食品中防腐剂苯甲酸(钠)和山梨酸(钾)的测定.doc

食品中防腐剂苯甲酸(钠)和山梨酸(钾)的测定.doc 实验9.3 食品中防腐剂苯甲酸(钠)和山梨酸(钾)的测定 薄层色谱法 一、实验目的 掌握薄层色谱定性和斑点面积半定量测定法。 学会制备聚酰胺薄层板。 二、仪器 吹风机 层析缸 玻璃板10×18cm 玻璃板 50×80 cm 微量注射器 10μL 喷雾器 三、试剂与试样 聚酰胺粉 200目 乙醚 可溶淀粉 无水硫酸钠 盐酸溶液 6mol•L-1 4%氯化钠酸性溶液 于4%氯化风俗溶液中加入少量mol•L-1盐酸溶液 展开剂:(1)正丁醇:氨水:无水乙醇=7:1:2 (2)异丙醇:氨水:无水乙醇=7:1:2 显色剂:0.04%溴甲酚紫的50%乙醇溶液用0.1mol•L-1氢氧化钠调至PH=8 苯甲酸溶液:精密称取苯甲酸0.2000g，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中，并用乙醇稀释至刻度摇匀，此溶液每亳升相当于2mg苯甲酸。 山梨酸标准溶液:精密称取山梨酸0.2000g，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中，并用乙醇稀释至刻度摇匀，此溶液每亳升相当于2mg山梨酸。 试样 酱油、水果汁、果酱等 四、实验步骤 1、试样提取—试样溶液的制备 称取2.5g混合均匀的试样，置于25mL带塞量筒中，加0.5mL，6 mol•L-1盐酸酸化，用乙醚提取两次(15mL、10mL)每次振摇1min，将上层乙醚提取液吸入另一25mL带塞量筒中，合并乙醚提取液。用3mL4%氯化钠酸性溶液洗涤两次，静置15min，乙醚层通过无水硫酸钠脱水后过滤于25mL容量瓶中。加乙醚稀释至刻度，摇匀。 吸取10.00mL乙醚提取液分两次置于10mL离心管中，在约40?水浴上除去乙醚，加入0.1mL乙醇溶解残渣，制成试样测定液备用。 2、聚酰胺粉板的制备 称取1.6g聚酰胺粉，加4g可溶性淀粉，加15mL水，研磨3~5min，使其均匀即可涂10×18cm厚度0.3mm的薄层板两块。涂好的薄层板置于水平大玻璃板上，于室温干燥后，于80?干燥1h取出，置于干燥器中保存。 3、点样 在薄层板下端2cm的基线处，用10ul微量注射器，分别点1μL、2μL试样溶液和1μL、2μL苯甲酸、山梨酸标准溶液。 4、展开与显色 层析缸内倒入适量展开剂，在层析缸周围贴上滤纸，待滤纸湿润后，展开剂液层厚约0.5~0.7cm，让展开剂在层析缸内饱和10min，将点样后的薄层板放入层析缸内，使薄层下端浸入展开剂中约0.5cm，迅速盖紧缸盖，进行展开，如图8—12。待展开剂前沿上展至10cm时,取出吹干，喷显色剂，斑点呈黄色，背景为蓝色。 5、定性和半定量测定 把试样斑点与标准斑点比较，以比移值(Rf值)定性，在此实验条件下苯甲酸和山梨酸的比移值分别为0.73、0.82。 比较试样斑点与标准斑点面积大小及颜色深浅进行含量计算。 根据测定结果按下式计算试样中苯甲酸、山梨酸含量。 计算: 式中:X——试样中苯甲酸(山梨酸)的含量，g•kg-1; A——测定用试样溶液中苯甲酸(山梨酸)的质量，mg ; m——试样的质量，g; V1——溶解苯甲酸(山梨酸)时，加乙醇体积，mL; V2——测定时点样的体积，mL; 25——试样乙醚提取液的总体积，mL; 10——测定时吸取乙醚提取液的体积，mL。 五、说明和注意事项 1、此方法用于酱油、水果汁、果酱中苯甲酸、山梨酸含量的测定。苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钠盐是食品常用防腐剂，主要用于酸性食品的防腐。国家在不同食品中其最大使用量为0.2~1.0 g•kg-1。如碳酸饮料中苯甲酸或山梨酸的最大使用量为0.2 g•kg-1。酱油、食醋中苯甲酸钠或山梨酸钠最大使用量为1.0 g•kg-1。因此，测定食品防腐剂的含量以控制其用量，对保证食品质量，保障人民健康具有十分重要的意义。 2、本方法测定原理为:试样经酸化，使苯甲酸钠、山梨酸钾转变为苯甲酸、山梨酸，再用乙醚提取，乙醚提取液经氯化钠酸性溶液洗涤，并用无水硫酸钠脱水后，将乙醚蒸出，残渣用乙醇溶解后，点样于聚酰胺薄层板上，经展开，显色后，根据比移值与标准比较定性，根据斑点面积和颜色深浅进行半定量测定。 3、试样中如含有二氧化碳、酒精时应加热除去，富含脂肪和蛋白质的试样应除去脂肪和蛋白质，以防用乙醚萃取时发生乳化。 4、本方法灵敏度高，但操作繁琐，重现性差，现今多用气相色谱法测定，试样经酸化后，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸后，用附氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离和测定，与标准系列比较定量。 也可采用高效液相色谱法测定，利用被分离组分在固定相和移动相中分配系数的不同，使被测组分分离，用紫外检测器在特定波长下测定被测组分的吸收度，与标准比较定性和定量。 思考题: 1、 本实验分离测定苯甲酸和山梨酸为何要选用聚酰胺薄层板, 2、 在本实验条件下山梨酸Rf值较苯甲酸Rf值大的原因,