乙酰胆碱酯酶抑制剂

上海应用技术学院 研究生课程《高等天然产物化学》试卷 2014  /   2015  学年第 1  学期 课程代码：        NX0702013              论文题目：   乙酰胆碱酯酶抑制剂的研究进展 姓    名：    芮银      146061414                                                              康满满      146061409        专    业：    制  药  工  程                学  院：    化  工  学  院            课程（论文）成绩： 课程（论文）评分依据（必填）： 1.熟练掌握文献检索方法，并能对其进行综合分析整理，论文结构规范，选材精简得当，条理清晰，语言流畅， 版面整洁美观。得分为90-100分。 2.掌握文献检索方法，并能对其进行相应的分析整理，论文结构较规范，材料组织得当，条理清晰，语言流畅。得分为 80-89分。 3.掌握基本的文献检索方法，并能对其进行一般性分类整理，论文结构基本规范，有小问题，条理较清晰，得分为 70-79分。 4.一般性罗列检索文献，论文结构基本规范，内容未经认真整理，得分为60-69分。 5.达不到上述第4点的论文，得分为0-59分。 任课教师签字：            日期：  年  月  日 乙酰胆碱酯酶抑制剂的研究进展 芮银，陈祎桐，康满满 摘要：本文阐述了乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)的研究进展，介绍了用于药物治疗的乙酰胆碱酯酶抑制剂的各种来源如植物、微生物等，及其抑制乙酰胆碱的活性物质。在此基础上，了几种现代分析技术，对AChEIs进行筛选，大大加快AD药物资源的开发利用进程。这些方法主要有基于比色法的Ellman's法及相关的改进方法、薄层显色法、荧光显色法、电喷雾质谱法等。但是，到目前为止，现代分析技术在AD药物资源中的应用还处在起步阶段。 关键词：乙酰胆碱酯酶抑制剂，筛选方法，薄层显色法，荧光显色法 The progress of acetylcholinesterase inhibitors Rui Yin, Chen Yitong, Kang Manman Abstract：In this artical, the research elaborates progress of acetylcholinesterase inhibitors (AChEI), and introduces a variety of sources for drug treatment acetylcholinesterase inhibitors such as plants, microorganisms, and its active ingredients. On this basis, the review summarizes several modern analytic techniques such as Ellman's method which based on the colorimetric method, TLC chromogenic method, fluorescent color method, Electrospray ionization mass spectrometry and so on. However, at present, the application of modern analytic techniques in AD drug resources is still in infancy.     