低能量激光照射对子痫前期大鼠血液流变学影响的实验研究

低能量激光照射对子痫前期大鼠血液流变学影响的实验研究 低能量激光照射对子痫前期大鼠血液流变学影响的实 验研究 南方医科大学 硕士学位论文 低能量激光照射对子痫前期大鼠血液流变学影响的实验研究 姓名:孙丽 申请学位级别:硕士 专业:妇产科学 指导教师:全松 20090415硕士学位论文 低能量激光照射对子痫前期大鼠血液流变 学影晌的实验研究 硕士研究生:孙丽 指导教师:全松教授 摘要 子痫前期和子痫是妊娠期特有的疾病,现为妊娠周以后出现高血压、 蛋白尿、水肿为主要特征的多器官功能损害的综合征,严重威胁母婴安全和 健 康,是导致孕产妇和围生儿死亡的主要原因之一,其病因和发病机制至今尚 不 完全清楚。目前普遍认为特发性小动脉痉挛、血管内皮损伤是子痫和子痫前期 发病机理的中心环节和基本特征。由于子痫前期和子痫的病因不明发病机理复 杂,临床预防和治疗无确切有效的药物,长期以来仍然以对症治疗为主,即解 痉、降压、扩容和预防各种并发症的发生,适时终止妊娠仍然是主要治疗手段, 因此,治疗效果差,治标不治本。鉴于既往研究表明是子痫前期发生、发 展的主要病理生理过程,采用不同的治疗方法对此进行干预,可望改善子痫前 期的预后。低能量激光照射可以改善微循环障碍,使血液流变学、血液动力学 以及红细胞功能等发生改变,已有学者将它用于的治疗,能有效阻止 的进展。但如今低能量激光照射治疗能否应用于产科的防治和治疗子痫前 期在国内外尚未见相关文献报道。本研究目的是通过建立稳定的子痫前期动物 模型,探讨低能量激光照射对子痫前期大鼠模型血液流变学的影响,减轻或防 止的发生,阻断子痫前期的病理生理发展过程,为子痫前期治疗寻找一种 新的有效的方法,以及为其今后进一步在临床应用该方法治疗子痫前期提供实 验依据。中文摘要 第一部分大鼠尾静脉注射小剂量内毒素建立子痫前期动物模型 目的 本研究目的是大鼠尾静脉缓慢注射小剂量内毒素. /建立大鼠子 痫前期动物模型。 方法 、实验动物 月龄的级大鼠只体重克,其中雌性大鼠只, 雄性大鼠只,购于南方医科大学实验动物中心。分笼饲养周后,随机选 择只雌性大鼠分别与只雄性大鼠:共笼,次日清晨取阴道分泌物检查 发现精子为妊娠第天,剩余只雌性大鼠不作受孕处理为对照组。 、子痫前期大鼠动物模型的建立 参照叫及汪雪雁乜的子痫前期大鼠动物模型制作方法,妊娠第用 大鼠固定笼固定大鼠,尾部暴露在外,分别对实验组及对照组大鼠用输液泵 经 尾静脉缓慢注入内毒素. /、生理盐水,我们配置的溶液为. /, 所以按/缓慢注射,空白组及空白对照组在同一天做相应处理。子痫前 期动物模型的:注射内毒素后血压升高、尿蛋白升高差异有统计学意义, 且表现为高血压、蛋白尿及炎症反应的激活,与子痫前期临床表现一致。 、动物分组及观测指标 本次实验中采用随机数字表法将大鼠共分为四组,每组只:?实验组 ,组: 妊娠第 受孕注射内毒素 鼠尾静脉缓慢注入内毒素. /;?对照组受孕注射生理盐 ,组:妊娠第鼠尾静脉缓 慢注入生理盐水/:?空白组非孕注射生理盐水 ,组:鼠尾静脉缓慢注入生理盐水/;?空白对 照组非孕注射内毒素组? ,组:鼠尾 静脉缓慢注入内毒素. /。实验组及对照组分别在妊娠第、、、 硕士学位论文 天测量血压值,妊娠第、、天收集小时尿液测量蛋白含量,妊娠 第、天大鼠尾静脉抽血测血清中、、、及全血粘度值,妊 娠第天在戊巴比妥钠麻醉下剖宫取胎同时计数仔鼠数量、体重及胎盘湿重。 空白组及空白对照组也分别在于实验组和对照组相应的时间内做相同的处 理。 、统计学处理 所有数据均应用.统计软件分析,计量资料用均数?标准差 ?表示,每组不同时间点比较采用重复测量方差分析 ,分组因素的单独效应分析采用完全随机设计资料的方 ,多重比较满足方差齐性检验时采用 差分析 法,不满足方差齐性检验时采用’ 法,组内配对计量资料的比较采 ,仔鼠数量采用非参数检验。