【doc】糖蛋白抗原19—9时间分辨荧光免疫分析

【doc】糖蛋白抗原19—9时间分辨荧光免疫分析 糖蛋白抗原19—9时间分辨荧光免疫分析 jI 中华检验医学杂志200O年5月第23卷第3期GhinJI^,200O.~ol23.No3?l 粕滏白耽屎f7—7向支表摘要 糖蛋白抗原l9_9时间分辨荧光免疫分析-崖杭辞I 薹堕曼兰曼朱利国谭成蔡刚明金坚 糖蛋白抗原(CA)19-9是一种胃肠道的肿瘤相关抗原, 在胰腺癌患者血清中含量较高,在胆囊癌,胆管癌,胃癌,结 直肠癌等也有一定的阳性率,血清CA19-9的检测对胰腺癌 等癌症的诊断和术后监测有其较高的价值….近年发展的 时间分辨荧光测定技术具有测量灵敏度高,操作简便,示踪 物稳定,定量分析量程宽,无樗染和应用范围广等优点J. 覆们采用铕标技术,对抗原不同位点的单克隆抗体(单抗)用 夹心法进行了CAI~-9时间分辨荧光免疫分析. 一 ,材料和方法 1.材料和试剂:抗CA19-9单抗(为192号和241号)由 Biodesi~n提供.E标记盒,Eu3发光增强液及全自动时间 分辨荧光检测仪(Auto讲螂)均为EC,&~Wallae产品. 2固相抗体翩备J:将192号单抗用50mmol/LN丑2c一 NaUCO~(pH9.6)缓冲液包被至96孔微孔板,4?放置过夜. 封闭密封后置一2o?冷冻保存. 3.E的单抗制备:参照标记盒说明书操作.取 500(1s/L)24l号单抗加人含0.1mg的El?.N2-[p-异氰 酸一苄基.二乙烯三胺四乙酸(E.trffA)冻干粉的小瓶中, 30%磁力搅拌反应如h.反应液经用?mmol/L晦Hd(出 78)缓冲液平衡的Seldmro~CL6B柱层析,^瑚监测记录蛋 白峰 4测定方法:采用平衡法进行CA19-9时间分辨荧光测 定法,即在包被有192号单抗的96孔微孔扳上,每孔依次加 人25t,dCA19-9参考标准或待测血清200,以反应缓冲渡 1:1000稀释的E一241号单抗,25%震蔼孵育2h后,用洗 涤液洗涤6次.再加增强液200,25%震荡反应5r血,荧 光检测.全部过程均在AutoD唧1删上自动完成,软件设 置由奉所自编 二,结果 1.方法的特异性:将癌胚抗原(cEA),甲胎蛋白(AlP), CA125和CA153分别配成10—500kU/L,10—1000kU/L, 121,732kU/l和277—243kU/L一系列不同浓度,代替标 作者单位:214053无锯.江苏省原于医学研究所校医学国家重点 宴驻室 .?2 准曲线中的CA19—9参考标准.在上述浓度范围内.CEA对 CA19-9时间分辨荧光测定有6%交叉反应.AFP,C~125和 CA153对CA19-9时间分辨荧光测定均无交叉反应. 2.精密度和回收率:本方法的批内和批间变异系数 (6v)分别为0.0326和0.0575,8批标准曲线的ABCV均小于 2.55,可测范围为1869—967kU/L0回收率为99.61%. 3.灵敏度和稳定性:蹦零剂量点发光值均值加2s后的 发光值在标准曲线上得到的相应值为166?,L.8条不同 时间进行的CM9-9时间分辨荧光测定的赦点均值?, ED?和EI~Yr别为40.55kU/L,1142kL和3969kL/L. 4.临床应用:采用CAI9—9时间分辨荧光测定法和化学 发光法对78例血清样品进行检测.两者结果基本相符,72例 阴性血清样品平均值为(1473?12.O1)kU/L.建议阳性阈值 为38kU/L,其中化学发光法检出的6倒阳性血清样品采用 CA19-9时间分辨荧光测定法检测均为阳性. 三,讨论 奉方法适于测量血清CA19—9的含量.Eu]一241号单抗 冻干品一30%保存6个月后免疫反应参数基本未改变.莪 们曾把高含量的cMg-9血清样品经1:l0一l:5?稀释后用 奉方法测定,换算后的CA19-9含量非常接近;用该系列稀释 血清代替CA19—9参考标准作标准曲线.其斜率与CM9-9的 标准曲线斜率基本一致,表明CM9-9时间分辨荧光测定法 有良好的健全性,血清基质对奉方法没有明显影响=8孔重 复4组参考标准点的ABC3'均<255批内及批间重复性研 究亦了奉方法的可靠性. 参考文献 1李髟林,主编.中华医学检验全书(下卷)北京:人民『J生出版 社.19962343. 2HemmilaJ,I)akubuS,JaVM.etalEurop[~lasalabelin thne-m~l,,od~uommetneBss?,alto1Bi0cI虬.t984.137 335-338 3黄腱,浦洪教.朱寒珍,等癌胚抗原试管固相免疫放射分析核 技术.1995,11:699-703 t收稿日期:1999—12.29) (本文编辑:臧焰) 本刊"科研设计点评,"会议纪要,"学术讨论"等栏目,欢迎作者踊跃投稿. 厂 . , ,