Key word: Acetylcholinesterase inhibitors, Screening Methods, TLC chromogenic method, Fluorescent color method 目 录 摘要    I Abstract    II 1. 简介    1 2. 植物来源的乙酰胆碱酯酶抑制剂    1 2.1 抑制乙酰胆碱酯酶的植物资源    1 2.2 植物中抑制乙酰胆碱酯酶的活性成分    2 2.2.1 生物碱类    3 2.2.2 萜类    4 2.2.3 香豆类、黄酮类和其他    4 3. 微生物来源乙酰胆碱酯酶抑制剂    5 4. 乙酰胆碱酯酶抑制剂的筛选方法    6 4.1 基于比色法的Ellman’s法    6 4.2 薄层色谱生物自显影法    7 4.3 荧光显色法    8 4.4 液相色谱及液相色谱质谱联用技术    8 5. 总结    10 参考文献    10 1. 简介 阿兹海默症（AD），一般俗称老年痴呆症，是一种以进行性认知功能(包括学习、记忆、判断及抽象思维等)障碍为特征的中枢神经系统退行性疾病，是一种持续性神经功能障碍，也是失智症中最普遍的成因，好发于65岁左右的老人[1]。AD 的发病机制复杂，目前较能被接受的病理为胆碱能缺失学说，该学说认为患者记忆功能障碍是大脑皮层、海马、核基底等区域的神经递质－乙酰胆碱缺失的结果。乙酰胆碱酯酶可催化乙酰胆碱裂解，导致乙酰胆碱的缺失，直接造成神经信号传递失败，从而导致老年痴呆症[2,3]。目前，治疗老年痴呆症最有效的方法之一是抑制AChE，AChE抑制剂是美国FDA唯一允许作为治疗老年痴呆症的药物，且目前只有4种药物获得FDA许可，分别为：Tacrine ( 他克林)、Donepezil(多奈哌齐)、Rivastigmine(利斯的明)、Galantamine (加兰他敏)[ 4,5]。但上述4种应用于临床的AChE抑制剂大多存在半衰期短、较严重的外周胆碱能系统副作用等缺点[6]。所以从大自然中开发、寻找具有适宜患者长期服用、毒副作用小、作用面广等优点的AChE抑制剂受到科学研究者的广泛关注。 乙酰胆碱酯酶抑制剂又称为抗胆碱酯酶药，通过对乙酰胆碱酯酶的可逆性抑制，达到使乙酰胆碱(ACh)在突触处的积累，延长并且增加了乙酰胆碱的作用，属于间接拟胆碱类药物，临床主要用于治疗重症肌无力和青光眼及抗老年性痴呆。目前，全世界正在开发研制的乙酰胆碱酯酶抑制剂有40多个，本文主要对植物、微生物中的乙酰胆碱酯酶抑制剂进行综述。 2. 植物来源的乙酰胆碱酯酶抑制剂 自然界具有丰富的生物资源多样性，大量研究表明：天然植物药用成分具有疗效好、副作用小、作用面广、适宜长期服用等优点。因而，从植物中寻找具有抗早老性痴呆症的乙酰胆碱酯酶抑制剂，已成为当今医药研究方面的热点课题[7]。 在这资源丰富的大自然环境中，现已报道很多种植物中具有抑制乙酰胆碱酯酶的活性成分，并有望用来治疗AD。 2.1 抑制乙酰胆碱酯酶的植物资源 我国是一个中草药大国，也是中草药的发源地。目前，中国有大约12,000种药用植物，丰富的草药资源为天然乙酰胆碱酯酶抑制剂的寻找提供了得天独厚的资源优势。 张翼[8]等采用乙酰胆碱酯酶抑制剂活性筛选模型对采自青岛沿海的22种海藻样品提取物的石油醚组分和乙酸乙酯组分进行了活性筛选。结果表明，22种海藻的石油醚组分均具有不同程度的乙酰胆碱酯酶抑制活性，其中亮管藻、海头红、鸭毛藻和孔石莼表现出较强的活性，在浓度为50 μg/mL 时的抑制率均大于50.0% ，分别为50.5% 、55.5% 、56.6% 和65.8% ；其他大部分海藻的抑制率在30.1% ~ 48.9% 之间。