以 用配对检验 .表示差异有统计学意义。 结果 、小剂量内毒素对血压、尿蛋白的影响 .各组间基础尾动脉收缩压无显著差异,实验组血压与妊娠第 天逐渐升高与其余三组相比差异均有统计学意义.,而对照组、空白组、 空白对照组相比无显著差异。 .各组间基础尿蛋白含量差异无统计学意义.;实验组妊娠 第天开始尿蛋白含量逐渐升高与其余三组相比差异均有统计学意义 .,而对照组、空白组、空白对照组相比差异无统计学意义.。 、小剂量内毒素对肝肾生化指标及血清的影响 .各组间基础肝肾生化指标比较差异均无统计学意义.。用药后 各组大鼠间、、比较差异有统计学意义.,用药后实验组、 、升高到.?./,.?./,.?./ 与用药前.?./,.?./,../相比差异 有统计学意义.,与其余三组相比差异有统计学意义.,其余 ?中文摘要 三组两两比较差异无统计学意义.。 .实验组和对照组基础血清比较差异无统计学意义., 用药后实验组血清升高为.?./与用药前.? ./相比差异有统计学意义,与对照组.?./相比差异 有统计学意义.。对照组注射生理盐水前后无显著差异。 、小剂量内毒素对全血粘度的影响 各组间基础全血粘度高切、中切、低切组间比较差异无统计学意义 .,用药前后全血粘度高切、中切、低切组内比较对照组、空白组、空白对 照组组内比较差异无统计学意义.,实验组差异有统计学意义 .。用药后组间比较四组差异有统计学意义.,两两比较实验组与 对照组、空白组、空白对照组差异有统计学意义.,对照组、空白组、 空白对照组差异无统计学意义.。 、实验组与对照组仔鼠数量、体重及胎盘湿重比较 两组间仔鼠数量差异无统计学意义.,实验组仔鼠重量及胎盘湿 重显著低于对照组组,差异有统计学意义.。 结论。 、小剂量内毒素孕鼠尾静脉缓慢注射可以引起高血压、蛋白尿等子痫前期 症状,达到子痫前期动物模型标准。 、子痫前期动物模型同时出现肝肾功能及血液粘度改变,仔鼠重量及胎盘 湿重也明显低于对照组。 第二部分低能量激光胸前区照射对子痫前期大鼠模型血液流变学影响的实 验 研究 目的 血管内皮细胞损伤、血管痉挛、微循环障碍以及发生是子痫前期和子 痫发病机理的中心环节,凝血功能的变化是子痫前期和子痫基本病理特征之 一。 硕士学位论文 由于血管痉挛,内皮损伤,组织缺氧,可引起血液流变学的改变。本研究目的 是观察低能量激光照射孕鼠子痫前期模型对血液流变学的影响,以及与子痫 前 期各种监测指标改变的关系。 方法 、动物模型的制作 动物模型制作方法同第一部分,雌性级孕鼠只,随机分为四组: 实验组组及实验对照组组各只,妊娠第尾静脉注入内毒素 /:空白组组及空白照射组组各只,妊娠第尾静脉注入 生理盐水。 、实验方法 实验组及空白照射组于妊娠第天开始低能量激光胸前区照射治疗,每次 分钟,每天一次,一直持续到妊娠第天。分别采用不同剂量功率进行照射 . 、. 、.,比较其对血液流变学指标的影响,我们发现当照射剂 量为.时血液流变学指标改变最明显。因此我们采用.进行低能量激 光胸前区照射治疗,并比较其疗效。 、观测指标 妊娠第、、、天测量血压值,妊娠第、、天收集小时 尿液测量尿蛋白含量,妊娠第天大鼠尾静脉抽血测血清中、、及全 血粘度值,妊娠第天在戊巴比妥钠麻醉下心脏取血测血清中、、 及部分血液流变学指标,同时计数仔鼠数量、体重及胎盘湿重。 、统计学处理 同第一部分 结果 、低能量激光照射对血压、尿蛋白、肝肾生化指标的影响 .各组间基础差异无统计学意义.;妊娠第天实验组与 实验对照组升高分别为.?.,.?.,与空白 中文摘要 组...相比,差异有统计学意义.;妊娠第天 实验组、实验对照组、空白组、空白照射组为.?.,. ?.,.?.,.?.,四组间两两比较实验组与 实验对照组、空白组差异有统计学意义.,空白组与空白照射组差异无 ?. 统计学意义.;妊娠第天实验组降低到. 