免疫相关性全血细胞减少症患者树突状细胞数量及功能研究(可编辑)

免疫相关性全血细胞减少症患者树突状细胞数量及功能研究(可编辑) 免疫相关性全血细胞减少症患者树突状细胞数量及功 能研究 天津医科大学 硕士学位论文 免疫相关性全血细胞减少症患者树突状细胞数量及功能的研究 姓名:滕广帅 申请学位级别:硕士 专业:临床医学;内科学(血液病) 指导教师:邵宗鸿 2012-05天津医科大学硕士学位论文 . 中文摘要 目的:研究免疫相关性全血细胞减少症? , 患者外周血树突状细胞 ,数量和功能,探讨在发病 中的作用。 方法:研究对象为例患者,其中初治患者初治组例、经免疫 抑制及促造血治疗后血象恢复正常患者恢复组例、正常对照名。 采用流式细胞术检测患者外周血 ?? 细胞、 ?.细胞数量及其表面共刺激分子、的表达水 平。分析、、/及、表面共刺激分子、 的表达水平与/比例、/骨髓单个核细胞比例、 抗体数量及血象的相关性。 结果: 、初治组占外周血单个核细胞的比例为.?. %,明显高于恢复组..%和正常对照组.?.%., .,恢复组明显高于正常对照组萨.;初治组、恢复组外周血 占的比例分别为.?.%、.?.%,与正常对照组. ?%比较均无统计学意义;初治组/比值为.?.,明显 高于恢复组.?.和正常对照组.?..,.,恢复 组与对照组比较没有明显差别砂.。 、初治组外周血表面的表达水平为?.%,明显 高于恢复组.?.%和正常对照组.?.%.,., 而恢复组外周血表面的表达水平与正常对照组比较差异无统计 学意 义.;初治组、恢复组外周血表面表达水平分别. ?.%、.?.%,均明显高于正常对照组.?.%., .,初治组外周血表面的表达水平明显高于恢复组矽.; 初治组、恢复组外周血表面表达水平分别为..%、 .?.%,均明显高于正常对照组.?.%.,., 初治组与恢复组比较差异无统计学意义.;初治组外周血表面 表达水平为.?.%、恢复组为.?.%、正常对照组天津医科大学硕 士学位论文 为.?.%,初治组明显高于正常对照组.。 、组外周血占的比例与/呈负相关.., .,与抗体数量呈正相关.,.,与/ 呈正相关.,.,与血红蛋白和血小板水平均呈负相关 一.,...,.;占的比例与/ 呈正相关.,.,与血红蛋白水平呈正相关.,.; /与/水平呈负相关..,.,与抗体 数量呈正相关.,.,与/呈正相关.,., 与血红蛋白和血小板水平均呈负相关..,.一.,.; 组外周血表面共刺激分子表达水平与血红蛋白、血小板呈负相 关一.,...,.;表达水平与/呈负相 关一.,.,与抗体数量呈正相关.,., 与十/呈正相关.,,.,与血红蛋白、血小板、白细 胞水平均呈负相关辛..,.一.,.一.,.; 组外周血表面共刺激分子表达水平与血红蛋白和白细胞水平呈 负相关一.,.一.,.;表达水平与白细胞水平呈 负相关一.,.。 结论:在患者中数量增加,功能亢进,且数量与功能状态的变化 具有一致性,随着治疗有效,逐渐趋于正常。在免疫发病机制中可 能 发挥重要作用,有可能成为该疾病潜在的治疗靶点。 关键词全血细胞减少免疫相关树突状细胞自身抗体天津医科大 学硕士学位论文 : . :? ,?.? 、?? 、., , , , ,/, /, /,? . 、 : . ..% . . % . .. %. ,...% .. .. % ..%.. .. ,.. .. ...,., .. . .% . , 擘 ..% ..%.,.,.. ..% ..% , ..%., ., ..% .. ..% , .土.%.,.,.. .土.%.?.% .士.% . 