与石油醚组分不同的是，只有少数海藻的乙酸乙酯组分表现出乙酰胆碱酯酶抑制活性，其中鸭毛藻的活性最为显著，在浓度为25 μg/ mL 时抑制率高达71.8%。 金虹等[9]对益智仁、丹参、远志、熟地黄、钩藤、川芎、白芍和石菖蒲8 种中药材的水和乙醚提取物进行乙酰胆碱酯酶体外抑制实验，结果表明这8种中药的水和乙醚提取液均有不同程度的抑制乙酰胆碱酯酶活性，其中以益智仁、丹参和钩藤抑酶活性较强，其乙醚提取部分有多种乙酰胆碱酯酶抑制剂活性成分。 当然，除了中国之外，其他的一些国家如泰国、印度、缅甸、朝鲜、新加坡等国家也有丰富的植物资源，从中也可以提取到上好的乙酰胆碱酯酶抑制剂。朝鲜族医学中的白菖蒲、石菖蒲、柴胡、山药、朝鲜淫羊藿、茯苓和红枣具有提高记忆力和老年人认识力的功效，Oh M H等[10]对这7种中草药甲醇提取物进行乙酰胆碱酯酶体外抑制实验，发现白菖蒲和朝鲜淫羊藿的甲醇提取物对乙酰胆碱酯酶有很强的抑制活力。Ingkaninan K 等[11]收集了32种泰国传统的神经治疗类药材，对这 32 种药材采用甲醇浸提，提取物通过Ellman的方法进行乙酰胆碱酯酶体外抑制实验，结果表明马蹄花和Stephania suberosa Forman根部的甲醇提取物能力最强，0.1 mg/mL 时对乙酰胆碱酯酶的抑制力分别为93.50±0.37%和91.93±10.80%；另外，疏果胡椒茎、胡椒种子、葛根根皮和腊肠树根的甲醇提取物在0.1 mg/ mL时对乙酰胆碱酯酶的抑制力都大于50%。 除此之外，不同的研究者先后采取不同的方法在臭牡丹、苍耳、一年蓬、紫茉莉、鬼针草、东风菜、麦冬、荷花玉兰、白玉兰、凹叶厚朴、深山含笑等不同的植物中提取到乙酰胆碱酯酶抑制剂。 2.2 植物中抑制乙酰胆碱酯酶的活性成分   在研制作为药物的乙酰胆碱酯酶抑制剂的过程中，大多数都是经过一个先从植物提取，后人工合成的过程。例如Galantamine 是从雪花莲属植物以及我国石蒜植物内分离到的生物碱，石杉碱甲是从中药石杉属千层塔中分离得到的生物碱；从柑桔属植物葡萄柚中分离得到萜类；同样也可以从唇形科丹参等植物中分离提取到香豆类、黄酮类等成分。因此，大自然植物物种丰富，是开发研制乙酰胆碱酯酶抑制剂的宝库。 2.2.1 生物碱类 石蒜科文殊兰属植物C. jagus 和C. glaucum 在尼日利亚作为治疗老年性痴呆的传统用药，从中分离得到的网球花碱(H aemantham ine)、Hamayne、Crinam ine 和石蒜碱( Lycorine)能提高脑内乙酰碱胆碱含量[12] 。 石杉碱甲是从石杉属植物千层塔中分离得到的一种新型生物碱有效单体，对脑内乙酰胆碱酯酶具有极高的选择性抑制性和可逆性抑制，但其在植物中的含量很低，不易提取。同时，由于其结构的复杂性，全合成也不是一件容易的事。 加兰他敏是从石蒜科植物中分离得到的一种生物碱，主要来源于黄花、石蒜、石蒜及白水仙鳞茎、夏雪片莲、雪片莲、沃氏雪花莲的叶、球茎、克氏雪花莲、雪花莲的全草、斯特伦伯石蒜球茎和波斯石蒜叶等。加兰他敏是一种可逆性乙酰胆碱酯酶抑制剂，能刺激烟碱受体，提高胆碱功能和记忆，其疗效与他克林相似， 稍弱于毒扁豆碱，有效时间长，半衰期5-6 h，不良反应少，且无肝毒性。 中草药及其制剂含有丰富的活性生物碱，是我国研究最多的AChE抑制剂来源。张东博[13]等从5种中草药中筛选出的元胡与黄柏生物碱提取物显示了显著的乙酰胆碱酯酶抑制活性，抑制率分别达到（96.6±0.6）%和（91.6±0.9）%；这两种中草药的生物碱提取物对乙酰胆碱酯酶的半数抑制浓度各是（1.9±0.1）μg/mL和（4.9±0.3）μg/mL。说明这两种中草药的生物碱提取物中可能存在着高活性的生物碱类乙酰胆碱酯酶抑制剂，能为开发治疗阿尔茨海默病的新药提供有用的先导化合物。