与实验对照组相比,差异有统计学意义.,实验组与空白组,空白组与 空白照射组相比,差异均无统计学意义.。 .各组间基础尿蛋白含量差异无统计学意义.;妊娠第 天实验组与实验对照组尿蛋白含量升高分别为.?./,. ?./相比差异无统计学意义.,与空白组.? ./相比差异有统计学意义.;妊娠第天实验组尿蛋 白含量下降.?./,实验对照组继续升高.?./, 两组相比差异有统计学意义.,实验组与空白组相比差异无统计学意义 .,空白组与空白照射组相比差异无统计学意义.。 .各组间基础、、差异均无统计学意义.;照射后实 验组、、分别为.?./,.?./,.? ./与实验对照组.?./,.?./,.? ./相比差异均有统计学意义.;照射后空白组、、 与空白照射组相比,差异均无统计学意义.。 、低能量激光照射对血液流变学的影响 各组间基础全血粘度高切、中切、低切组间比较差异均无统计学意义 .;照射前后全血粘度高切、中切、低切组内比较实验组、空白组、空白照 射组差异均无统计学意义.,实验对照组差异有统计学意义.; 照射后组间比较四组差异有统计学意义.,两两比较实验组.? .,.?.,.?.与实验对照组.?.,.?., .?.差异有统计学意义.,空白组..,.?., 硕士学位论文 .?.与空白照射组.?.,..,.?.差异无 统计学意义.。照射后血浆粘度组间比较四组差异有统计学意义 .,两两比较实验组.?.与实验对照组.?.差异有 统计学意义.,空白组.?.,与空白照射组.. 差异无统计学意义.。照射后红细胞压积组间比较四组差异有 统计学意义.,两两比较实验组.?.%与实验对照组. ?.%差异有统计学意义.,空白组.?.%与空白照 射组.?.%差异无统计学意义.。 、低能量激光照射后对仔鼠数量、体重及胎盘湿重的影响 四组孕鼠间仔鼠数量差异无统计学意义.:实验组与实验对照组 仔鼠重量和胎盘湿重有显著性差异,差异有统计学意义.;空白组与空 白照射组仔鼠重量和胎盘湿重差异无统计学意义.。 结论 、低能量激光胸前区照射子痫前期大鼠模型能影响血液流变学,使血压、 尿蛋白降低,改善肝肾功能、仔鼠预后。 、低能量激光胸前区照射子痫前期大鼠模型改善指标:全血粘度、血浆粘 度、红细胞压积与实验对照组相比降低有明显差异,与空白组相比无明显差 异; 血压、尿蛋白明显降低与实验对照组相比存在明显差异;血清、、与 实验对照组相比存在明显差异;仔鼠重量明显升高。为今后临床应用提供动 物 实验依据。 关键词 子痫前期动物模型激光胸前区照射血液流变学 硕士学位论文 ? ? ‘一‘。: :? ? ,. , 砌. . , .,,, ,, , .,, . ?,?.. , . ., ../ . ,,. , 州,,..【 .. , , 硕士学位论文,./, . ./, /,。 .: , , ,,,、 .., , . ? , : , .“/;? , , : /;? : /;? , ? ./. : , , , , , , ,,一 ,,‘, , . ,, 狐 . . . , 硒锄士 ? , , ’ , ,.., . . . , . . ., , ?’ ,. ., .;, ‘ 舶 ., .’ , , .. .吨硕士学位论文 ..、 . 、 ., , 。 ’ ’, . /,../,. ./诵. . ./,. ./,. / ., ., .. . ., . ./ .. ./ ./.. . ... , ,, .. .. ., , , ., , , ...., .. . , .. . . ? , ,,., .,.谢 , . . .:硕士学位论文 ,谢 ’; 烬/ ’, 、枥 ’ .. , . . ,.,.,, ., ., . ?, . . : , , , , ,, ’ , ,,、丽 , . ..? ,. .;, .. ., ., .. .;, , , . ., ..,. .,. . ,,.. . ; ,. ..