口.. . /一., ?, . .,./.,., 一.,. 一., ‖.. /..正. .,../ /一.,., ?. ,. /..., ?.,.严一.,..一. .. 一..../一.,.,/. . ?.,. ., 、一.,.一.,...,..一.,.一. ,., ..... :,..? ? 天津医科大学硕士学位论文 目录 错误未找到。缩略语/符号说明 再生障碍性贫血自身免疫性疾病抗核抗体 抗原呈递细胞 藻蓝蛋白家族因子增殖诱导配体 ? 细胞活化因子 ? ’ 白塞病 淋巴细胞刺激因子 ? 骨髓单个核细胞 趋化因子受体环孢菌素 树突状细胞 实验性自身免疫性脑脊髓炎 促红细胞生成素? 荧光激活细胞分类术流式细胞术异硫氰酸荧光素 血红蛋白意义未明的血细胞减少 免疫球蛋白 白细胞介素 : 干扰素 ? 免疫相关性全血细胞减少症 特发性血小板减少性紫癜分钟 髓系树突状细胞 骨髓增生异常综合征主要组织相容性复合体信使 多发性硬化症 磷酸盐缓冲溶液 外周血单个核细胞 浆细胞样树突状细胞 藻红蛋白 多甲藻黄素.叶绿素蛋白前列腺素 血小板 类风湿性关节炎 红细胞每分钟转数 系统性红斑狼疮辅助性淋巴细胞样受体 ?肿瘤坏死因子 调节性细胞白细胞天津医科大学硕士学位论文 天津医科大学硕士学位论文 前言 研究现状、成果 免疫相关性全血细胞减少症是从骨髓衰竭性疾病中分离出来的 一种 病理机制相对清晰的独立疾病体系,是由于淋巴细胞调控失衡导 致淋巴细 胞数量、亚群、功能异常,进而产生抗骨髓未成熟造血细胞自身 抗体并破坏或 抑制之,最终导致外周血细胞减少的一类疾病。 具备以下临床特点【。:?骨髓增生明显活跃、活跃或减低,但有核红细 胞比例不低,且经常可见到“红系造血岛”;?血象三系血细胞减少,但网织红 细胞或和中性粒细胞百分比不低;?无任何造血原料缺乏的征象;?除少 数患者有结合珠蛋白降低、游离血红蛋白增高、间接胆红素增高外,其它有关 溶血的特异性或非特异性检查均阴性;?检查结果证实无恶性造血克隆存在, 如出现基因重排或染色体异常等。?糖皮质激素等免疫抑制剂及大剂量丙种 球蛋白治疗有效。 我课题组利用经典的直接抗人球蛋白试验的原理和方法,以骨髓单个 核细胞悬液代替成熟红细胞悬液做?试验,证实上 述大多数患者骨髓单个核细胞有抗体的结合,而出现阳性反应,因此我们认为 这组疾病可能与异常免疫介导的造血细胞破坏有关,故称之为。它与年 著名英国血液病专家。】提出的“意义未明的特发性血细胞减少有 许多共同的特征:持续的全血细胞减少;不满足任何一种已知血液系统疾病的 诊断包括的最低诊断标准;排除任何一种继发于己知的血液系统和非血 液系统疾病。是否属于中的一种疾病抑或等同于目前仍不清楚。 研究发现首先是某种原因引起淋巴细胞调控失衡,细胞比例增多导致 淋巴细胞数量增多,功能亢进,进而产生抗骨髓未成熟造血细胞自身抗体并破 坏或抑制骨髓造血,导致外周血细胞减少的一类疾病。”】。为明确自身抗体的分 布和数量,我们课题组采用流式细胞术双抗体标记法直接检测患者骨髓造血干 祖细胞、粒细胞、有核红细胞?自身抗体的结合 率,结果显示:;双标法敏感性明显高于?实验;大多数患者 在骨髓造血干祖细胞、粒细胞及有核红细胞上结合有自身抗体主要包括型 矛型,并且这些患者表现为全血细胞减少。我们课题组进一步研究了自身 抗体作用机制,发现自身抗体主要通过以下途径抑制和/或破坏造血:?型自天津医科大学硕士学位论文 身抗体主要通过激活巨噬细胞吞噬和破坏带有自身抗体的骨髓 造血细胞】; 型自身抗体主要通过激活补体系统溶解自身骨髓造血细刺。 。?部分 患者自身抗体可作用于骨髓红系造血细胞膜上的,覆盖或封闭, 导致红系较早阶段增殖和分化受到抑制。