019新生儿ABO溶血病及抗人球蛋白试验作业指导书

019新生儿ABO溶血病及抗人球蛋白试验作业指导书 K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0302•019 GuangZhou Kingmed Center for Clinical Labrotory Edition 1.0 《文件已阅声明表》 《Procedure circulation form》 新生儿ABO溶血病及抗人球蛋白试验作业指导书 表号:KM-MP03•02•02 文件名称: 已阅声明:本人承诺已了解此文件中的相关内容,今后的工作中将严格按照此文件执 行,不随意对外传阅此文件,如有因与文件不相符的操作,责任由本人承担。 (I have understood the relevant content of the document。I will keep the document secret and be responsible to properly perform procedure) 阅读人签名表 姓名(NAME) 职务(POSITION) 签名(SIGNATURE) 签名日期(DATE) 陈美才 学科主任 徐霜清 主任助理 熊延安 授权签字人 周梅华 技术员 张玲 授权签字人 陈平江 技术员 孙伟 授权签字人 刘玲丽 质量监督员 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 1/8 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 1/8 K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0302•019 GuangZhou Kingmed Center for Clinical Labrotory Edition 1.0 《文件修改页》 《Procedure amendment form》 表号:KM-MP03.02.03 序号 审批人 批准生效日期 页码内容更改说明(Description of Modified NO. (Approved (Approved (Page) contents) by) date) STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 2/8 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 2/8 K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0302•019 GuangZhou Kingmed Center for Clinical Labrotory Edition 1.0 《文件信息表》 《Procedure information form》 表号:KM-MP03•02•04 新生儿ABO溶血病及抗人球蛋白试验作业指导书 文件名(Title of document) 生效日期 Edition 1.0 版本号(Edition No.) 2006-09-30 (Operative date) 文控部门 实验室文控室 (Doc. Control Dept.) 回顾人员签名/日期回顾人(reviewed by : Signature) 回顾日期(Review date) (Reviewed by : Signature/ Review date) 替代文件(Replaces) 存放地点(Location)/持 有人(Holder) Location(Holder) Location(Holder) No. No. 1 实验室文控室(陈彬) 2 血液室(徐霜清) 3 4 5 6 作者签名/日期(Author 刘玲丽 signature/Date) 审批人签名/日期陈美才 (Authorized by : Signature/Date) 接收人签名/日期 (Receiptor/Date) 副本数(Copy No.) 本文件是第 个文件拷贝 / 共发放 2 个文件拷贝 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 3/8 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 3/8 K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0302•019 GuangZhou Kingmed Center for Clinical Labrotory Edition 1.0 新生儿ABO溶血病及抗人球蛋白作业指导书 (SOP for ABO HDN and Antibody Test ) 1、原理 (Test Principle): 1.1 实验:抗原抗体反应的免疫方法. 1.2 新生儿溶血病实验原理:ABO血型新生儿溶血病是由于母体的IgG型抗A(B)抗体通过胎盘进入胎儿体内，与胎儿相应抗原的红细胞结合，引起胎儿以溶血为主的病理损害。