高纯度人绒毛膜促性腺激素的提取

高纯度人绒毛膜促性腺激素的提取 ()第 18 卷第 4 期 V o l. . 18 N o. 4 自然科学泉州师范学院学报 () 2000 年 7 月Jo u rn a l o f Q u an zho u N o rm a l Co llege N a tu ra l Sc ien ce J u l. 2000 () 文章编号: 1008- 4924 200004- 0045- 03 高纯度人绒毛膜促性腺激素的提取 1 1 1 2 1 吴文林, 刘怀如, 吴文杰, 苏维娜, 庄建守 (1. 泉州师范学院生物系 福建 泉州 362000; )2. 福建医科大学附属第二医院妇产科 福建 泉州 362000 摘 要: 研究从人工流产物中提取人绒毛膜促性腺激素的方法影响因素. 结果表 层析提纯, 可从人工流产物中获得高活 52 明, 通过乙醇沉淀粗提, 乙酸铵沉淀法、D E - 性的 .H C G 关键词: 人工流产物; ; 乙醇沉淀; 乙酸铵沉淀; 52 层析 H C GD E + 中图分类号: 575. 12 文献标识码: Q A () 人绒毛膜促性腺激素 是妇女在妊娠时由胎盘滋养层细胞合成和分泌的一种糖蛋 H C G 白激素. 它的化学结构同 、、相近, 都由 链和 链两个亚基组成, 其中 链共用, F SHL HT SH ΧΒΧ而 链决定 的特异性. 临床上可用于治疗习惯性流产、不孕症、性功能障碍及侏儒症, 也 ΒH C G 可用于皮胚搔痒症、神经性皮炎等. 传统 的生产方法是从孕妇尿中提取, 但尿中 的H C G H C G 含量低, 尿液收集困难, 易腐败, 提取效率差. 而人工流产物中 的含量高, 易收集. 本研究 H C G 旨在探索从人工流产物中分离并纯化 的技术途径.H C G 1 材料与方法 1. 1 主要试剂和器材 - 1 - 1 - 1 95% 乙醇, 3?ƒ15?醋酸缓冲液 5. 1, 0. ?磷酸缓 1, 1=005m o lm o lL H C L pH m o lL ) (冲液苯甲酸钠, 高岭土, - 52 进口分装, 离心机, 层析柱, 全自动高效微 = 7. 0pH D E w h a tm an () 粒子化学发光免疫分析仪 拜耳公司, 福建医科大学附属二院核医学科提供. 1. 2 粗制品的制取H C G 所有操作均在 0, 5?进行, 分别采用乙醇沉淀法、苯甲酸钠、吸附、高岭土吸附提取 H C G 粗制品 其工艺流程分别为:, A 乙醇沉淀法: 在人工流产物中加入 95% 乙醇, 使溶液中乙醇的浓度为 45% , 搅拌过夜, 次 收稿日期: 2000- 01- 19 () 基金项目: 泉州市科委资助项目 9873Z ( ) 作者简介: 吴文林 1969, , 男, 讲师, 硕士. - 1 日以 4000离心 30, 上清液用 3?调 至 4. 8 后, 加入 95% 冷乙醇使乙醇的 g m in m o lL H C l pH 浓度为 80% , 静置过夜, 次日仍以 4000离心 30, 用丙酮和乙醇脱水得沉淀物即为 g m in H C G 粗品 .A 苯甲酸钠吸附法: 在人工流产物中加入同体积的 95% 的冷乙醇, 搅拌过夜, 4000离心g - 1 30, 上清液每 100加 20苯甲酸钠, 溶解后用 30?调 至 3. 8, 4. 0, 静 mm m l g m o lL H C l pH 置, 吸滤, 得红色物, 压干, 压干物以每克加 95% 的冷乙醇 5m l 溶解, 静置过夜, 抽滤, 用乙醇脱 水得沉淀物即为 粗品 。H C G A - 1 高 岭 土 吸 附 法: 人 工 流 产 物 用 3?调 至 4, 5, 静 置 后 用 纱 布 过 滤, 每 m o l L H C l pH 100滤液中加入 30高岭土, 搅拌 1, 115 小时, 过滤, 将沉淀物压干, 每克压干物用 1? m l g m o l- 1- 1 - 1 、, 2溶解, 1?调 至 8, 9, 静置后过滤, 滤液用 3?调 1L N aC l m lm o lL N aO H pH m o lL H C l 至 5, 6, 然后加入五倍量的冷丙酮, 静置过夜, 4000离心 30, 乙醇脱水得沉淀物, 即 为 pH g m in 粗品 .H C G A 1. 3 H C G 的纯化 - 1 方 法 1: 用 115?, 5. 1 的 醋 酸 缓 冲 液 溶 解 粗 提 品 搅 拌 2, 4000离 心ƒ, m o l L pH A h g 20m in , 上清液中加入预冷 95% 乙醇, 使乙醇浓度达 80% , 再以 4000g 离心 20m in , 用丙酮和乙 醇对沉淀进行脱水处理, 得 精品 .H C G B 方法 2: 按每克粗品 加入 10% 乙酸铵溶液 300溶解、搅拌、离心、在上清液内缓慢加 A m l 入二倍量预冷的无水乙醇. 用冰乙酸调 至 3. 8, 4. 5, 放置过夜, 离心, 沉淀用乙醇脱水得 pH 精品 .H C G B - 1 用 0. 005?, 7. 0 的磷酸缓冲液溶解 品, 然后加到 纤维素柱上进行层 - 52 m o lL pH B D E 析, 收集液中加入预冷 95% 乙醇, 使乙醇浓度达 80% , 以 4000g 离心 40m in , 用丙酮和乙醇对 沉淀物进行脱水处理, 得 精品 .H C G C 2 结 果 () ( )表 1 不同方法提取 粗品的产量 和比活性 ƒH C G m gIu m g 乙醇沉淀法 苯甲酸吸附法 高岭土吸附法 ()批号 人流物 m l 产量 比活性 产量 比活性 产量 比活性 1 150 2045 62 2183 59 1958 54 2 120 1984 75 2011 64 1890 70 3 180 2237 68 2245 70 2089 63 4 150 2102 79 2049 60 2038 61 5 100 1916 83 1919 74 1878 65 6 90 1888 81 1901 74 1706 78 () ( )表 2 乙醇法和乙酸铵法提取 精品 的产量 和比活性 ƒ H C G B m g Iu m g 粗品 A 乙醇法 A 乙酸铵法 A 批号 质量 活性 产量 比活性 产量 比活性 1 1000 62 294 180 245 223 2 800 75 183 305 180 301 3 1000 79 210 330 204 351 4 1900 83 170 408 184 367 5 1100 68 219 331 185 384 评均产率 91. 