为自身抗体作用的靶点之一】。 树突状细胞是等于年研究鼠脾免疫功能时发现的一 类具有分支或树突状形态的细胞,它们相互交错,伸展于淋巴细胞之间,能将 抗原递呈给临近的细胞,它们能高效摄取、加工处理和递呈抗原,是机体功 能最强的专职抗原递呈细胞【?。起源于造血干细胞,根据分化来源途径不同 分为髓系矛浆细胞样。是中的主要部分,表面标 志为?? ,,分泌一,活化淋巴细胞,促进向细 胞分化,诱导机体产生免疫应答;而表面标志为??,分 泌一、,低分泌一,允许向细胞分化,诱导机体产生免疫 耐受。 根据抗原递呈时的状态和活性不同,可分为未成熟和成熟。人 体内大部分处于未成熟状态,表达低水平的共刺激因子/?、 /?、、等和粘附因子细胞间粘附分子//和淋巴细胞 功能相关抗原/等,可导致特异性细胞无反应、发生凋亡或产生调 节性 细胞,而诱导免疫耐受,但未成熟具有强大的摄取抗原和处理抗原的能力, 以受体介导、吞噬和吞饮等方式摄取抗原,而逐渐分化为成熟,而成熟 表达高水平的共刺激因子和粘附因子,选择并激活有相应抗原受体的淋巴细 胞,同时显著下调其抗原摄取能力,从而诱导免疫应答。 作为机体内最重要的专职抗原递呈细胞,参与机体多种生理病理过程, 在自身免疫性疾病中发挥关键作用。有资料显示,淋巴组织中的可以启动 。正常情况下, 限制性自身免疫反应,从而产生自身抗体和炎症反应【。 人体内亚群维持在一定的数量及比例,使/比例处于平衡状态,维持 机体的正常免疫。一旦亚群数量或功能异常,导致/比例失衡,即可 引起自身免疫性疾病。近期的研究结果己证实系统性红斑狼疮 患者外周血中亚群、数量存在异常,表面共刺激分子表达上调,功 能异常口?’ ;患者和患者动物模型中,特别是活性增强,成 熟比例增高。另有研究显示人类外周血中亚群数量和功能异常与、 等也有相关性,可能是重要的发病机制。但患者亚群的数量和天津医科大学硕士学位论文 功能研究仍未见报道,有待进一步研究。 研究目的、方法 本研究的目的是通过检测患者外周血的亚群、数量及功能状态,探 讨在免疫发病机制中的作用,亦为开发针对的靶向免疫治疗提供依 据。本研究包括: 、利用检测患者和正常人外周血、的数量和/ 比值,了解患者各亚群的数量变化。 、利用检测患者和正常人外周血和表面共刺激分子 、的表达水平,了解患者各亚群的功能状态在发病中的作用。 、以上检测指标与/比例、抗体数量、/ 比例、外周血细胞数量进行相关分析。天津医科大学硕士学位论文 患者数量及功能的研究 患者数量及功能的研究 免疫相关性全血细胞减少症? ,是由于某 种原因导致机体产生抗骨髓造血细胞自身抗体从而抑制和/或破 坏骨髓造血细胞 导致骨髓造血功能衰竭引起外周血细胞减少的一种自身免疫性疾病。树突状 细胞 ,是目前发现的体内功能最强的抗原提呈细胞, 在激发和控制获得性免疫反应的程度和范围中起关键作用。目前己公认参与 多种自身免疫性疾病的发生发展,但在发病机制中的作用仍不清楚,本 实验通过检测患者外周血、的数量及其表面共刺激分子的表达, 探讨在免疫发病机制中的作用。 对象和方法 研究对象 病例为天津医科大学总医院血液科年月至年月收治的 患者例,男例,女例,中位年龄.岁。初治组患者例, 为未经治疗的发病组患者,男例,女 例,中位年龄?岁;恢复 例, 组患者例,为经过免疫抑制及促造血治疗后血象恢复正常患者,男 女例,中位年龄.岁;正常对照名,为健康人,男名,女 名,中位年龄?岁。患者及对照者进入本研究均经本人知情同意并签 署知情同意。 主要试剂和仪器 鼠抗人?? 鼠抗人,、、、、、 鼠抗人? 鼠抗人? 鼠抗人. 鼠抗人. 鼠抗人? 