新城疫病毒疫苗对小鼠S180肉瘤抑瘤作用的实验研究

新城疫病毒疫苗对小鼠S180肉瘤抑瘤作用的实验研究 新城疫病毒疫苗对小鼠S180肉瘤抑瘤作用 的实验研究 疫苗(?组在接种‰肉瘤前1周皮下注射NDV疫苗),分2 次解削取材后光镜,电镜观察.结菩NDV颗粒附着在瘤细胞表面,瘤 组织大片坏死,坏死周边部有炎细胞浸润, 并可见捅亡小体?,?组瘤体逐渐减小,有2只?组小鼠瘤块完全消 失,生存期延长其他脏器无明显病理改 ExperimentalshlmesOiltheantineoplasllceffectofNewcastledisease virusvaccineonmurinesl?sarcoffla SUYan-xin,CHENY一zhun,KANGXiang-hua,etal (DepartmentofUltraaon~,TheSecondHospital,HarbinMedical University,Harbin150086,China) Abstxact:ObjectiveToi珊 estatetheeffectofNewcastlediseasevirus(hrDV)vaccit~eOnroutineS1勒 Sft~CO— maMetl~lsNDVvaccinewasinjectedintothemttrinesubcutaneouslytransplantedS1Sff4”coina,theceof ? groupwereinjectedwithNDVvaccinesubeu~neouslyaweekbeforetheS1?sarc0mwashnplanted.After treatment,thechangesofthetlJJnorcellsredemetedbythelightandelectronmicroscopy.1~sultsNewcas— tiedisease~4fionsadhemdtothesurfaceofthetuinorcells,andtherewereplentyofnecrosisandinfiltrationof inflanm~mrycellsaroundtheregionsofnecrosis.ThetUlIIOrgof2miceinIIgroupdisappearedcompletely. TheorgansdidnotundergopathologicalchangesConclusionNDVvaccinecankillthemulineSI?sm’L’orrla ceItsandsuppressthegrowthofthen??rs.Itissafeandeffective. Keywords:Newcastlediseasevirusvaccine;S1ormmodel;necrosis;pathologicalchange;mouse 新城疫病毒疫苗(NOV)抗肿瘤是一种肿瘤生物 疗法.NDV在肿瘤细胞中存活,复制,抑制肿瘤细胞 蛋白质合成,杀伤肿瘤细胞.同时,病毒又作为生物 反应调节剂(BRM)中的一种,能显着增强机体免疫 功能,增强机体抗瘤免疫潜力,为治疗肿瘤提供了又 一 新途径.本实验从细胞学,组织病理学及超微结 构病理学等方面证实了NDV疫苗对肿瘤细胞存在 显着杀伤效应,初步探讨其抗肿瘤的机制. 收穑日期:1999—06—22 作者茼舟:苏雁欣(1968一),女.主治医师,硕士 1与方法 1.1材料 11.1实验动物:昆明种小鼠38只,雌雄各半,5—6 周龄,重(20?2)g.由黑龙江省肿瘤研究所提供. 1.1.2瘤株:小鼠皮下移植性S肉瘤,由黑龙江省 肿瘤研究所动物室提供. 1.13使用疫苗:新城疫病毒(NDv)减毒活疫苗,病 毒效价1:1280.由哈尔滨兽医研究所提供. 1.2实验方法 随机取l3只小鼠(即?组),每只动物腹部皮下 l6哈尔滨医科大学第34卷 接种0.3ml用PBS稀释10倍的NDV.1周后,小鼠 s1肉瘤细胞腹腔液,用Hank’s液先后稀释为5Xl 个瘤细胞/0.1ml,于全部小鼠背部皮下接种瘤细胞稀 释液0.2ml/只.待至1周左右,肿瘤长至1.0eraX 1.0em大小时,将小鼠按随机原则分成:I组l2只, 用0.1mol/LPBS液治疗;II组l3只,在接种细胞前I 周已注射过NDV者,再用I:10NDV治疗;/]I组l3 只,用1:10NDV治疗.?,?组均在瘤体内注射0.2 mlNDV,I组瘤体内注射0.2mlPBS液,隔日注射.共 3次.末次注射1周后,每组各处死5只动物并自移 植瘤部位取材,组织学标本用10%甲醛溶液固定,常 规制片,HE染色.电镜标本用3%戊二醛和1%锇 酸双重固定,EPON812包埋,常规制作电镜标本,H. 600A型透射电镜观察. 剩余23只小鼠留待作生存期观察,随着小鼠死 亡,即做解剖取材,包括瘤块和各脏器如心,肝,脾, 肺,肾,脑等,做光镜观察.同时死亡时间,体 重,瘤重,瘤径(包括肿瘤的长,宽,高)及转移情况. 2个月后?组有2只小鼠存活,其余全部死亡,对该 2只小鼠进行解剖取材. 计算:公式.: ?肿瘤体积(V)={(号)’ ?抑瘤率(%)= 盥塑婺…对照组瘤重均值… 2结果 21第1班处死动物和取材结果(末斑注射后1周) 2.1.1大体改变:I组移植瘤大致呈圆形,灰白色, 质地均匀,随着生长时间延长而增大.?,?