、, ,.,, ., . . . ; . ./,. ./., . ./;.. /,. ./,., ., .. . ,,;,, 硕士学位论文 ./,. ./,. ./ ../,. ./, 埘 . ../ .; ,,, .. . . . , 曲 , ,. , , .; . , . .,. .,. . . ,. .,. . . . ., .,. ,. . . . .. .,. ,. .. ., . . . .., ., . . . ..., . .% . .%., . .%. .% ..望:. . ??????????’???????????一一一 . ,一.;,.; ... , , ..; 。 . : , ,,, ; ?面锄 , . ,,, ;: ; .: 硕士学位论文 中英文缩略词对照表 原创性声明 南方医科大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明:所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的 研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外,本论文不包含任何其他个 人或 集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体, 均 已在文中以明确方式标明.除与外单位合作项目将予以明确方式规定外,本 研究 已发表与未发表成果的知识产权均归属南方医科大学. 本人承诺承担本声明的法律效果. 日 日期: 年 月 作者签名: 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保 留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和 借 .本人授权第一军医大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数阅 据库 进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本学位论文属于请在以下相应方框内打。/”: 、保密口,在一年解密后适用本授权书. 、不保密口. 日期: 年 月 作者签名: 日 期: 年 月 导师签名:舱硕士学位论文 前 言 子痫前期和子痫是一种常见的,严重威胁母 婴安全的妊娠期特有疾病,发病率我国为.%,国外报道?%口。其主要特 征为高血压、蛋白尿、水肿及多器官功能损害,目前仍是孕产妇和围生儿死亡 的重要原因之一,其病因至今尚未明确。研究表明血管内皮细胞损伤是子痫前 期和子痫发病机理的中心环节,特发性小动脉痉挛是子痫前期和子痫基本病理 特征。由于血管痉挛,内皮受损,组织缺氧,可诱发慢性弥散性血管内凝血, 进一步可导致身体主要脏器的结构损害和功能衰竭嘲。有研究表明孕周以前 发病,围生儿死亡率和孕妇并发症发病率分别超过%和%,故应积极适时 终止妊娠。同时大量临床实践表明的早期检测与治疗对于阻止子痫前期 和子痫的进一步发展非常重要,适时终止妊娠是目前临床上主要治疗手段。若 子痫前期得不到及时诊治,病情进一步恶化,常常并发子痫、胎盘早剥、产后 出血、休克,促使慢性转化为急性,增加了母婴病死率呻。随着人们对 本病基本病理生理过程认识的提高,进行早期对子痫前期的病因、发展过程进 行干预治疗,能有效控制病情发展及恶化,降低母婴死亡率。 低能量激光照射应用于临床多种疾病的治疗,取得较好疗效,逐渐形成一门 新兴的医学??激光医学。鉴于低能量激光血管照射可以改善微循环障碍,改 变血液流变学性质,血液动力学以及红细胞功能等,故用于治疗,能有效阻 止的进展。但目前低能量激光照射治疗用于子痫前期的防治在国内外尚未 见相关动物和临床研究报道。 