鼠抗人? 一小鼠 一小鼠 一小鼠 天津医科大学硕士学位论文 患者数量及功能的研究 。小鼠 以上单克隆抗体均为美国 公司产品 :‘ . . . . 加水至 溶血素用:美国公司产品 流式细胞仪:,美国 公司产品 检测方法 . 检测 患者和正常人外周血和的数量 取患者及正常对照外周血各 ,试验管分别加入鼠抗人 ??、?、、、、、、? 单克隆抗体 单克隆抗体各;鼠抗人.?、?、? 各,;对照管加入同型对照各,?避光孵育,每管加入溶血素, 室温避光。 , 离心,洗涤次,加入“ 流式细胞仪检测亚群数量。 . 检测 患者和正常人外周血和表面共刺激分子、 的表达水平 取患者及正常对照外周血各 ,试验管分别加入鼠抗人 ??、?、、、、、、?、 ?单克隆抗体各;鼠抗人??、?、?、 ?单克隆抗体各 ;鼠抗人??、?、?、 ?单克隆抗体各;鼠抗人??、?、?、 ?单克隆抗体各;对照管加入同型对照各。。避光孵育, 每管加入溶血素,室温避光。 离心,洗涤次,加入 ,流式细胞仪检测共刺激分子、的表达。 . 检测骨髓、细胞 取新鲜肝素抗凝骨髓液,加入、、,混匀,于 孵箱中孵育?;取出,加入及,室温避光孵育;加入 溶血素,室温避光;转离心,弃上清,洗涤遍; 天津医科大学硕士学位论文 患者数量及功能的研究 取. 破膜剂,。避光;分为管,分别加入?,?,., 孵育;加入 液。保存,检测一./ 一%、一一/一%、一/ 一.。 . 检测骨髓造血细胞自身抗体 取新鲜肝素抗凝骨髓液,检测管加入鼠抗人.、一、 ?单克隆抗体,再分别加入?、?单克隆抗体。 。避光孵育 ,加入 红细胞裂解液,混匀后室温孵育 ,加入多 聚甲醛。固定。对照管加入鼠抗人一/一各,方 细胞膜表面自身抗体 法同前。检测细胞、?细胞、 、的结合率。 . /、 / 检测骨髓 细胞比例 取新鲜肝素抗凝骨髓液,检测管中加入鼠抗人.、 单克隆抗体,室温避光孵育?;加入红细胞裂解液,混匀后室 温避光:液洗涤两遍,加入多聚甲醛。固定。对照管加入鼠 抗人。/一单克隆抗体各,方法同前。检测骨髓 /、/细胞比例。 治疗方法 ~,部分患者因病情需要加用丙种球蛋 所有患者均给予泼尼松.? 白. 和环孢素? 。.~。 ?. 统计学处理 采用.数据统计软件进行分析。数据以?表示,三组样本均数先 采用单因素方差分析进行方差齐性检验,然后采用?检验进行样 本均数比较;相关分析采用相关分析;以.为差异具有统计学意 义。 厶士 耋口 检测 患者和正常人外周血亚群结果图. 天津医科大学硕士学位论文 患者数量及功能的研究 蚤 童警 囊鼍 差孓 《警 。时 。 器 正“ 呈拿 壬毛 芒一 《。 正常对照组外周血亚群数量表达流式分析图 圣 童警 塞 至呈 泰 《% ? 磬 芷 塞肇 墨 重罨 蔓 宝岛 、三 磊 磊? 初治组患者外周血亚群数量表达流式分析图 图.正常对照和初治组患者外周血亚群数量表达流式分析图 .外周血的数量 初治组占的比例为.?.%,明显高于恢复组. ?.%和正常对照组.?.%.,.,恢复组明显高于正天津医科大学硕 士学位论文 患者数量及功能的研究 组别 % .?.? 恢复组 .?. 正常对照组 注:‘与正常对照组比较.,与正常对照组比较.,。与恢复组比较. 。蓥 二.。 ’ , 薯 善。 。 。圭 于 图.三组数量比较 .外周血的数量 初治组、恢复组外周血占的比例分别为.?.%、 ..%,与正常对照组..%比较均无统计学意义., 初治组明显低于恢复组.。表.、图. 表.三组数量比较士 % 组别天津医科大学硕士学位论文 患者数量及功能的研究 注:与恢复组比较. . , , 薹 . 。 , 图.三组数量比较 .