殷帅文[14]等对井冈山区63种植物不同溶剂萃取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性进行了初步研究，结果发现：乙酸乙酯萃取物中，供试量浓度在1mg/mL时，剪刀草和戟叶蓼表现出较强的AChE抑制活性，抑制率均大于90%，供试量浓度在0.025mg/mL时，蛇莓等6种植物的抑制率大于60%；在正丁醇萃取物中，供试量浓度在1mg/mL时，紫萼变种、活血丹、菟丝子等植物的抑制率 大于80%；在石油醚萃取物中，供试量浓度在1mg/mL时，紫萼变种、紫茎前胡、博落回等植物的抑制率大于90%，供试量浓度在0.025 mg/mL时，紫茎前胡等17种植物抑制率大于70%。 2.2.2 萜类 从柑桔属植物葡萄柚(C itrus parad isi )中分离得到的倍半萜Nootkatone，有抑制红细胞AChE的活性[15]。从丹参中分得的二氢丹参醌和隐丹参醌具有较强的AChE抑制活性，IC50分别为1.0~7.0mol /L，系首次关于二萜成分AChE 抑制活性的报道[16]。 从棘枝属植物Lippia stoechadifolia 中分离得到的Pulegone-1,2-epoxiode是一种杀虫剂，其具有抑制乙酰胆碱酯酶的活性。人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1 是人参属植物人参、三七等的主要成分，既可提高乙酰胆碱含量使胆碱能M 受体数增加，又能促进核酸和蛋白质的合成。Miyazawa M 等从柑桔属植物葡萄柚中分离得到的倍半萜：香柏桐（Nootkatone），具有抑制红细胞AChE 的活性。Chung Y. K.等发现甘牛至的乙醇提取物表现出很强的AChE 抑制能力，进一步分离鉴定活性成分为熊果酸，其AChE 的IC50为7.5nM。Ren Y H 等从丹参中分离得到的二氢丹参醌和隐丹参醌具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性，IC50分别为1.0 和7.0 umol/L，是首次关于二萜成分AChE 抑制活性的报道。 2.2.3 香豆类、黄酮类和其他     木兰属植物厚朴(Magnolia off icinalisR ehder)中分离得到的厚朴酚(Magnolol)可抑制海马趾的AChE，提高乙酰胆碱含量[17]。金丝桃属贯叶金丝桃(Hyp ericum perforatum )和萼状金丝桃(Hypericum calycimum )中分离得到的金丝桃素(Hyperforin)能改善东莨菪碱所致大鼠记忆衰退，增强认知功能[18]。蛇床子素是从伞形科蛇床属植物蛇床的成熟果实蛇床子中提取的香豆素，并且能抑制小鼠脑内胆碱酶活性和延缓衰老。Klusa V等从金丝桃属贯叶金丝桃和萼状金丝桃中分离得到金丝桃素，并发现其可以改善东莨菪碱所致的大鼠记忆衰退，增强认知功能。Dae Keun Kim 等从当归的甲醇提取物中分离出三种具有很强AChE 抑制活性的呋喃香豆素类化合物，分别为异前胡醚、欧前胡素和氧化前胡素，且都表现出剂量依赖性抑制，IC50 分别为74.6、63.7 和89.1 uM。Manh Hung 等从五味子果的正己烷提取物中分离出14 种乙酰胆碱酯酶抑制剂成分，均为木质素类，IC50分布在6.55-13.28uM 之间。 以下是从植物中提取的一些植物碱类物质：             石杉碱甲                加兰他敏                毒扁豆碱                       中乌碱                    蒎烯                原鸦片碱           小霹碱          欧前胡素                    熊果酸          巴马亭            二氢丹淡参醌                隐丹参醌 3. 