肺低分化癌神经内分泌表达及其与肿瘤生物学行为的关系

肺低分化癌神经内分泌表达及其与肿瘤生物学行为的关系 上海交通大学硕士学位论文肺低分化癌神经内分泌表达及其与肿瘤生物学行为的关 系姓名章晓淼申请学位级别硕士专业胸心外科指导教师曹子昂20070401 2Expression Of Poorly Differentiated Lung Neuroendocrine Cancer And The Relationship With Tumor Biological Behaviour Abstract Objective:Approah the difference of the expression of neuroendocrine between large cell lung cancerLCLC and small cell lung cancerSCLC.The effect that the neuroendocrine characteristic of lung cancer has on the tumor staging and prognosis. Method:Use the immunohistochemical method to detect the neuroendocrine marks of both LCLC and SCLC.Through case reviewgain the tumor TNM staging and follow up the one-year survival rate of the patients.Compare the difference of neuroendocrine between LCLC and SCLC then analys the relationship between the expression of neuroendocrine lung cancer and the tumor biological behaviour. Result?In LCLCCHG is negativeNSE is positive by 38.46S-100 protein is positive by 84.62 SYN is positive by 69.23TTF-1 is positive by 30.77in SCLC CHG is positive by 78.38NSE is positive by 64.86S-100 protein is positive by 54.05 SYN is positive by 29.73TTF-1 is positive by 54.05.LCLC has difference with SCLC on the expression of CHGNSES-100 proteinSYN.?The biological behaviour of LCLC is affected by the expression of NSES-100 protein and TTF-1.The prognosis relates to the expression of NSE and TTF-1.?The biological behaviour of SCLC is affected by the expression of CHGNSE and S-100 protein.The prognosis relates to the expression of CHG. Conclusion:There is obviously difference between LCLC and SCLC.The 3neuroendocrine function of lung cancer has effect on its biological behaviour and can be the prognostic marks of the tumor:the CHG positive SCLCthe NSE negative LCLC and the TTF-1 positive LCLC patients have a better prognosis. Key Words: large cell lung cancer small cell lung cancer tumor clinic stage immunohistochemical method chromogranin neuro-specific enolase S-100 protein synaptophysin Thyroid transcription factor 1 one-year survival rate 4前 言 肺癌是目前全世界最常见的恶性肿瘤在多数发 达国家中其发病率占男性常见恶性肿瘤的首位在女性常见恶性肿瘤中占第二、三位。 