外周血/结果 初治组/比值为..,明显高于恢复组..和 正常对照组.。.,.,恢复组与对照组比较没有明显差 别砂.。表.、图. 表.三组/结果比较土 % 组别 .?. 恢复组 .?. 正常对照组 注:与正常对照组比较.,。与恢复组比较. .患者数量及功能的研究 天津医科大学硕士学位论文 ,士 : 置。 图.三组/结果比较 检测 患者和正常人外周血表面共刺激分子表达的结果 . 检测 患者和正常人外周血表面共刺激分子表达的结果 。 图.、图. 图. 图. 患者数量及功能的研究 天津医科大学硕士学位论文 . 量 弩 砷 誊 芒“ 基 :。;舌。。 星 毛 一 。 毫 。蹴热嚣“” %,氐轳是鼍 图. 图. 初治组 正常对照组 图.正常对照组及初治组表面共刺激分子表达流式分析图 图.正常对照组及初治组表面共刺激分子.表达流式分析图 外周血表面共刺激分子表达 初治组外周血表面的表达水平为.?.%,明显高 于恢复组..%和正常对照组.?.%.,.,而 恢复组外周血表面的表达水平与正常对照组比较差异无统计学 意义 .。表.、图. 表.三组外周血表面表达水平的比较;士 % 组别 .?.丰 初诊组 .?. 恢复组 .?. 正常对照组 一??????????????????????????????????????????????一 注:与恢复组比较.,‘与正常对照组比较.患者数量及功能的研究 天津医科大学硕士学位论文 , 爨? , 一孽;巷 亡 ,一 图.三组外周血表面表达水平的结果比较 外周血表面共刺激分子表达 初治组、恢复组外周血表面表达水平分别.. %、.?.%,均明显高于正常对照组.?.%.,., 初治组外周血表面的表达水平明显高于恢复组.。表.、 图. 表.三组外周血表面表达水平的比较士 % 组别 .?.? 恢复组 .?. 正常对照组 注:与恢复组比较.,‘与正常对照组比较. 患者数量及功能的研究 天津医科大学硕士学位论文 璐 爨 ? 冀 匝歪星垂圜 图.三组外剧血表面表达水平的结果比较 . 检测 患者和正常人外周血表面共刺激分子表达的结果 图.、图. 。 %如旷驴塾, 勺一 ,‰弹? 图. 图. 。一芏孚车。患者数量及功能的研究 天津医科大学硕士学位论文 。 弋 一 毋 芒~ 舌 溪、, 是 。 弋,。‰辨?【。 图. 图. 正常对照组 初治组 图.正常对照组及初治组表面共刺激分子表达流式分析图 图:正常对照组及初治组表面共刺激分子表达流式分析图 、周血表面共刺激分子表达 初治组、恢复组外周血表面表达水平分别为.?. %、..%,均明显高于正常对照组..%.,., 初治组与恢复组比较差异无统计学意义.表.、图. 表.三组外周血表面表达水平的比较;士 % 组别 一????????????????????????????????????????????????????? ???????????????????????????????????????????一 ..? 初诊组 .?.? 恢复组 .. 正常对照组 注:‘与正常对照组比较. 天津医科大学硕士学位论文 患者数量及功能的研究 国麓潼萋?袁墨:口嚣墨 图.三组外周血表面表达水平的结果比较 外周血表面共刺激分子表达 初治组外周血表面表达水平为.?.%,明显高 于正常对照组.?.%球.,初治组外周血表面表达 水平与恢复组.?.%差异无统计学意义.,恢复组外周血 表面表达水平与正常对照组差异也无统计学意义.。表.、图 . 表.三组外周血表面表达水平的比较; % 组别 .?. 恢复组 .?. 正常对照组 注:‘与正常对照组比较. 天津医科大学硕士学位论文 患者数量及功能的研究 ??