微生物来源乙酰胆碱酯酶抑制剂 20 世纪90年代后期，在植物来源和有机合成来源的乙酰胆碱酯酶抑制剂开发的同时，日本的科技工作者Izaw a 等在筛选杀虫剂的过程中，从淡紫灰链霉菌NK90109393 中分离出Cy clo phost in 乙酰胆碱酯酶抑制剂，IC50 为7. 6*10- 10 mol/ L。Omura等从青霉和曲霉中分离的一组化合物A risugacin 和Territ rem 具有较强的抑制乙酰胆碱酯酶活性，分别是他克林的200 和29 倍；此外董悦生等从放线菌株N98- 1021的发酵液中分离得到N98- 1021A 化合物对乙酰胆碱酯酶的IC50为2. 0×10- 5 mol/ L。 魏玉珍等从1200株细菌中筛选到一株革兰氏阴性细菌CPCC10056，16S rRNA 基因序列分析发现该菌株为玫瑰单胞菌属( Roseomonas)。承曦等[19]对蛇足石杉的29株内生真菌菌株发酵液醇提物进行了酶抑制活性的初步筛选，结果得到xg、g8、g5、xgc2、xy7 对乙酰胆碱酯酶具有较高的抑制率，其IC50 分别是285. 62、293. 53、434. 17、6 68. 82、856. 21g/ mL。邹磊等[20]对9 种市售豆豉体外乙酰胆碱酯酶抑制能力进行了测定，结果表明9 种豆豉80%乙醇提取液抑制乙酰胆碱酯酶的IC50值范围为：0. 033~ 1.110 mg / mL。 4. 乙酰胆碱酯酶抑制剂的筛选方法 近年来，随着科学技术的进步，现代分析技术得到了快速发展。采用各种现 代分析技术，对AChEIs进行筛选，大大加快了AD药物资源的开发利用进程。这些方法主要有基于比色法的Ellman's法及相关的改进方法、薄层显色法、荧光 显色法、电喷雾质谱法等。但是，到目前为止，现代分析技术在AD药物资源中 的应用还处在起步阶段。 4.1 基于比色法的Ellman’s法 Ellman’s法是胆碱酯酶活性检测中应用最广泛的一种技术，同时也是评估乙酰胆碱酯酶活性的经典。 最初的乙酰胆碱酯酶抑制剂的检测是通过对临床标本采用肠道浴的药理学技术方法进行的，但是该方法的实验周期长，且所使用的动物组织和试剂都较昂贵。目前，该方法已经被灵敏的化学方法取代，如Ellman’s法就得到广泛的使用。这是一种快速测定乙酰胆碱酯酶抑制剂的方法，具有操作简单、灵敏度高和专属性高等优点。其原理为：乙酰胆碱酯酶水解底物硫代乙酰胆碱，生成的产物硫代胆碱再与显色剂 5 , 5 ′-二硫二硝基苯甲酸 [ 5 , 5′ -d ithiob is - (2 – nitroben zoic acid)，DTNB]反应生成在410 nm处有特征吸收的化合物2-硝基-5-巯基苯甲酸( 5 -thio-2-nitroben zoic acid)，通过可见分光光度计或酶标仪测定410 nm处的吸光度的增量，进而间接测定AChE的活性[21]。     目前，基于比色法的Ellman’s法已广泛应用于乙酰胆碱酯酶抑制剂的筛选和检测。许雪梅等[22]用改良的Ellman’s比色法测定了乙酰胆碱酯酶的活性，建立乙酰胆碱酯酶体外筛选模型，并随机筛选多种植物浸膏，并对有抑制作用的浸膏进一步进行活性追踪，筛出了需要的活性物质，最终得到了东茛菪内酯抑制率超过50% 的单体化合物，这为研发AD的新药提供了先导化合物。蒋玉仁等采用Ellman’s法比色法，检测了合成的潜在高活性化合物对乙酰胆碱的抑制效能。结果显示，其抑制活性是现有药物加兰他敏的3倍。