国内外研究现状 由于子痫前期和子痫的发病机理复杂,直到今天,国内外各种临床治疗方案 都是在如何保证母亲安全与延长胎龄、尽可能降低胎儿和新生儿并发症的发病 率和死亡率中寻找平衡。目前子痫前期的治疗仍然以对症治疗为主,即解痉、 降压、扩容和预防孕产妇各种并发症如、脑血管意外、肝肾功能损害等;同前言 时尽量延长胎儿的胎龄,降低胎儿和新生儿并发症,保证胎儿和新生儿的健康旧。 因此,适时终止妊娠仍然是主要治疗手段。近年来,在子痫前期和子痫治疗方 面,特别是降压药的选择、硫酸镁的使用等问题上都有一定的进展们。而在抗 。另一抗凝治 凝治疗中目前常规仍用肝素,且使用剂量及时间需要慎重考虑?。 疗药物蛋白为肝内生成的、系维生素依存性生理性凝血抑制因子,属 丝氨酸蛋白酶,相对分子质量约,为单链糖蛋白。蛋白和蛋白以及凝 血酶调节蛋白,组成血浆中重要的凝血反馈抑制系统。 经凝血酶活化后,可降解活化的 和?,在血液凝固过程中担任重 要的负反馈机制,在临床应用中疗效较好训。倘若能够在已有的研究基础上 开 展新的治疗手段,控制所引起的凝血功能障碍是非常有意义的。是指在 某些诱因作用下,微循环发生广泛的血小板凝集和纤维蛋白沉积或血液凝固, 使微循环内广泛而散在地发生血栓,导致血小板和凝血因子大量被消耗,继发 纤维蛋白溶解亢进,从而引起以凝血功能障碍为主要特征的病理过程钔。 低能量激光血管内照射血液是年代初期发展起来的一种新的治 疗方法。它通过光导纤维将低能量激光导入血管内直接照射循环血液,具有广 泛而良好的生物学效应及临床疗效钔。首先是前苏联将其用于治疗心脑血管和 支气管哮喘等,发展到今天,低能量激光穴位及血管内照射治疗已应用于临床 多种疾病,如血管神经性头痛、冠心病、心绞痛、面瘫、痛经等妇科疾病、肩 周炎、颈椎病、儿童弱视、周围神经系统疾病、恶性肿瘤、精神分裂症、失眠 等,疗效显著,至今尚未发现有任何副作用蝴。其生物学效应表现为光学效应 及电磁场效应阻?。实验证实弱激光作用于细胞光子受体,高剂量红光 .?.兴奋细胞跨膜信号传导中的蛋白,使腺甘酸环化酶活 力增强,催化合成,故使血液和细胞内升高。低剂量红光 .?.兴奋蛋白,激活鸟苷酸环化酶,使合成,故 增高。诱导的基因表达可调节许多重要的细胞生理活动。低能量激光 血管内照射所产生的生物能量是通过血液循环流动到全身的,因此对血液及循 硕士学位论文 环系统的影响较多:红细胞聚集性升高是引起血液粘度升高的主要原因,是体 内血栓形成的危险因素之一。低能量激光血管内照射可通过降低红细胞聚集性、 红细胞压积、纤维蛋白原含量及血小板聚集率,从而降低血液的高凝状态。其 机理可能为:光量子首先作用于红细胞,特别是细胞膜,通过光化学作用,提 供相应的能量,离断异常结合的非共价键,提高和恢复膜的活性、恢复通道蛋 白与载体蛋白的正常构象,以改善和维持细胞的正常代谢、正常骨架蛋白构象 的重建,使红细胞表面恢复带电状态,导致红细胞解聚而血液流变性质降低。 红细胞的变形能力是影响血液微循环重要因素。低能量激光能够改善脂蛋白色 谱,使红细胞膜的磷脂成分增加、磷脂和胆固醇比值正常化,使红细胞的变形能 力增强。低强度激光照射对红细胞膜的生物学效应是一个综合过程,其对膜脂、 膜蛋白、膜糖类及膜电荷的作用是相互联系在一起的,其总的生物学效应也是 各方面的综合。就其本质来说,激光与各种膜组分作用的实质是光子与这些物 质的相互作用,以及由这些作用所引起的光化学效应,涉及多种酶的改变。若 要从根本上弄清这些问题,需要物理、化学、生物等多学科的知识交叉,尤其 是物理中的光量子理论来进行解释光与生命物质是如何相互作用的。但激光治 . 疗所表现的生物学效应其确切机制还不明了,有待进一步研究。 改变血液流变学性质,血液动力学以 低能量激光照射可以改善微循环障碍, 及红细胞功能等,也用于的治疗,能有效阻止的进展,可使血流速度 加快,血液粘度改善;阻止血小板减少和红细胞比积降低;阻止红细胞破碎和 血沉加快;减少组织器官内微血栓形成乜猢。