瓣?蔼?弱秘?笛玛 图.三组外周血表面表达水平的结果比较 临床意义 . 亚群与临床指标的相关性分析 亚群与/水平的相关性分析 组外周血占的比例与/水平呈负相关一., .图.;占的比例与/水平呈正相关., .图.;/比值与水平呈负相关一.,. 图.。 口% 图. 占的比例与/水平呈负相关 天津医科大学硕士学位论文 患者数量及功能的 图. 占的比例与/水平呈正相关 图. /比值与/水平呈负相关 亚群与抗体 数量的相关性分析 组外周血占的比例与抗体数量呈 关.,.图.;占的与抗体 数量无相关性.;/与抗体数量呈正 .,.图.。 天津医科大学硕士学位论文 患者数量及功能的研究 图. 占的比例与抗体数量呈正相关 ?‘ 叮 ?弓王辞 图. /与抗体数量呈正相关 亚群与 /的相关性分析 组外周血占的比例与/呈正相关., .图.;占的比例与/无相关性.; /比值与/呈正相关.,.图.。 天津医科大学硕士学位论文 患者数量及功能的研究 图. 占的与/呈正相关 图. /比值与/呈正相关 亚群与血象的相关性分析 组外周血占的比例与血红蛋白水平和血小板水平均呈负 相关一.,.一.,.图.、图.,与白细胞无明 显相关性.。组外周血占的比例与血红蛋白水平呈正 天津医科大学硕士学位论文 患者数量及功能的研究 相关.,.图.,与血小板及白细胞水平无明显相关性.。 /比值与血红蛋白和血小板水平均呈负相关一.,. 一.,.图.、图.,与白细胞水平无明显相关性.。 瞄 图. 占的比例与血红蛋白水平呈负相关 卫 篇 五 图. 占的比例与血小板水平呈负相关 天津医科大学硕士学位论文 患者数量及功能的研究 图. 占的比例与血红蛋白水平呈正相关 图. /比值与血红蛋白水平呈负相关 图? /比值与血小板水平呈负相关 天津医科大学硕士学位论文 患者数量及功能的研究 . 表面共刺激分子、表达水平与临床指标的相关性分析 表面共刺激分子、表达水平与/的相关性分析 组外周血表面共刺激分子表达水平与/水平呈负相 关一.,.图.;表达水平与/无显著相关性 .。组外周血表面共刺激分子、表达水平与/ 水平均无明显相关性.。? 图. 表面的表达水平与/水平呈负相关 表面共刺激分子、表达水平与抗体数量的 相关性分析 组外周血表面共刺激分子表达水平与抗体 数量呈正相关.,.图.;表达水平与抗体 数量无显著相关性.。组外周血表面共刺激分子、 表达水平与抗体数量均无明显相关性.。 天津医科大学硕士学位论文 患者数量及功能的研究 一.至??芒直 ,屯。丑; 图. 表面表达水平与抗体数量呈正相关 表面共刺激分子、表达水平与/相关性分析 组外周血表面共刺激分子表达水平与/呈正 相关.,.图.;表达水平与/无明显 相关性胪.。组外周血表面共刺激分子、表达水平 与/均无明显相关性.。 】 图. 表面表达水平与/呈正相关 表面共刺激分子、表达水平与血象的相关性分析 组外周血表面共刺激分子表达水平与血红蛋白及血小板水 平均呈负相关一.,.一.,.图.、图.,与 白细胞水平无显著相关性.。组外周血表面共刺激分子 表达水平与血红蛋白、血小板及白细胞水平均呈负相关一.,. 天津医科大学硕士学位论文 患者数量及功能的研究 ..,.一,.图.、图.、图.。组外 周血表面共刺激分子表达水平与血红蛋白和白细胞水平均呈负 相关 ..,... ,.图.、图.,与血小板水平无显 著相关性.。组外周血表面共刺激分子表达水平与白细 胞水平呈负相关一.,.图.,与血红蛋白与血小板水平均无 显著相关性.。 佯 图. 表面表达水平与血红蛋白水平呈负相关 图. 表面表达水平与血小板水平呈负相关 天津医科大学硕士学位论文 患者数量及功能的研究 瞄 图. 