朱剑翔等以几种有机磷杀虫剂为供试药剂，以乙酰胆碱酯酶为靶标酶，用Ellman’s法建立了用于农药的乙酰胆碱酯酶抑制剂的离体酶筛选方法，为今后乙酰胆碱靶标的酶筛法做了准备。何玲等[23]采用乙酰胆碱酯酶试剂盒和改良的Ellman’s比色法测定了乙酰胆碱酯酶的活力，检测了芥子碱对大鼠血清和脑匀浆乙酰胆碱酯酶的抑制作用，结果发现芥子碱能明显抑制大鼠大脑匀浆乙酰胆碱酯酶的活力，而对血浆乙酰胆碱酯酶活性的抑制相对较弱，说明了芥子碱有可能作为中枢乙酰胆碱酯酶抑制剂具防治A D的应用前景。张蓝江等选择了AD患者和健康老年人的血清，采用了改良的Ellman’s比色法分别测定了血浆中乙酰胆碱酯酶及丁酰胆碱酯（BuCh）的活性，并进行相关比较分析，得出了血浆中AChE及BuCh活性的测定可作为AD的一种辅助诊断指标。刘佳莉等[24]利用改良的Ellman’s法，分别以电鳗、人源红细胞、大鼠海马区和纹状体匀浆液中的 AChE 为酶源，检测了他克林和石杉碱甲对不同酶源 AChE的抑制作用，同时对植物提取物样品的AChE 抑制作用也进行了检测，为新药发现阶段乙酰胆碱酯酶抑制剂的筛选提供了经济快速的微量筛选方法。陈军辉等[25]以氨基化硅胶(APS-Si)微球为载体，对AChE进行了交联固定化，以改进的Ellman’s法测得了能重复使用的固定化AChE的活性，同时研究了AChE的最佳固定化条件和固定化酶的性质，为天然产物复杂体系中乙酰胆碱酯酶抑制剂筛选新方法的发展奠定了基础。然而，Ellman’s法会被自身的低敏感度所限制，导致一些错误的结果。 4.2 薄层色谱生物自显影法 薄层色谱生物自显影法是在Ellman’s法和色谱分离法基础上建立的。它的原理主要是：溶解后的提取物点养育博层板，用适量的溶剂使得提取物中的化学成分子薄层板上分离。底物在乙酰胆碱酯酶的存在下发生水解反应，接着生成胆碱和显色剂DTNB迅速作用，产生黄色化合物，具有酶抑制剂活性的化合物将显示出白色的斑点。由于20-30min以后，结果会自动消失，所以该反应现象一般应在15min以内观察完毕[26]。该方法的优点是操作简单，不需要特殊的仪器设备且分析成本低等。但是，它也有一定的局限性，如：误差大、容易出现假阴性结果、不能反映被筛选物质的生物活性和显色剂缺乏专属性等。 薄层色谱生物自显影法集鉴定、分离和活性检测于一体，可用于药物的筛选。有研究员就是采用薄层色谱生物自显影法筛选了浙江天台产乌药等物质中的天然抗氧化活性物。同时，薄层色谱生物自显影也可以对具有胆碱酯酶抑制活性的化合物进行筛选。另外，有的研究人员采用薄层色谱生物自显影法检测了利用微生物发酵制成的一种传统调味品——豆豉中的乙酰胆碱酯酶抑制剂。结果显示与微孔板法相比，薄层色谱生物自显影法最终检出所需试剂量却更少，采用薄层色谱生物自显影法检测豆豉中乙酰胆碱酯酶抑制剂是一个快捷、简便、高效的方法。除此之外，还有许多研究员也研究了利用该方法提取乙酰胆碱酯酶抑制剂，并且达到很好的效果。 4.3 荧光显色法 用荧光显色法检测乙酰胆碱活性的灵敏度一般要比用比色法检测的灵敏度高出几个数量级。该方法的原理是利用无荧光的底物被乙酰胆碱酯酶水解后产生有荧光的物质进行检测。常被乙酰胆碱酯酶水解后产生荧光的底物有试卤灵酯、吲哚乙酸酯、1-甲基- 7-乙酰基喹啉、α或β-乙酸萘酯等。荧光显色法灵敏度高，可应用于天然产物的检测，但是该方法的稳定性不是太好[27]。有人采用热水偏磷酸提取了水果中叶酸，用荧光显色法测定了提取出的叶酸含量，并以正交试验设计方法对提取分离条件进行优化，详细研究了果蔬中叶酸的提取分离和方法的测定。荧光显色法也可以用于乙酰胆碱酯酶的检测，如：利用荧光燃料与反应生成物结合产生荧光来检测乙酰胆碱酯酶，为荧光显色法检测乙酰胆碱酯酶奠定基础。 