在北美以及全欧洲国家肺癌已成为男性最常见的癌症死因同时在亚洲、拉丁美洲和 非洲的发展中国家癌症死因中也日趋上升。我国肺癌发病人群主要分部在华东沿海 华北及东北工业发达的城市和地区近年肺癌发病率及死亡率亦呈上升趋势有报道表 明年年我国肺癌发病人数增加万死亡人数增加万。肺癌已成为我国最常见、增幅最 大的恶性肿瘤。吸烟是肺癌最主要的致病原因。肺癌根据其病理学形态可分为非小 细胞肺癌和小细胞肺癌。其中非小细胞肺癌约占肺癌总数的其又可分为鳞癌、腺癌、 大细胞癌及鳞腺癌小细胞肺癌约占肺癌总数的。 研究表明在正常肺的肺神经内分 泌细胞中可观察到神经内分泌的特征性表型大部分神经内分泌的特异性肽产物包括 脱羧基酶嗜铬素突触素细胞浆大量的核心颗粒突触蛋白神经细胞黏附分子神经特异 性烯醇化酶 蛋白 以及甲状腺转录因子 均可作为肺细胞神经内分泌表型的 特征性产物。除了正常的肺神经内分泌细胞外一些肺癌细胞也具有神经内分泌的特 性主要包括类癌、大多数小细胞肺癌及以大细胞癌为主的一部分非小细胞肺癌。肺 神经内分泌细胞可以单个或细胞小群体的形式存在在胎儿后期和产后早期大量存在 但在成人肺中相对较少从而表明这些神经内分泌细胞的分泌在肺的胚胎发育及肺细 胞成熟过程中发挥了重要作用。但目前尚不了解哪个遗传程序诱导肺与肺癌的神经 内分泌细胞分化仅在果蝇及脊椎动物的实验中发现螺旋环螺旋型转录因子家族在神 经元的定向及分化中发挥关键作用。当经反义寡聚核苷酸清楚肺癌细胞中的转录因子时可显著降低神经内分泌标志物的表达。 5虽然肺癌神经内分泌的基因研究并不成功但很多学者在临床工作中发现具有神经内分泌特性的肺癌的生物学行为较不具有神经内分泌功能的肺癌更为恶性因此对低分化肺癌细胞中神经内分泌特性的研究工作在国外已初步开展但在国内这方面的研究仍较少本课拟通过免疫组化检测临床病例回顾和随访数学统计分析等方法对低分化肺癌进行神经内分泌表达的标志物检测和生物学行为的研究从而比较具有神经内分泌特性的肺癌与不具有神经内分泌特性的肺癌在肺癌生物学行为及预后方面的异同点为进一步的临床工作提供依据。 6资料与方法 临床资料 病理标本 选择年月至年月在我院就诊的原发性肺癌患者中的小细胞肺癌和大细胞肺癌标本经镜检明确诊断包括手术切除标本、支气管镜活检标本及肺穿刺活检标本其中小细胞肺癌共例大细胞肺癌例。 回顾资料 通过手术探察病理检查影像学检查等手段对以上病理标本来源的例患者进行肿瘤的临床分期并对患者生存期进行随访。 肺癌组织细胞的免疫组织化学检测 肺癌组织细胞嗜铬素的免疫组织化学染色检测 将福尔马林固定的肺癌石蜡组织切片经二甲苯脱蜡和梯度酒精 脱水后用的柠檬酸缓冲液微波处理分钟。接着用 分钟阻断内源性过氧化物酶。切片用牛血清处理和 洗涤后与抗 在室温下过夜反应。切片经洗涤后加 兔 在室温下孵育分钟。最后用显色至分钟。同时我们选用一例肾上腺嗜铬细胞瘤作为阳性对照用代替一抗作为阴性对照。其中 “”为阴性“?”为弱阳性“”为阳性“”为强阳性。选取典型的反应图像进行照片拍摄。 肺癌组织细胞神经特异性烯醇化酶Neuron-specific enolaseNSE的免疫组织化学染色检测 7将福尔马林固定的肿瘤组织切片经二甲苯脱蜡和梯度酒精 脱水后。接着用 分钟阻断内源性过氧化物酶。切片用牛血清处理和 洗涤后与鼠抗Neuron-specific enolase 在室温下过夜反应。切片经洗涤后滴加 鼠 在室温下孵育分钟。最后用显色至分钟。同时我们选用以往一例神经纤维瘤组织作为阳性对照用代替一抗作为阴性对照。其中 “”为阴性“?”为弱阳性“”为阳性“”为强阳性。选取典型的反应图像进行照片拍摄。 肺癌组织细胞蛋白 的免疫组织化学染色检测 将福尔马林固定的肿瘤组织切片经二甲苯脱蜡和梯度酒精 脱水后用 的胰蛋白酶 在室温下消化分钟。接着用 分钟阻断内源性过氧化物酶。切片用牛血清处理和 洗涤后与兔抗 在室温下过夜反应。切片经洗涤后滴加 兔 在室温下孵育分钟。最后用显色至分钟。同时我们选用以往一例神经鞘膜瘤作为阳性对照用代替一抗作为阴性对照。其中 “”为阴性“?”为弱阳性“”为阳性“”为强阳性。选取典型的反应图像进行照片拍摄。 肺癌组织细胞突触素的免疫组织化学染色检测 将用福尔马林固定的石蜡组织切片经二甲苯脱蜡和梯度酒精 脱水后用的柠檬酸缓冲液微波处理分钟。接着用 分钟阻断内源性过氧化物酶。切片用牛血清处理和 洗涤后与抗 在室温下过夜反应。切片经洗涤后加 鼠 在室温下孵育分钟。最后用显色至分钟。同时我们选用一例脑神经元性肿瘤作为阳性对照代替一抗作为阴性对照。其中 “”为阴性“?”为弱阳性“”为阳性 8“”为强阳性。选取典型的反应图像进行照片拍摄。 