表面表达水平与血红蛋白水平呈负相关 图. 表面表达水平与血小板水平呈负相关 图. 表面表达水平与白细胞水平呈负相关天津医科大学硕士学位论 文 患者数量及功能的研究 % 图. 表面表达水平与血红蛋白水平呈负相关 图. 表面表达水平与白细胞水平呈负相关 图. 表面表达水平与白细胞水平呈负相关 天津医科大学硕士学位论文 患者数量及功能的研究 讨论 是从骨髓衰竭性疾病中分离出来的一类自身免疫性血细胞减少 症,目前 认为其发病机制是由于受到某种未知病原体的刺激,树突状细胞亚型异常,使 得淋巴细胞调控失衡,细胞侈升高导致淋巴细胞数量、亚群、功能异 常,进而产生抗骨髓未成熟造血细胞的自身抗体并破坏或抑制造血细胞,最后 导致外周血细胞减少【‘】,此类患者有如下临床特征:?两系或全血细胞减少, 网织红细胞和或中性粒细胞比例不低;?骨髓中红系细胞比例正常或偏高, 易见红系细胞“造血岛”及红细胞吞噬现象:?试验阳性或凭 检测到膜自身抗体;?对大剂量丙种球蛋/糖皮质激素等免疫抑 制剂治疗有效。本课题组前期研究己证实自身抗体是通过不同的途径破坏或抑 制造血细胞,包括:型自身抗体主要通过激活巨噬细胞吞噬和破坏带有自 身抗体的骨髓造血细胞【 ;型自身抗体主要通过激活补体系统溶解自身骨 髓造血细胞卜”】;?自身抗体封闭或抑制骨髓造血细胞膜功能抗原受体如 ,导致功能抗原无法发挥作用,使造血细胞增殖和分化受到抑制怛?。 树突状细胞是目前发现的体内功能最强的,在激发和控制获得性免疫反 应的程度和范围中起关键作用。起源于造血干细胞,根据分化来源途径不同 ,分 分为币。是中的主要部分,表面标志为‘.十 泌一,活化淋巴细胞,促进向细胞分化,诱导机体产生免疫应答; 而表面标志为‘?,分泌一、,低分泌一,允许 向宝胞分化,诱导机体产生免疫耐受【,引。 根据抗原递呈时的状态和活性不同,可分为未成熟和成熟。人 体内大部分处于未成熟状态,表达低水平的共刺激因子/?、 /、、等和粘附因子细胞间粘附分子//和淋巴细胞 功能相关抗原等,可导致特异性细胞无反应、发生凋亡或产生调节性 细胞,而诱导免疫耐受,但未成熟具有强大的摄取抗原和处理抗原的能力, 以受体介导、吞噬和吞饮等方式摄取抗原,而逐渐分化为成熟,而成熟 表达高水平的共刺激因子和粘附因子,选择并激活有相应抗原受体的淋巴细 胞,同时显著下调其抗原摄取能力,从而诱导免疫应答。 ,而且在诱导免疫耐受 许多证据表明,不仅是机体免疫应答的始动者 等方面发挥重要作用,己发现在多种自身免疫性疾女免疫。生板减少性 紫癜、系统性红斑狼疮,类风湿性关节炎中数量或/患者数量及功能的研究 天津医科大学硕士学位论文 和功能异常【.。 本实验发现初治组患者比恢复组和正常对照组明显增高, /比值明显增高, 提示发病期的患者增多导致/比 例失衡,而允许向细胞分化,使得患者与平衡向 增高漂移,这与我们既往检测患者淋巴细胞正调控因子即型 细胞因子一、 一蛋白及水平的表达,均明显高过正常对照及其 他非型的全血细胞减少症患者,检测其细胞数量及功能均明显超过 正常人,与平衡向增高漂移的结果相一致【。本实验结果与 /及细胞亚群数量进行临床相关分析,提示患者增多,与 /水平呈负相关,与/呈正相关,均支持上述观点。 本实验研究两个亚群的共刺激分子、的表达发现:初治组 患者表面、的表达均明显高于正常对照组,并且明显高于 恢复组,这提示在的发病机制中,的异常起了重要的作用,表面 的共刺激分子表达增强,提示功匕增强,从而使机体的免疫应答增强: 表达的是促使向分化的协同刺激分子,主要诱导 分化,对分化也有影响。