多见于O型产妇所生的A型或B型婴儿，由于母亲在怀孕ABO血型不合的胎儿以前就可有高效价的IgG型抗A(B)，所以ABO血型新生儿溶血病多发生在第一胎。 直接抗人球蛋白原理:直接抗球蛋白试验是检查体内致敏红细胞的一种方法，用于检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏，如新生儿溶血病(胎儿红细胞被母亲血型抗体致敏)、溶血性输血反应(输入的不相和红细胞被受血者不完全抗体致敏)、自身免疫性溶血性贫血(患者红细胞被自身抗体致敏)以及药物诱导产生的自身抗体(由甲基多巴类药物，青霉素等所致) 1(3 间接抗人球蛋白原理:它是一种检测血清中不完全血型抗体的方法。即用已知抗原红细胞测定受检血清中相应的不完全抗体，或用已知抗体的抗血清测定受检红细胞上相应抗原。常用血型鉴定，抗体的检出和鉴定，输血前交叉配血试验以及其它的特殊研究。 2 、样本收集和贮存(Specimen Collection and Storage): 2.1 采集母亲未抗凝全血5ml,父亲未抗凝全血2 ml.患婴抗凝及未抗凝全血5ml.室温下可保存8小时，2-4?可保存2周。最好不用脐血,因可以产生直接抗人球蛋白的假阳性.采取出生3-7天的新生儿的全血分成1:4两份,一份抗凝,一份不抗凝,抗凝剂可以用EDTA-NA或肝素抗凝,抗凝剂与全血的比例为4:1,采集后立即送检,因时间过2 长时,容易产生直接抗人球蛋白的假阳性. 2.2抗人球蛋白试验标本采集:采取4-5ML不抗凝全血立即送检. 2.3标本拒收条件:标本量不够,或为脐血标本,应退单,执行退单程序. 3 、试剂(Reagents): 3.1 试剂来源:长春博德生物有限公司 3.2 批准文号:吉食药监械(准)字2005第2400053号 3.3 试剂规格:广谱抗人球试剂:3ml/支, ABO反定型红细胞试剂10ml?支x2, 红STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 4/8 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 4/8 K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0302•019 GuangZhou Kingmed Center for Clinical Labrotory Edition 1.0 细胞抗体筛检细胞3ml?支x3聚凝胺试剂100人份?盒 4、仪器(Instrument):50-200UL定期校准的加样枪,37?恒温水浴箱.56?水浴箱 5、材料(Material):血型鉴定卡,75×60玻璃试管 6、操作(operate steps): 6、1 ABO血型及RH血型检测略,见《ABO血型及RH血型检测作业指导书》 6、2 游离试验: 6.2(1 取玻璃试管5支，分别编上A、B、O1、O2、O3，每管各加待测血清100ul，在A 管加A 型红细胞，在B 管加B 型标准红细胞，O 管加筛检红细胞各1滴，混匀。 6.2(2 然后加入4滴低离子介质，混匀后室温放置1分钟，加入2滴聚凝胺试剂，混匀后放15S后3500转/min离心10秒，若没有凝聚需查找原因，若有凝聚尽可能地倒干上清液，再加入2滴再悬液轻摇试管 6.2(3观察结果: 指示红细胞 意 义 AB型 ?型 ?型 ?型 型 + — — — — 游离的抗A — + — — — 游离的抗B 游离的抗A、抗B或抗A、B + + — — — — — — + — 游离的ABO系统以外的抗体 — — + — — 游离的ABO系统以外的抗体 — — — — + 游离的ABO系统以外的抗体 — — — — — 无游离抗体 6(3释放试验: 6(3(1用竹支将细胞凝块搅碎，生理盐水洗涤三次，弃去上清，加8滴生理盐水，置56?水浴震荡10min，离心取上清液，即为放散液，用放散液代替6.1的待检血清进行检测 6(3(2检测结果判断同游离试验. 6(4 直接抗人球蛋白试验: 6(4(1 制备3%Rh(D)阳性红细胞盐水悬液(IgG抗D致敏)供阳性对照用:取3人O 型红细胞，混合，经盐水洗涤后取压积红细胞，加等量抗D血清，置37?水浴致敏STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 5/8 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 5/8 K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0302•019 GuangZhou Kingmed Center for Clinical Labrotory Edition 1.0 60min取出，以生理盐水洗涤3次后，离心除去上清液，再用盐水配成3%红细胞盐.水悬液 6(4(2 制备正常人3%D阴性红细胞悬液，供阴性对照用:配制除不用抗D血清外，其余按上法配制。 