低能量激光照射能否应用于产科 的防治和子痫前期的治疗,等待对此进行探讨和研究。 本研究的意义 首先本研究拟用小剂量内毒素建立子痫前期大鼠为模型,此模型是国内外已 有文献报道的稳定的子痫前期动物模型,多采用此方法,所建立的子痫前期动 物模型已被广泛用于子痫前期的研究瞰。其次在建立动物模型的基础上对其进 行低能量激光照射治疗,观察低能量激光照射对子痫前期大鼠动物模型血液流 前言 变学指标的影响。根据大量的文献报道我们分别对子痫前期大鼠模型进行了血 管内照射、鼻腔内照射和胸前区照射治疗,并在照射的过程中根据疗效不断的 对照射剂量、照射时间进行调整。由于动物本身的限制,大鼠尾静脉管径狭小, 穿刺困难,且不利于反复穿刺;鼻腔内照射可以起到与血管内照射相同的疗效, 因鼻粘膜较薄,血管丰富,但是大鼠难以固定,不能有效的进行连续性照射, 从而影响照射结果。通过反复的实验我们最后选定了一种创伤小、易于操作、 疗效好的方法低能量激光大鼠胸前区照射治疗,照射剂量为.,时间为 /次,每日一次,直至第天妊娠结束,并对疗效进行评估,尤其在血 液流变学指标方面进行比较,取得了理想的结果。我们希望能够在动物实验成 熟的基础上,将其推广至临床子痫前期的治疗中,为临床医生治疗子痫前期提 供动物实验依据。 硕士学位论文 第一部分大鼠尾静脉注射小剂量内毒素建立子痫前期动 物模型 与方法 一、实验动物 、实验动物的选择 大鼠是医学动物实验中常见的动物之一,月龄时性成熟,为全年多发 情动物,发情周期,易于受孕。大鼠妊娠期为天,平均天,便于 选择相同妊娠时期的动物。通常动物实验中测量血压的方法分为有创和无创两 种,有创测量方法是通过颈动脉或股动脉等血管内插管计数血压变化,该方法 但是由于这种方法是有创的,长的优点是可以获得一个连续的血压变化值, 期 留置容易凝血堵塞,所以通常用于急性实验;无创测量方法目前仅有的是大鼠 尾动脉测量法,重复性好,所以常用于慢性实验,恰好适合我们的实验要求。 、培养孕鼠 选用级成年性成熟健康雌性大鼠只,体重克,雄性大鼠 只,体重?克,由南方医科大学动物实验中心提供。在室温、 相对湿度%%的环境中饲养,不控制饲料和饮水,分笼饲养天,按完全随 机分组法将只雌性大鼠和只雄性大鼠:同笼饲养,次日早晨:取 阴道分泌物镜检,发现精子为妊娠第天,妊娠后大鼠单笼饲养,另外只雌 性大鼠不作受孕处理作为对照组。 二、实验仪器和试剂 一实验仪器 、大鼠固定器 机能学教研室提供 、大鼠手术台 机能学教研室提供 、大鼠标准代谢笼 机能学教研室提供 、哺乳动物手术器械套 机能学教研室提供第一部分大鼠尾静脉注射小剂量 内毒素建立子痫前期动物模型 、生物医学信号采集处理系统北京微信斯达科技发展有限公司 、全自动生化分析仪一 、高速离心机 科大创新股份有限公司中佳分公司 、半导体激光血管内照射治疗仪 顺德市中强医疗器械有限公司 、?冰箱 青岛海尔集团 、血液粘度仪一 北京世帝科学仪器公司 二实验试剂 、精制内毒素 美国?公司 、 试剂盒 深圳晶美生物有限公司 、福尔马林溶液 机能学教研室提供 、%戊巴比妥钠 机能学教研室提供 、.%肝素 机能学教研室提供 、.%生理盐水 机能学教研室提供 、、、试剂 机能学教研室提供 三、动物模型的建立 将受孕的只大鼠随机分为组,每组只,妊娠第天实验组、 对照组分别沿尾静脉注射内毒素、生理盐水。非孕的只雌性大鼠随机 分为组,每组只,空白组、空白对照组同时间注射生理盐水、 内毒素。参照及汪雪雁瞳的子痫前期大鼠模型制作方法。妊娠第用 大鼠固定笼固定大鼠,尾部暴露在外,分别对实验组及空白对照组大鼠用输 液 泵经尾静脉缓慢注入内毒素 /,我们配置的溶液为. /,所以按 /缓慢注射,对照组及空白组在同一天做相应处理,生理盐水按/ 缓慢注射。子痫前期动物模型的标准:注射内毒素后血压升高、尿蛋白升高 差 异有统计学意义,且表现为高血压、蛋白尿及炎症反应的激活,与子痫前期临 床表现一致。 