蛋白质含量的测定

蛋白质含量的测定 蛋白质浓度测定采用考马斯亮蓝染色法。这一方法基于考马斯亮蓝G-250在一定浓度的乙醇及酸性溶液中为棕红色，当它与蛋自质结合后，变为蓝色。测定方法非常简单，只要将蛋白质样品加到染料试剂中，通过测定595nm处光吸收的增加量可知其结合蛋白质的量。 考马斯亮蓝试剂的配制: 100mg考马斯亮蓝G-250溶于50mL 95%(V/V)乙醇中，加入100mL 85%(V/V)磷酸，用蒸馏水定容至1000mL，滤纸过滤。最终试剂中含0.01%(W/V) 考马斯亮蓝G-250，4.7%(V/V)乙醇，8.5%(V/V)磷酸。 测定方法: 取1.0mL样品液，加5.0mL上述考马斯亮蓝G-250溶液，室温静置2min，在595nm下测吸光度。根据OD值，从牛血清蛋白含量标准曲线中得出蛋白含量。 表4-1 蛋白质标准曲线的建立方法 Table 4,1 Standard cure of protein 试管编 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 号 标准蛋 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 白溶液 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 蒸馏水 考马斯 5ml 亮蓝 G-250 OD 0 0.130 0.199 0.260 0.310 0.367 0.432 0.436 0.492 0.542 0.542 595 0.7 0.6 0.5 0.4 595 0.3 OD 0.2 0.1 0.0 0.000.020.040.060.080.10 Concentration of protein(mg/ml) 图4-5 蛋白质标准曲线 Table 4-5 Standard cure of protein 2其标准曲线回归方程为:y=0.0172+6.6164x，R=0.9976 y为595mn的吸光度， x为牛血清白蛋白的浓度