【doc】RP-HPLC测定冠心舒胶囊中丹酚酸B及芍药苷的含量

【doc】RP-HPLC测定冠心舒胶囊中丹酚酸B及芍药苷的含量 RP-HPLC测定冠心舒胶囊中丹酚酸B及芍 药苷的含量 2007年3月 第29卷第3期 中成药 ChineseTraditionalPatentMedicine March2o07 Vo1.29No.3 图5供试品液色谱图 图6阴性样品色谱图 2.2.7加样回收率试验 精密称取已知含量的样品5份,每份0.5g,分别精密加 入1mg/mL高乌甲素对照品溶液12.00mL,按供试品溶液 制备处理后,进样20,依法测定峰面积,计算回收 率,RSD为1.13%,见表2. 3讨论 3.1高效液相色谱法测定高乌甲素的含量,方法简便,快 表2高乌甲素加样回收率测定结果 速.流动相为甲醇.01mol/L磷酸二氢钠(80:20),按此比 例可使峰分离完好,基质和分解产物也不干扰主药的测定. 根据实验,在此条件下高乌甲素理论塔板数在2000以上. 3.2采用高效毛细管电泳法对高乌甲素凝胶剂中主要成分 高乌甲素进行了定性鉴别.实验表明,该法可在3min之内 快速,有效地鉴别出高乌甲素,操作简便,重现性好,专属性 强,可作为凝胶剂的有效成分鉴别手段之一. 3.3超声提取时间对高乌甲素间收率有一定影响,随超声 时间延长,高乌甲素回收率升高,但30,40,50min提取效果 无明显变化,且50min提取时,有降解产物出现,故确定提 取时间为30min. 参考文献: [1]中国科学院植物研究所.中国高等植物图鉴(第一册)[M].北 京:科学出版社,1992:688. [2]唐希灿,朱梅英,冯洁,等.刺乌头碱氢溴酸盐的药理作用研 究[J].药学,1983,18(8):579-58. 1iP.I-IPLC测定冠心舒胶囊中丹酚酸B及芍药苷的含量 梁生旺,王淑美,冯素香,周立艳,刘毅琳 (1.广东药学院中药学院,广东广卅i510006;2.河南中医学院,河南郑州450008;3.无锡正东药业有限公 司,江苏无锡214091) 关键词:冠心舒胶囊;丹酚酸B;芍药苷 中图分类号:R927.2文献标识码:B文章编号:1001—1528(2007)03-0462-03 冠心舒胶囊是由澳门橘仁堂制药有限公司和无锡正东 药业有限公司共同研制开发的中药6类新药,由丹参,赤芍, 制首乌,枸杞子,川芎,甘草等组成.具有活血化瘀,通窍止 痛的功能,并能扩张血管,增加冠状动脉血流量,用于治疗冠 t2,病,心绞痛等疾病.丹参药材中含有脂溶性成分如:丹参 酮l,丹参酮?,丹参酮?,隐丹参酮等,水溶性成分如:丹 酚酸A,B,C……,丹参素,原儿茶醛,原儿茶酸等.冠心 舒胶囊中丹参制备工艺为水煎煮提取,故不适宜以丹参酮 ?为含量测定指标.现代药理研究表明,丹参中用于治疗 冠心病的活性成分为丹酚酸A,B,C……,故本试验以丹参 中丹酚酸B为测定指标,采用反相高效液相色谱法测定其含 量;由于方中药味较多,另外选用制备工艺中采用乙醇回流 提取的赤芍作为含量测定指标,采用反相高效液相色谱法对 其中所含的有效成分芍药苷进行含量测定,共同建立冠心舒 胶囊的含量测定质量标准. 1仪器与试药 收稿日期:2005—12,20 作者简介:梁生旺(1954一),男,教授,从事中药质量控制研究,电话:020~9352172. 462 2007年3月 第29卷第3期 中成药 ChineseTl_丑ditionalPatentMedieine Mareh2Oo7 V01.29No.3 LC一10AT高效液相色谱仪(日本岛津),SPD.10Atvp紫 外器(日本岛津),ODS柱(大连依利特公司),KQ一100 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司). 