四、动物模型的观察指标 硕士学位论文 、血压测量 实验组、对照组分别于妊娠第、、、天测量血压,方法:测量时 间为上午:到:之间,先将大鼠放入特制的大鼠固定器内,将尾巴加 热用吹风机局部加热直至血压测量仪出现血压波形,待其安静以后测量尾 动脉收缩压,分钟内连续测量次,取平均值。空白组、空白对照组也分别在 相应时间内做相同处理,血压值。 、尿蛋白测量 实验组、对照组分别于妊娠、、天将孕鼠置于标准代谢笼内收集 小时尿量,不控制饮食、饮水。空白组、空白对照组也分别在相应时间内做 相 同处理。用全自动生化分析仪测尿蛋白含量。 、血清、、及全血粘度的测定 实验组、对照组分别于妊娠第、天将孕鼠放入固定器内,待其安静后 用号半的静脉针沿尾静脉抽血,.置于肝素预处理好的抗凝管中送检 全血粘度,剩余.室温离心,取血清用全自动生化分析仪测、、 , 试剂盒测。空白组、空白对照组也分别在相应时间内 做相同处理。 、孕鼠及仔鼠的处置及观察指标 妊娠第天在戊巴比妥钠麻醉下,剖宫取胎,记录仔鼠的体重、数量、胎 盘湿重。 、统计学分析 所有数据均应用.统计软件分析,计量资料用均数?标准差 ?表示,每组不同时间点比较采用重复测量方差分析 ,分组因素的单独效应分析采用完全随机设计资料的方 差分析 ,多重比较满足方差齐性检验时采用 法,不满足方差齐性检验时采用’ 法,组内配对计量资料的比较采 用配对样本检验 ,仔鼠数量采用非参数检验。以 第一部分大鼠尾静脉注射小剂量内毒素建立子痫前期动物模型 .表示统计学上有显著性差异。 结果 一、小剂量内毒素对血压、尿蛋白的影响 .各组间尾动脉收缩压的比较 四组间用药前基础尾动脉收缩压波动在一,差异无统计 学意义.,.,提示各组动物有可比性。妊娠第天实验组和 空白对照组注射实验室配置的内毒素/,对照组和空白组注射生理盐水 /后,妊娠第天实验组血压升高到.?.,与其余三 组相比,差异均有统计学意义.。妊娠第天实验组血压继续升高到 .?.,与其余三组相比,差异均有统计学意义.。妊娠 第天实验组血压升高到.?.,与其余三组相比,差异均有统 计学意义.。对照组、空白组、空白对照组两两相比差异均无统计学意 义.。从四组大鼠血压变化分析,内毒素能够引起孕鼠血压升高,并持 续在一个较高水平,对非孕鼠无此作用。见表卜及图卜. 表卜不同时间点各组鼠尾动脉收缩压的比较一?, : .. ,.;: ,.:: 木:交互效应。 硕士学位诗文 耋 并组鼠尾动脉收缩压均致的变化趋势 三乏三姜 \目目山曲? ?????帅? 第天 第天 第天 第天 时间分布趋势 .各组间尿蛋白古量的比较 四组间基础屎蛋白含量差异无统计学意义.,.:妊 娠第天实验组尿蛋白含量升高到../,其余三组无明 显变化,实验组与其余三组相比,差异均有统计学意义.;妊娠第 天实验组尿蛋白含量继续升高到../,其余三组仍无明显 升高,四组总体尿蛋白含量差异有统计学意义.,.,且实验 组与对照组、空白组、空白对照组相比差异均有统计学意义仉。说明内 毒素能影响孕鼠肾脏功能,使孕鼠尿蛋白含量明显升高。而对非孕鼠无明显 影 响,用药前后屎蛋白含量无明显变化。见表卜及图。 表卜不同时间点各组屎蚩白含量?/的比较?, :, ,.: .: . 交互效麻。 第一部分走鼠尾静脉注射小荆量内毒素建立子痫前期动物模型 图.各纽尿蛋方含量/均数的比较 葛 曹 口天 ?天 删 口天 盎 嘲 嗤? ? 二、小剂量内毒素对肝肾生化指标及血清?的影响 .各组间血清肝肾生化指标的比较 用药前四组大鼠基础间、、?比较差异无统计学意义 .,.;】 .,.口 ,.。妊娠第 ., 天四组大鼠间、、?比较差异有统计学意义 .; :.,.; .,.,实验组、、均升高分别为 ? 几,】 ? /。 ? 岫/,与其余三组相比差异均有统计学意义..其余三组用药前 后无明显变化.