6(4(3 取受检查红细胞，以生理盐水洗涤3次，末次洗涤后将上层盐水倒尽，再以滤纸将管口附着的盐水吸去，再配成3%红细胞盐水悬液。 6(4(4 取上述3%受检者红细胞盐水悬液1滴，滴入1试管(10mm×60mm)内，加广谱抗球蛋白血清2滴混匀。 6(4(5 阳性对照:不完全抗D血清致敏的3%D阳性红细胞悬液1滴加抗球蛋白血清1滴，混匀。 6(4(6 阴性对照:正常人3%D阳性红细胞悬液1滴加抗球蛋白血清1滴，混匀。 6(4(7 受检者以及阳性，阴性对照管同时以3000g/min，离心15s，轻轻混合，观察结果。 6(4(8 结果判定:如阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检红细胞凝集者为阳性，不凝集者为阴性。 7、质量控制(Quality Control): 7(1 标本采取后立即进行试验，延迟试验或中途停止可使抗体从细胞上放出。 7(2 抗球蛋白血清应按说明书使用最适稀释度，否则，可产生前带和后带反应，而误为阴性结果。 7(3 受检红细胞一定要用盐水洗涤3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋白，以防止假阴性结果。 7(4 如果了解在体内致敏红细胞的免疫球蛋白类型，则可分别以抗IgG、抗IgM或抗单价抗球蛋白清进行试验。 C3 7(5 红细胞上吸附抗体太少，或Coombs阴性自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可呈假阴性反应。 7(6 全凝集或冷疑集血液标本及脐血标本含有Wharton胶，且洗涤不充分，血液标本中有很多网织红细胞，且抗球蛋白血清中含有抗运铁蛋白时，都可使红细胞产生凝集。 8、 间接抗人球蛋白试验: STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 6/8 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 6/8 K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0302•019 GuangZhou Kingmed Center for Clinical Labrotory Edition 1.0 8(1 间接抗球蛋白试验操作步骤表1 间接抗球蛋白试验操作步骤: 反应物 受检管 阳性对照 阴性对照 血清(已知或受检) 2滴 — — 5%红细胞悬液(受检或已知) 1滴 — — IgG抗D血清 — 2滴 — AB型血清 — — 2滴 5%D阳性红细胞悬液 — 1滴 1滴 混匀，置37?水浴60min用生理盐水洗涤3次。末次洗涤后，将上清液除尽，并用滤纸将附着于管口的盐水吸去。每管各留红细胞悬液1滴。 8.2 加最适稀释度抗球蛋白血清1滴，混匀，3000转/min，离心15s，观察结果。 8.3 阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检管出现凝集者为阳性，受检管不出现凝集者为阴性。 注意事项:1、红细胞洗涤应迅速，一开始洗涤就不应中途停止。洗涤用盐水要足量并用力冲入管底，使压积于管底的红细胞松离。切勿用手指堵住管口，颠倒混匀，以防污染来自皮肤的蛋白。 8.4离心速度和时间十分重要，应按规定进行。 9、生物安全: 应将所有的血标本视为传染性物质.操作时应带手套.穿工作服,如有血溅到工作服上应立即清洗.更换. 10、结果解释:略 11、临床意义: 直接抗球蛋白试验是检查体内致敏红细胞的一种方法，用于检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏，如新生儿溶血病(胎儿红细胞被母亲血型抗体致敏)、溶血性输血反应(输入的不相和红细胞被受血者不完全抗体致敏)、自身免疫性溶血性贫血(患者红细胞被自身抗体致敏)以及药物诱导产生的自身抗体(由甲基多巴类药物，青霉素等) 11、参考文献(References): 11.1临床检验管理与技术规程.浙江大学出版 11.2广州市血站的产前血清学操作规程. STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 7/8 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 7/8 K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0302•019 GuangZhou Kingmed Center for Clinical Labrotory Edition 1.0 11.3 WS/T227-2002临床检验操作规程编写要求。 11.4长春博德生物有限公司的试剂说明书。 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 8/8 STANDARD OPERATION PROCEDURE PAGE 8/8