丹酚酸B对照品(中国药品生物制品检定所,批号: 11562.200402);芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所, 批号:110736-200424);乙腈,甲醇为色谱纯,水为重蒸水,其 余试剂均为分析纯.冠心舒胶囊(无锡正东药业有限公司提 供). 2方法与结果 2.1丹酚酸B的含量测定 2.1.1色谱条件 大连依利特ODS色谱柱(4.6mmX150mm,5m),乙 腈.甲酸一水(25:1:75)为流动相;柱温30.C,检测波长287 nnel,流速:1.0mL/min.理论塔板数以丹酚酸B峰计算应不 低于3000. 2.1.2对照品溶液的制备 精密称取以五氧化二磷干燥至恒重的丹酚酸B对照品, 加甲醇制成1mL含0.14mg的溶液,作为对照品溶液. 2.1.3供试品溶液的制备 取本品10粒,倾出内容物,研细,取0.45g,精密称定, 置具塞锥形瓶中,精密加75%甲醇50mL密塞,称定重量, 超声处理30min,放冷,用75%甲醇补足减失重量,摇匀,滤 过,取续滤液,即得.取缺丹参阴性样品,同法制成缺丹参的 阴性对照溶液. 2.1.4各样品溶液的HPLC色谱图 分别吸取供试品溶液,阴性对照溶液及丹酚酸B对照品 溶液各5,注入液相色谱仪,按上述色谱条件进行测定. 记录其HPLC液相色谱图,结果表明阴性无干扰,见图1,2. 图1丹酚酸B对照品I’IPLC色谱图 1丹酚酸B 图2供试品I’IPLC色谱图 1丹酚酸B 2.1.5线性化范围试验 精密吸取丹酚酸B对照品(0.138mg/mL)2,6,8,12, 16,20注入液相色谱仪,按上条件进行测定,计算回归方 程得Y=612793.5764X一2199.75,r=0.9999.表明丹酚 酸B在0.276,2.760g之间线性关系良好. 2.1.6精密度试验 精密吸取同一对照品溶液5,注入液相色谱仪,连续 测定5次,测得丹酚酸B峰面积积分平均值为797975.6, RSD=0.72%.结果表明:丹酚酸B精密度良好,符合定量 分析要求. 2.1.7稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液5(批号为040812),注入 液相色谱仪,每1h进样1次,测定6次,测得丹酚酸B峰面 积积分平均值为311721.7,RSD=0.84%.结果表明,丹酚 酸B在5h内积分值基本稳定. 2.1.8重复性试验 取同一批号样品(批号为040812)5份,每份约0.45g, 精密称定,按供试品溶液制备方法制备,按上述色谱条件测 定,测得丹酚酸B峰面积积分平均值为299744.8,RSD= 1.20%.结果表明丹酚酸B重复性试验良好,符合定量分析 要求. 2.1.9加样回收率试验 取已知含量的样品(批号为040812)约0.25g,共6份, 精密称定,精密加入丹酚酸B对照品适量,置圆底烧瓶中,按 照供试品溶液制备方法制备供试品溶液,按上述色谱条件进 行测定,计算回收率,结果见表1. 2.1.10样品含量测定 取3批样品,按供试品溶液制备方法制成供试品溶液, 按上述色谱条件进行测定,结果见表2. 表1丹酚酸B加样回收率试验 啪啪啪?如. ????0 2007年3月 第29卷第3期 中成药 ChineseTraditionalPatentMedicine March2007 Vol_29No.3 表2冠心舒胶囊中丹酚酸B含量测定结果(,l=5) 2.2芍药苷含量测定 2.2.1色谱条件 大连依利特ODS色谱柱(4.6mmX150mm,5m),甲 醇一水(30:70)为流动相;柱温30.C,检测波长230nm,流速: 1.0mL/min.理论塔板数以芍药苷峰计算应不低于3000. 2.2.2对照品溶液的制备 精密称取以五氧化二磷干燥至恒重的芍药苷对照品,加 甲醇制成1mL含0.493mg的溶液,作为对照品溶液. 