两两比较测量值差异无统计学意义.。从上述指标可以 看出内毒素对孕鼠肝脏和肾脏功能都有损伤作用,造成不同程度肝肾功能的 变 化。见表卜到卜,图卜到硕士学位论文 表不同时间点各组血清/的比较?, : ,.:: ,.:: ,.. 牛:交互效应。 表卜不同时间点各组血清 /的比较?, : ,.::,.:: ,.. 木:交互效应。第一部分太鼠尾静脉注射小荆量内毒素建立子痈前期动物模 型 的比较彳?. / 表卜不同时间点各组后血清值: ..:: , : , :交互效应。 图各组注射前后血请/值均敷的比较 口天 ?天 /捌《醒目 舯??舯蚰加加 ?憎蕾 项士学位论文 圈各组注射前后血清值/均数的比较口天 口天 一/【。?一测?磐目 肌? 图吾组注射前后血清口值/均数的比较 芒 上 名 工 口天 ?天 趔 懊 鲁 加?舳蚰?如 【 们 各组间血清的比较 妊娠第天两组大鼠问基础血清?的比较差异无统计学意义 /, .,.:妊娠第天实验组血清有升高.? ? 与对照组 /相比差异有统计学意义.,.。 内毒素可以引起孕鼠血清一?的升高,说明?与子瘸前期的发生发展有 关。见表一,图卜第一部分太鼠尾静脉注射小刑量内毒素建立于痫前期动物 模型 表卜实验组与对照纽注射前后血清/?的比较霄?. 图实验组与对照组注射前后血清《咖均数的比较 鼍 口 日 【 垂 崮 天 天 三、小剂量内毒素对全血粘度的影响 妊娠第天各组大鼠基础全血粘度高切、中切、低切组间比较差异无统计 学高切.,.;中切.,.;低切., ,提示各组动物有可比性。妊娠第天与妊娠第天用药前后全血粘 度高切、中切、低切组内比较对照组、空白组、空白对照组组内比较差异无 统 , 计学.,实验组差异有统计学意义高切 ,中切 低切 。妊娠第天组间比较四组有统计学差异高切., ,.,两两比较 .;中切.,.;低切 全血粘度高切、中切、低切实验组与对照组、空白组、空白对照组差异有统 计硕士学位论文 学意义.。对照组、空白组、空白对照组差异无统计学意义.。 说明内毒素能影响孕鼠的全血粘度,使全血粘度升高,非孕鼠无变化。血液流 变学改变与子痫前期的发生发展有关。见表到卜,图到 表.实验组受孕注射内毒素注射前后全血粘度/比较一?, 表对照组受孕注射生理盐水注射前后全血粘度/比较一?, 表空白组非孕注射生理盐水注射前后全血粘度/比较?, 第一部分走鼠黾静脉注射小荆量内毒素建立于痫前期动物模型 表.空白对照组孕注射内毒紊注射前后全血粘度圬比较彳?, 图卜 组注射前后全血牯度/均数的比较 口注射前 口注射后 ?\剖鲁剞 『『:订 高切 低切 中切 圉. 组注射前后全血牯度/均数的比较 : 『二量; 口注射前 : 口注射后 挥 暑 们坩 高切 中切 低切硕士学位论文 图组注射前后全血粘度培均数的比较 一 上 口注射前 注射后 圈一组注射前后全血粘度,均数的比较 盎 ? 、, 口注射前 越 口注射后 摇 目 剞 高切 中切 低切 一第一部分太鼠尾静脉注射?、刑量内毒素建主干痫前期动物模型畦。;:高 切 :高切 .‘?;:中切 .劬惦;:低切 ,?低切 轴: ,‘;:中切 ,:高切、『 中切 ,队 .加.;:低切 图各组间注射前全血粘度耶均数的比较 笔 ?,???: 高切 中切 剖 舞 低切 目 图.各组问注射后全血粘度搬均鼓的比较 一自自 中切 匡至 低切 笔趟撂目书? 雌硕士学位论文 四、量内毒索对仔鼠数量、体重以及胎盘湿重的影响 实验组与对照组仔鼠数量、体重以及胎盘湿重比较,两组问仔鼠数量差异 无统计学意义.,.,实验组仔鼠重量显著低于对照组,差异 有统计学意义...,实验组胎盘湿重显著低于对照组,差 异有统计学意义 ,.。说明内毒素影响胎盘血供,对仔鼠 有害.使仔鼠生长发育缓慢,出现宫内生长受限。见表卜,图卜 表两组仔鼠及胎盘情况比较士. 图?两组仔鼠重量厦胎盘湿重均数情况比较. . 口 口 暑啊删 . . 仔鼠重量 胎盘重量