肺癌组织细胞甲状腺转录因子 的免疫组织化学染色检测 将福尔马林固定的肺癌石蜡组织切片经二甲苯脱蜡和梯 度酒精 脱水后用的柠檬酸缓冲液微波处理分钟。接着用 分钟阻断内源性过氧化物酶。切片用牛血清处理和 洗涤后与抗甲状腺转录因子 在室温下过夜反应。切片经洗涤后加 鼠 在室温下孵育分钟。最后用显色至分钟。同时我们选用一例甲状腺乳头状癌作为阳性对照用代替一抗作为阴性对照。其中 “”为阴性“?”为弱阳性“”为阳性“”为强阳性。选取典型的反应图像进行照片拍摄。 肿瘤分期及随访 肺癌临床分期 通过病史资料包括患者的手术资料、病理诊断资料、影像学检查资料的整理根据年肺癌分期对例患者进行肺癌临床分期并根据文献报道将患者分为早期期、中期期、晚期期。 生存期随访 通过电话访问短信询问等方式了解患者自发病以来的病情变化并对患者的生存期进行随访。本课题所研究的患者为年年所确诊的患者因此本课题中以从确诊之日起的一年生存率作为患者预后分析的依据。 数据统计分析 利用统计软件对数据进行卡方检验分析时认为有统计学意义 9时认为有显著统计学差异。阳性率阳性数样本总数。样本阳性数强阳性标本数阳性标本数弱阳性标本数。 10结 果 免疫组织化学染色结果 肺大细胞癌染色光镜下见瘤细胞大胞浆丰富核浆比例低染色质呈泡状常见核仁有时可见异型巨细胞见图图。肺小细胞癌染色光镜下见较小的癌细胞胞浆少细胞界限不清核染色质呈细颗粒状见图图。 图 肺组织内见大细胞癌浸润× 图 异型巨细胞的病理性核分裂象× 11 图 肺组织内见肿瘤细胞浸润× 图 癌细胞有明显异型性可见病理性核分裂相 × 肺癌组织细胞嗜铬素免疫组织化学染色结果 嗜铬素免疫组化染色阳性反应定位于细胞浆和细胞核中光镜下可见铁苏木苏染色的蓝色背景中呈均匀分布的棕黄色颗粒。 12本组样本中例肺大细胞癌标本嗜铬素免疫组织化学染色均呈阴性反应见图。例肺小细胞癌标本中嗜铬素免疫组织化学染色呈强阳性反应为例阳性反应见图图为例弱阳性反应为例阴性反应为例。 见表 图 大细胞肺癌呈阴性反应 × 表嗜铬素免疫组化结果 肺大细胞癌 肺小细胞癌 强阳性 阳性 弱阳性 阴性 13 图 小细胞癌呈阳性反应 × 图 小细胞癌呈阳性反应 × 14 肺癌组织细胞神经特异性烯醇化酶Neuron-specific enolase免疫组织化学染色结果 神经特异性烯醇化酶免疫组化染色定位于细胞浆光镜下可见苏木苏淡染的背景中在细胞浆中呈深浅不一棕黄色颗粒状的不均匀分布。 本组样本中例肺大细胞癌标本神经特异性烯醇化酶免疫组织化学染色呈强阳性反应为例阳性反应见图为例弱阳性反应为例阴性反应见图为例。例肺小细胞癌标本中神经特异性烯醇化酶免疫组织化学染色呈强阳性反应见图为例阳性反应为例弱阳性反应为例阴性反应见图为例。见表 图 大细胞癌呈阳性反应 × 表神经特异性烯醇化酶免疫组化结果 肺大细胞癌 肺小细胞癌 强阳性 阳性 弱阳性 阴性 15 图 大细胞癌呈阴性反应 × 图 小细胞癌呈强阳性反应 × 16 图 小细胞癌呈阴性反应 × 肺癌组织细胞蛋白免疫组织化学染色结果 蛋白的免疫组化染色定位于细胞质和细胞核光镜下呈弥漫均匀分布深浅一致的棕黄色。 本组样本中例肺大细胞癌标本蛋白免疫组织化学染色呈强阳性反应见图为例阳性反应为例阴性反应为例未检出弱阳性反应标本。例肺小细胞癌标本中蛋白免疫 组织化学染色呈强阳性反应见图为例阳性反应为例弱阳性反应为例阴性反应为例。见表 表蛋白免疫组化结果 肺大细胞癌 肺小细胞癌 强阳性 阳性 弱阳性 阴性 17 图 大细胞癌呈强阳性反应 × 图 小细胞癌呈强阳性反应 × 18 肺癌组织细胞突触素免疫组织化学染色结果 肺癌细胞突触素免疫组化染色定位于细胞浆光镜下呈大片状或局灶性分布 的褐色。 本组样本中例肺大细胞癌标本突触素免疫组织化学染色呈强阳性反应为例阳性反应见图为例弱阳性反应为例阴性反应为例。例肺小细胞癌标本中突触素免疫组织化学染色呈强阳性反应为例阳性反应见图为例弱阳性反应为例阴性反应为例。见表 图 大细胞癌呈阳性反应 × 表突触素免疫组化结果 肺大细胞癌 肺小细胞癌 强阳性 阳性 弱阳性 阴性 19 图 小细胞癌呈阳性反应 × 肺癌组织细胞甲状腺转录因子 免疫组织化学染色结果 肺癌细胞甲状腺转录因子的免疫组化染色定位于细胞核中光景下呈均匀分布的红褐色颗粒。 本组样本中例肺大细胞癌标本甲状腺转录因子免疫组织化学染色呈强阳性反应为例阳性反应见图为例弱阳性反应为例阴性反应见图为例。例肺小细胞癌标本中甲状腺转录因子免疫组织化学染色呈强阳性反应见图为例阳性反应为例弱阳性反应为例阴性反应见图为例。见表 20 图 大细胞癌阳性反应× 表甲状腺转录因子免疫组化结果 肺大细胞癌 肺小细胞癌 强阳性 阳性 弱阳性 阴性 21 图 大细胞癌阴性反应× 图 小细胞癌强阳性反应× 22 图 小细胞癌阴性反应× 肺癌临床分期及预后结.