2.2.3供试品溶液的制备 取本品10粒,倾出内容物,研细,取1g,精密称定,置具 塞锥形瓶中,精密加入甲醇25mL,密塞,称定重量,浸泡4h, 超声20min,放冷,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续 滤液作为供试品溶液.取缺赤芍阴性样品,同法制成缺赤芍 的阴性对照溶液. 2.2.4各样品溶液的HPLC色谱图 分别吸取供试品溶液,阴性对照溶液及芍药苷对照品溶 液各10,注入液相色谱仪,按上述色谱条件进行测定.记 录其HPLC液相色谱图,结果表明阴性无干扰,见图3,4. mV 72 64 56 48 40 32 24 16 8 O 图3芍药苷对照品HPLC色谱图 1芍药苷 22.5线性化范围试验 mV 72 64 56 48 40 32 24 l6 8 O 图4供试品HPLC色谱图 1芍药苷 精密吸取芍药苷对照品(0.493mg/mL)2,6,8,12,16,20 注入液相色谱仪,按上条件进行测定,计算回归方程得y =1239998.421X+35478.7,r=0.9998.表明芍药苷在 0.990p.g一9.9OOp.g之间线性关系良好. 2.2.6精密度试验 精密吸取同一对照品溶液10L,注入液相色谱仪,连续 测定5次,测得芍药苷峰面积积分平均值为6379573.4,RSD =0.43%.结果表明:芍药苷精密度均良好,符合定量分析 要求. 2.2.7稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液10L(批号为040812),注入 液相色谱仪,每1h进样1次,测定6次,测得芍药苷峰面积 积分平均值为7198485.3,RSD=0.82%.结果表明,芍药 苷在5h内积分值基本稳定. 2.2.8重复性试验 取同一批号样品(批号为040812)5份,每份约1g,精密 称定,按供试品溶液制备方法制备,按上述色谱条件测定,测 得芍药苷峰面积积分平均值为7197390.8,RSD=1.03%. 结果表明芍药苷重复性试验良好,符合定量分析要求. 2.2.9加样回收率试验 取已知含量的样品(批号为040812)约0.5g,共6份,精 密称定,精密加入芍药苷对照品适量,置圆底烧瓶中,按照供 试品溶液制备方法制备供试品溶液,按上述色谱条件进行测 定,计算回收率,结果见表3. 表3芍药苷加样回收率试验 2.2.10样品含量测定 取3批样品,按供试品溶液制备方法制成供试品溶液, 按上述色谱条件进行测定,结果见表4. 3讨论 3.1供试品溶液的制备方法对于丹酚酸B,我们用超声 处理方法与回流提取比较提取效果,根据测定结果,超声 表4冠心舒胶囊中芍药苷含量测定结果(,l=5) 2007年3月 第29卷第3期 中成药 ChineseTraditionalPatentMedicine March20o7 Vo1.29No.3 30min,40min,回流30min的结果很接近,对于芍药苷,我们 同样用超声处理方法与回流提取比较提取效果,根据测定结 果,超声20min,30min,回流30min的结果很接近,考虑到 超声操作较回流要方便很多,并从节省时问方面考虑,我们 选择超声30min作为丹酚酸B供试品处理方法,超声20min 作为芍药苷供试品处理方法. 3.2流动相的选择对于丹酚酸B含量测定,我们先后试 过不同比例的甲醇-水,甲醇-水-甲酸,乙腈一水-甲酸为流动相 进行了测试,结果表明,采用乙腈.水.甲酸(25:1:75)系统, 丹酚酸B峰分离效果较好;对于芍药苷含量测定,我们先后 试过不同比例的甲醇一0.05mpl/L磷酸二氢钾溶液和甲醇- 水为流动相,结果表明,采用甲醇.水(30:70)系统,芍药苷峰 分离效果好. 3.3有关丹酚酸B含量测定的报道并不多见.我们根据丹 酚酸B的化学特性,采用HPLC技术建立了丹酚酸B的定量 测定方法,具有样品预处理方法和色谱分离快速简便的特 菊花配方颗粒质量标准研究 点,各项方法学指标均可满足含量测定的基本要求. 