、高表达可使抗原递呈功能增强, 细胞过度活化,启动强烈的自身免疫反应。本实验研究两个亚群的共刺激分 子、的表达发现,患者表面的、的水平与正常 人相比明显升高,增高尤为明显,表明患者体内更倾向于成熟状 态,使机体内自身免疫反应过度,免疫平衡紊乱,从而产生自身抗体,抑制或 等研究的、 破坏骨髓造血,从而导致外周血细胞减少。这与 的表达水平结果一致【】。而表面表达与/呈负相关,与细 胞亚群数量呈正相关,这与我们在发病机制』的研究中观点一致。 近年来许多研究发现?主要由产生,当?大量存在时,可促 使未成熟的分化成熟,从而使自身反应性淋巴细胞分化增殖而造成初 次免疫损伤,并且该效应可在随后的?捕获,递呈自身抗原的恶性循环 中不断放大,而促进自身免疫性疾病的发展”】。本实验结果显示增多,并 且处于过度成熟状态,可能通过上述机制促进的发生发展。 将患者亚群及共刺激分子、的表达水平与血红蛋白、 血小板、白细胞等指标进行相关性分析发现,占的比例与血红蛋 白、血小板水平均呈负相关,与白细胞无明显相关性;/比值与血红蛋 患者数量及功能的研究 天津医科大学硕士学位论文 白和血小板水平均呈负相关;表面共刺激分子表达水平与血红蛋白、 血小板水平均呈负相关,与白细胞水平无明显相关性,表达水平与血红蛋 白、血小板、白细胞水平均呈负相关。提示患者数量增加,功能亢进, 且数量与功能状态的变化具有一致性,随着治疗有效,逐渐趋于正常。以上结 果高度提示患者数量增多,功能亢进,在免疫发病机制中发挥重 要作用。 天津医科大学硕士学位论文 结论 结论 .初治组占的比例明显高于恢复组和正常对照组,恢复 组明显高于正常对照组;初治组/明显高于恢复组和正常对照组。 初治组外周血表面、的表达水平均明显高于恢复组和正常 对照组,恢复组表面表达水平明显高于正常对照组。 .组外周血占的比例与/呈负相关,与 抗体数量呈正相关,与/呈正相关,与血红蛋白和血小板水 平均呈负相关;/与/水平呈负相关,与抗体数 量呈正相关,与/呈正相关,与血红蛋白和血小板水平均呈负相 关;组外周血表面共刺激分子表达水平与血红蛋白、血小板呈 负相关;表达水平与/呈负相关,与抗体数量呈正 相关,与/呈正相关,与血红蛋白、血小板、白细胞水平均呈负 相关。 .在患者中数量增加,功能亢进,且数量与功能状态的变化具有 一致性,随着治疗有效,逐渐趋于正常。在免疫发病机制中可能发挥 重要作用,有可能成为该疾病潜在的治疗靶点。 天津医科大学硕士学位论文 参考文献 参考文献 虹,邵宗鸿,曹增,等.骨髓单个核细胞抗人球蛋分型试验.中华血液 学杂志,,:。. 何虹,邵宗鸿,刘鸿,等.与异常免疫相关的全血细胞减少症.中华血液学 杂志,,:.. 付蓉,邵宗鸿,刘鸿,等.与免疫相关的血细胞减少患者骨髓造血细胞自身抗 体的研究.中华血液学杂志,,:?. 宗鸿,付蓉.免疫相关性血细胞减少症一一种新认知的疾病上.中 国医 刊,,:?. 邵宗鸿,付蓉.免疫相关性血细胞减少症一一种新认知的疾病下.中国医 刊,,:?. . , , : . ,,:?. , , , . : . ,,:?. 付蓉,邵宗鸿.淋巴细胞与自身免疫性疾病.国外医学输血及血液学 分册,,.:?. 付蓉,邵宗鸿,刘鸿,等.免疫相关全血细胞减少患者骨髓淋巴细胞数量及 凋亡相关蛋白水平.中华血液学杂志,,:?. 付蓉,邵宗鸿,刘鸿,等.免疫相关全血细胞减少患者骨髓造血祖细胞增殖 功能及辅助性淋巴细胞功能观察.中华血液学杂志,,:?.. , ,: . .,,, ,.,, ? 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