组大体 所见与I组相类似,只是在注射部位可见出血坏死. 2.1.2光镜下改变:I组肿瘤细胞不规则,有明显 异型性,呈多边形,核大,核浆比例失调,可见病理性 核分裂相.?,?组肿瘤细胞可见坏死区,核浓缩, 碎裂,核膜溶解,细胞破裂甚至消失.?组坏死区比 ?组大,连成大片坏死区,且坏死组织周围有一些炎 细胞浸润.各脏器包括心,肝,肺,脾,肾和脑等.实 验组均未见明显病理改变. 2.1.3透射电镜下改变:I组肿瘤细胞呈多形性, 核大,核仁明显,常染色质均匀分布于核内,异染色 质聚集在核膜周边,核内有的可见假性包涵物.?, ?组可见NDV病毒颗粒附着在肿瘤细胞表面上,以 囊膜与胞膜相互融合的作用进入细胞.脱壳消失. 可见线粒体嵴肿胀,空泡变性,甚至消失.内质同扩 张.肿瘤细胞缩小,核染色质凝集,核固缩.核膜凹 陷,产生凋亡,细胞结构消失,并可见炎细胞浸润在 坏死区周围(见图1,2). 2.2第2冼动物取材结果(未虎注射后1周至6o天 内) 2.2.1大体所见:I组肿瘤块随时间延长而渐增 大,可见散在出血坏死区,?,?组随时间延长而逐 渐减小,II组更为明显,且有2只小鼠瘤块完全消 失.生长情况良好. 2.2.2光镜下所见:小鼠?,?组各脏器如心,肝, 脾,肺,肾和脑均未见明显病理改变. 2.2.3各组小鼠瘤重,瘤体积和抑瘤率的情况分析 见附表. 附采NI)V疫苗对s|内癌模型小鼠的杀伤效果 瘤重和瘤体积方面,?组与I组之间,?组与I 组之间均有显着差异.P值均小于O.Ol. 3讨论 本实验中,?,?组小鼠瘤块均明显减小,光,电 镜下可见大量肿瘤细胞坏死,透射电镜下可见NDV 病毒颗粒吸附在肉瘤细胞表面上,与Liebrich报道 的相符.间接免疫荧光检测”】,NDV感染的肿瘤细 胞表面有NDV抗原的表达,导人病毒基因,使肿瘤 细胞膜表达病毒抗原,可以由细胞毒性淋巴细胞引 起免疫损伤,或者由相应抗体吸附于细胞表面后,发 生补体介导的溶细胞反应,或者吸引吞噬细胞或由 杀伤细胞(Keea)发挥杀伤作用.光,电镜下可见坏 死灶周围大量炎细胞浸润,说明肿瘤细胞获得了很 强的免疫原性,诱导机体产生免疫反应,最终杀灭肿 瘤. ?组小鼠瘤块明显减小,有2只小鼠瘤块完全 消失,生存期延长,抑瘤率亦比?组高.Von Hoegen;-4证实,治疗前先用病毒启动其免疫系统,使 其对TATA特异的细胞毒性T淋巴细胞(CIL)的频 数增加,细胞毒性抗瘤活性明显增强.ND~局部瘤 内注射,可能是瘤内异种化的作用,NDV的作用并非 简单类似BcG等的免疫作用】,而是依赖NDV与瘤 细胞的相互作用,NDV的核衣壳从瘤细胞表面获得 囊膜,NDV从瘤细胞中以”芽生”的方式释放出来.作 为抗原,刺激机体产生抗体,该抗体既可与NDV作 用,也可与瘤细胞作用,杀伤肿瘤细胞.而且这种作 用是持续性的. 第1期苏雁欣,等新城疫病毒疫苗对小鼠?肉璃抑辔作用的实验研究 17 本实验选用的NDV减毒活疫苗,为?系苗(弱 毒),LaSota株,无致病力.本实验证明了NDV疫苗 对小鼠心,肝,肺,脾,肾和脑等器官无病毒感染及明 显病理改变.Heicappell证实J,NDV只在感染的肿 瘤细胞内完成一个复制周期,不感染其他正常细胞. Ronnnelaere证实,某些细胞基因对正常细胞生长并 非必需,但对病毒却十分必需.正常细胞中这些基 因表达的缺乏引起病毒生命周期若干步骤之一的阻 断,也就防止了病毒对于正常的成熟机体产生明显 病变. 综上所述,新城疫病毒减毒活疫苗对肿瘤细胞 有较强的杀伤作用,抑制肿瘤的生长,不损伤正常组 织器官,安全性大,方法简便易行,治疗恶性肿瘤具 有一定的优越性,可进一步广泛应用. (本文图1—2见封3页) [参考文献] [1]LiebfichW.s锄P,ManastetskiM,delInvlbmarLdclinicald?一 【?{【?daNDV—meditiedautologo~snHr.Drceil…ef0ftrea’m~t ofcdlom:~~el删~er,ts[1]胁Jc?恤t.L9ql,27(6):703 [2]乔健,等.新城鸡瘟病毒瘤苗对小鼠宫颈癌U14主动免使防治 效应的研究J]中国免疫学杂志,1993.11(9):65 3]VoaHcegenP,e【8fed/ficatioaTumor础8al盹d渊:0fNDV. 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(收稿日期:1999—03一t6) 维生素E和二甲亚砜对油酸型ARDS防治作用的研究 (正文见31页) 图l 图2 图3 圈4 油酸组可l中性粒细胞,巨嚆细胞,变性的亚型上皮细胞及红细胞×2000 油酸组可见肺问质内大量中性粒细胞攫润×6000 VE组可见肺泡和肺问质水肿 D啪组可见气血屏障结构良好×200BO x3000 新城疫病毒疫苗对小鼠8180肉瘤的抑瘤作用的实验研究 (正文见15-ff) 圈1?组感染NDNI2天.线粒体暗消失.肿胀生泡变性.可见成熟病毒粒子形成 圈2II组感染DND12天.肿瘤细胞大量坏死.棱染色质凝集.棱膜扩张,溶解.坏死区周围有炎细胞浸润 .. LLFI