参考文献: [1]王慕邹.常用中草药高效液相色谱分析[M].北京:科学出版 社,1999. [2]游勇基,陈铭辉.高效液相色谱法测定丹参中丹酚酸B等3种 有效成分[J].中国药学杂志,2003,38(12):950-952. [3]曹枫,马长华,乔延江,等.HPLC测定丹参三七配伍水煎液 中丹酚酸B的含量[J].北京中医药大学,2003,26(6): 45.47. [4]程显隆,王峰.丹参中丹酚酸B的高效液相色谱法含量测定 [J].药物分析杂志,2003,23(2):149—150. [5]中国药典2005年版一部[S].2005. [6]盛蓉,宋英,郑琰,等.HPLC测定止血消瘀胶囊中芍药 苷的含量[J].中国中医药科技,2005,12(1):38-39. [7]常丽影,赫玉芳,南敏伦,等.高效液相色谱法测定胃康灵胶囊 中芍药苷的含量[J].时珍国医国药,2005,16(7):596~97. 王举涛,刘金旗,王凤山,彭代银,金传山 (1.安徽中医学院,安徽合肥230001;2.山东大学药学院,山东济南250012) 关键词:菊花配方颗粒;绿原酸;TLC;HPLC;质量标准 中图分类号:R927.2文献标识码:B文章编号:1001-1528(2007)03-0465-02 中药菊花为菊科植物菊ChrysanthemummorifaliumRa— mat.的干燥头状花序,为一类常用中药.具有疏风,清热,明 目解毒的功效.我们曾对菊花进行了化学成分的研究., 菊花中总黄酮的含量较高,而且是菊花治疗高血压和冠心病 的主要有效成分.菊花配方颗粒由菊花中药饮片经现代制 药工艺提取,浓缩,干燥,制粒而成.为有效控制其质量,我 们按照国家食品药品监督管理局颁发的《中药配方颗粒管 理暂行规定》通知要求,借鉴中国药典菊花项下的鉴别和含 量测定方法,参考有关文献,采用薄层色谱法对菊花配方颗 粒进行了定性鉴别,采用高效液相色谱法对其所含的绿原酸 含量进行了测定.结果表明,该方法不受其他成分的干扰, 分离度高,重现性好,简便,准确,能有效控制菊花配方颗粒 的质量,可推广应用. 1仪器与试药 SPD一10AT,高效液相色谱仪(日本岛津公司);SPD一 10A,型紫外检测器(日本岛津公司);浙江大学(N2010)色 谱工作站;D一2型十万分之一电子天平(美国PE公司); AS3120型超声清洗器(天津奥特赛恩斯);菊花对照药材,绿 原酸对照品(供含量测定用)购自中国药品生物制品检定 所;菊花药材购自安徽毫州药材市场,经安徽中医学院周建 理教授鉴定为菊科植物菊ChrysanthemummorifoliumRamat. 的干燥头状花序.菊花配方颗粒,由安徽毫州济人药业有限 责任公司提供.甲醇(色谱纯);水(重蒸水);其它试剂均为 分析纯. 2方法与结果 2.1定性鉴别 取本品1g,研细,加石油醚20mL,超声处理10min,弃 去石油醚,药渣挥干,加稀盐酸1mL与醋酸乙酯50mL,超 声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2mL使溶解,作 为供试品溶液.另取菊花对照药材1g,同法制成对照药材 溶液;再取绿原酸对照品,加乙醇制成每1mL含0.5mg的 溶液,作为对照品溶液.照薄层色谱法(中国药典2000年版 一 部附录WlB)试验,吸取上述3种溶液各1txL,分别点于同 一 聚酰胺薄膜上,以甲苯一醋酸乙酯一甲酸.对(醋酸一水(1:15:1 :1:2)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯 (365ilm)下检视,供试品色谱中,在与对照药材和对照品色 收稿13期:2006-01-21 作者简介:王举涛(1977,),男,讲师,硕士研究生,研究方向:天然药物化学及质量研究,电话:o55l_5l69227,E-mail:wit591@163?corn.