4.4 液相色谱及液相色谱质谱联用技术 高效液相色谱法（HPLC）是近代发展起来的一项分析分离技术。该方法采用高压输送流动相，分离效能高的固定相及高灵敏度的检测器，实现试样的分离。该方法具有高效、高速、高灵敏度等优点，但该法对仪器设置要求较高，且对操作人员也有一定的要求[28]。HPLC具有高效分离和成分分析的功能，在医药、食品、化工等行业中广泛应用。赵仁邦等[29]用HPLC测定了枣样品中的单糖和木糖，结果表明，用HPLC测定枣中的糖类物质分离纯度高、重现性好且易于识别。     超高效液相色谱（UPLC）采用小颗粒填料色谱柱、快速检测手段及超高压系统的新型液相色谱技术，该法具有高柱效、高分离度、高灵敏度和分析周期短等优点，为复杂体系的分离分析提供了良好的平台，为代谢组学、蛋白组学的研究提供了方便的条件[30]。现已经广泛的应用与农药残留检测、水质和环境检测、化妆品质量控制等各个领域。刘少华等[31]利用UPLC技术，对农药丹参粗提物成分进行指纹图谱研究，并进行方法学考察，为丹参药材质量控制奠定了研究基础。同样，也有一些研究人员用UPLC测定了蔬菜中氨基甲酸酯类农药残留，结果显示，该方法可满足蔬菜中多种氨基甲酸酯类农药残留量的测定，即乙酰胆碱酯酶抑制剂的测定。     高效液相色谱-质谱法联用技术以高效液相色谱为分离手段，以质谱为鉴定工具，以其灵敏、快速的特点，在对含量低、不易分离得到或缺乏特征紫外吸收的物质的分析中显示出了独特的优势。HPLC-MS联用技术集HPLC的高分离与MS的高灵敏度，在含量低、难分离化合物中有显著地优势，该技术将高效液相色谱对复杂样品的高分离能力与质谱技术的高灵度、高灵敏度以及结构鉴定功能成功结合，特别适用于天然产物复杂基质中化学成分的分离分析，成为应用广泛、潜能巨大的分离分析技术[32]。目前，HPLC-MS联用技术已广泛应用于农药、中草药、天然产物中活性成分的分离以及筛选。史倩[33]等采用该技术对龙须菜特征峰进行快速分析，获得特征峰的质谱信息，实现了共有峰和特征峰的准确定位。陈军辉等[34]采用高效毛细管电泳-电喷雾飞行时间质谱联用技术，得到了黄连中生物碱类化合物的色谱峰紫外光谱和质谱，进而得出生物碱类化合物的精确分子量。表明该法可对黄连中生物碱类化合物进行快里、鉴定。王虹等[35]建立了基于高效液相色谱-大气压化学电离质谱法检测茶叶中茶氨酸含量的新方法。结果表明，该方法重现性好、灵敏度高、可用于微量茶氨酸的快速检测。Jone等[36]建立了用高效液相色谱-质谱联用技术在天然产物中筛选乙酰胆碱酯酶抑制剂，通过测定产物的减少值来确定乙酰胆碱酯酶抑制剂的量。同时，测定加兰他敏、石杉碱甲A等的IC50值，结果表明水仙的粗提物对乙酰胆碱酯酶也有一定的抑制活性。 5. 总结 乙酰胆碱酯酶抑制剂仍然是目前临床上应用最广泛、研究最多的治疗AD的一类药物，但是有些应用于临床的乙酰胆碱酯酶抑制剂多半存在半衰期短、较严重的外周胆碱能系统副作用，当一些副作用较大的乙酰胆碱酯酶抑制剂在早期被作为杀虫剂和AD治疗使用后，在最近几十年内，寻找新的乙酰胆碱酯酶抑制剂成为医药研究的热点。大量研究表明：天然植物中药用成分具有疗效好，副作用小，作用面广，适宜长期服用等优点；同时，天然产物化学成分复杂，含有大量结构新颖、功能独特的次生代谢产物，因此，是研究发现乙酰胆碱酯酶抑制剂的宝贵资源。随着科学技术的不断创新，科学仪器的不断更新，以及一种又一种新结构和作用机制的乙酰胆碱酯酶抑制剂的发现，同时，对AD的进一步了解，相信战胜AD指日可待。 参考文献 [1] 沈来凤. 老年痴呆症的研究进展. 现代医药卫生, 2010, 26(4): 542-544. 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