5% 91. 2% 表 3 52 层析效果 D E - 品 品 B C 批号 产 率 ( ( ))比活性 比活性 ƒ ƒ 质量 m g Iu m g产量 m g Iu m g 1 290 180 16 2785 85. 4% 2 180 305 10 1915 89. 5% 3 200 330 11 5103 85. 1% 4 170 408 13 4819 91. 4% 5 200 331 12 5018 91% 3 讨 论 1 文献报道用 100孕妇尿抽提到 粗品的比活性为 800 ƒ时, 产量为 843, k g H C G Iu m g m g而我们用 0. 1的人流物抽提到 比活性为 4819 ƒ时, 产量为 13, 可见从人流物 k g H C G Iu m g m g取的 比从孕妇尿提取的 产量多 100 倍左右.H C G H C G 比较 的粗提方法, 乙醇沉淀法产量最高, 苯甲酸钠吸附次之, 高岭土吸附最差, 不过 H C G 苯甲酸钠吸附法工艺简单, 设备少, 也是一种可以接受的工艺. 在用乙醇沉淀法提取精制品时, 必须精确调准 值, 若 高于 4. 8, 则在对精提品进行纯化时, 血红蛋白和其它杂蛋白较难 pH pH 去除; 若 低于 4. 8, 的效价则会降低.pH H C G 对精提品 的提纯, 乙酸铵和乙醇法所得结果盯差无几, 两种方皆可使用, 在进行 -A D E - 1 52 柱层析时, 需精确配制 0. 005?的磷酸缓冲液, 样品上柱前一定要用此缓冲 7. 0 m o lL pH 液将 帄衡与缓冲液相同的 值.- 52 D E pH 参 考 文 献: ( ) 1 . [. , 1978, 56 2: 179, 192. S teven s V CImm uno lo g ica l app ro ach e s to fe r t ility regu la t io n J B u llc t in o f W HO ( ) 徐世文、潘菊芬, 邓为民, 等. 应用亲和层析获取高活性 的初步研究[. 免疫学杂志, 1998, 14 1: 32, 35.H C G J 2 ()下转第 83 页 历史时期, 教师队伍的建设是实施民族素质教育的根本保证. 从对师范院校毕业生的社会调查 看, 教学能力相对较差, 走出校门一时难于适应教学工作仍是普遍存在的问题. 究其原因主要 是师范生在校期间较偏重于专业知识的学习, 学校缺乏对他们进行课堂教学基本技能训练的 有力措施. 采用微格教学能够较好地解决这一困难问题, 为此, 建议我校大力推广开展微格教 学, 妥善安排, 以相对比较集中的时间和精力, 采用微格教学模式对师范生进行教学技能 的训练, 使他们尽快地提高教学能力和教学水帄, 成为合格的教师. A Br ief In troduc t ion of the M icro teach in g Y an Sh ao yan g ()- , , 362000, A ud io V isua l Sec t io nQ uanzho u N o rm a l Co llegeQ uanzho u C h ina : . A bstra c tM ic ro teach in g is a n ew m o de l o f t ra in in g teach in g tech n iqu e fo r no rm a l stu den t s , , In th is p ap e rw e in t ro du ce it s ex ecu t ive p ro g ram an d m a in fea tu re sa s w e ll a s su gge st to .deve lop m ic ro teach in g w ide sp read ly : ; ; ; ; Key word sm ic ro teach in gteach in g tech n iqu et ra in in gan a lo gu efeedb ack ()上接第 47 页 The M e thod s of Pur if y in g HCG 1 1 1 2 1 ,,, , W u W e lnin L iu H ua ilu W u W jeine Su W i nea Zhuang J ia snhog u (1. . , , 362000, ;D ep to f B io Q uanzho u N o rm a l Co llegeQ uanzho u C h ina )2. , 362000, Seco nd H o sp ita l A t tach ed to F u jian M ed ica l U n ive r sityQ uanzho u C h ina () : A bstra c tH um an cho r io n ic go n ado t rop h in H C G is an im po r tan t ho rm o n e in m a in ta in in g . , p regan cyCom p a red w ith th e c la ssica l p u r ify in g H C G f rom u r in ew e p u r if ied h igh ac t iv ity .H C G f rom th e t ra sh o f in du ccd abo r t io n 52 Key word s: t ra sh o f in du ced abo r t io n; H C G; p rec ip ita ted b y a lco ho l; D E - ch rom a t ro g rap h y