6,猪去氧胆酸在0.201 35,1.006 75 mg/mL浓度范围内与峰面积呈良好线性关系。 2.5 最低检测限 取0.201 35 mg/mL的对照品溶液用60%乙腈稀释1倍,得0.101 675 mg/mL的溶液,取10 μL进样测定,S/N,3,故最低检测限为1 μg。 2.6 精密度试验 取浓度为0.604 05 mg/mL对照品溶液10 μL进样测定,连续6次,结果RSD,1.6%。 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 2.7 重复性试验 取清开灵注射液样品,按照“2.2.2”项下方法制备供试液,平行试验6份,测定猪去氧胆酸的含量,结果RSD,2.4%。 2.8 稳定性试验 取供试品溶液,每隔2.0 h进样10 μL,测定猪去氧胆酸12 h内的峰面积值,结果RSD,2.8%。 2.9 加样回收率试验 精密称取猪去氧胆酸对照品,配制成浓度为2.013 5 mg/mL对照品溶液。另取清开灵注射液(批号060102)5 mL,平行试验9份,分别加入对照品溶液,按上述色谱条件测定,结果见1。 表1 加样回收率试验结果(略) 2.10 样品含量测定 取本品3批(批号分别为060101、060102、060103),按供试品溶液制备方法制备供试液,测定猪去氧胆酸的含量,结果见表2。表2 3批样品中猪去氧胆酸的含量测定结果(略) 3 讨论 醋酸乙酯振摇提取次数对猪去氧胆酸提取有一定影响,经试验考察,振摇提取3次可提取98%,提取4次可提取完全,结果与《中华人民共和国药典》中胆酸的提取相一致。 经试验,在上述色谱条件下,胆酸与猪去氧胆酸的分离度为3.7,可完全分离,因此,可同时测定这两个成分,更利于清开灵注射液的 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 质量控制。本试验胆酸、猪去氧胆酸的含量测定方法均与药典中胆酸含量测定方法一致,考虑到胆酸含量测定方法已经比较成熟,因此,未做胆酸含量测定的方法学考察。 因胆酸和猪去氧胆酸的检测波长为192 nm,为末端吸收,基线噪音较大。清开灵注射液中胆酸、猪去氧胆酸的含量较高,受到的影响较小,含量测定较准确。如为含量较低的药品,所受影响较大,可考虑采用高效液相色谱-蒸发光散射法测定,已有文献报道,该方法猪去氧胆酸的最低检测限为5 ng[3]。对此,我们将做进一步研究。 【参考文献】 [1] 北京中医学院.北京中医学院三十年论文选[M].北京,中医古籍出版社, 1986.471,478. [2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京,化学工业出版社,2005.610. [3] 曹 进,徐 燕,王义明,等.清开灵注射液中三种胆酸含量测定方法比较[J].中成药,2003,25(9),705,708.