液体染色培养基用于白色假丝酵母菌的鉴定

液体染色培养基用于白色假丝酵母菌的鉴定 液体染色培养基用于白色假丝酵母菌的鉴 定 218临床检验杂志2006年第24卷第3期ChineseJournalofClinicalLaboratoryScience,2006,Vo1.24,No.3 文章编号:l00l-764x(2006)03-0218-0l中图分类号:R446.5文献标识码:B?实验技术? 液体染色培养基用于白色假丝酵母菌的鉴定 魏莲花,张俭,邹凤梅,刘刚(甘肃省临床检验中心,兰州730000) 关键词:液体染色培养基;白色假丝酵母茵;芽管;厚膜孢子 芽管试验是鉴定白色假丝酵母菌的关键试验,传统的芽 管检测的试剂多为动物血清.我们研制了一种液体染色培 养基,用来检测白色假丝酵母菌的芽管和厚膜孢子,临床应 用效果良好,报道如下. 1材料 1,1菌株来源白色假丝酵母菌ATCC14053,ATCC 90028,ATCC64550,ATCC64548,热带假丝酵母菌ATCC 750,克柔假丝酵母菌ATCC6258,光滑假丝酵母菌ATCC 2238NL,近平滑假丝酵母茵ATCC22019均由广州乐通泰公 司提供.由甘肃省临床检验中心自门诊和住院患者的痰液, 尿液,粪便,分泌物等中分离的假丝酵母菌共146株,其中白 色假丝酵母菌132株,热带假丝酵母菌lO株,克柔假丝酵母 菌2株,光滑假丝酵母菌2株,均经API-20CAUX卡鉴定证 实. 1.2液体染色培养基主要试剂葡萄糖,吐温-80,尿素等 购自上海化工试剂厂,蛋白胨购自广州乐通泰公司. 1.3正常人血清医院检验科生化室提供. 2 2.1菌液准备将各种假丝酵母菌菌株及临床分离株 分别接种沙保弱琼脂,35?培养48h,挑取菌落,混匀于2ml 无菌蒸馏水中,在浊度仪上调整菌液浓度为4个麦氏单位 (约8×10/m1). 2.2液体染色培养基配制选择适合假丝酵母菌生长繁殖 的液体沙保弱培养基(100ml蒸馏水中含葡萄糖5g,蛋白胨 10g)作基础…,在其中添加(NH4)2SO40.05g,KH2PO42g, MgSO.0.05g,CaCI20.05g.在上述培养基中添加刺激厚膜 孢子形成的吐温-802.0g,玉米粉1.0g,氯霉素0.05g,调 pH为6.0,6,8.高压灭菌后,加入经过滤除菌的1mol/L 尿素0.03ml,贮存备用.接种待测菌并培养后,往菌液中滴 加lOg/L美蓝0.5ml,使生成的芽管和厚膜孢子着色,便于 镜下观察. 2.3液体染色培养基与人血清检测芽管对比试验在无菌 试管中分别加入0.5ml液体培养基或人血清,每管加入相应 菌液100,置35?温育60,120,180min,分别用加样器取 菌液100至载玻片上,高倍镜下计数100个假丝酵母菌所 产生的芽管数. 2.4厚膜孢子检测继续培养24,72h后,取菌液于载玻 片上,加盖玻片在油镜下观察厚膜孢子. 3结果 3.1液体染色培养基与人血清检测白色假丝酵母菌芽管 结果见1. 3.2液体染色培养基测定芽管的特异性3h内,白色假丝 酵母菌标准菌株(4株)和临床分离株(132株)均产生芽管, 而热带假丝酵母菌,克柔假丝酵母菌及光滑假丝酵母菌标准 菌株和临床分离株均不产生芽管. 3.3白色假丝酵母菌在液体染色培养基中形成的芽管及厚 膜孢子见附页彩图1,2. 表1液体染色培养基与人血清检测白色假丝酵母菌芽管比较 4讨论 本文的液体染色培养基适合各种假丝酵母菌生长, 尤其在温育30min后即可观察到芽管的形成,适合白色假丝 酵母菌快速检验.继续培养24,72h,还可观察到白色假丝 酵母菌形成厚膜孢子.热带假丝酵母菌,克柔假丝酵母菌, 光滑假丝酵母菌等在该培养基上3h内不产生芽管,因此该 培养基特异性较强.与传统的动物血清法对比,在该培养基 中芽管形成较快,培养基成分为实验室常用的化学试剂,来 源,配制均较方便,无病原体存在,比常用的人血清安全,适 合基层实验室快速鉴定白色假丝酵母菌.能否利用该培养 基对其他假丝酵母菌菌如热带假丝酵母菌,克柔假丝酵母菌 等进行辅助鉴定如观察假菌丝形态,尿素分解试验等正在研 究中.新鲜配制的培养基效果较好,高压除菌后可用半年. 参考文献: [1]章强强,VidottoV,AceattatisG,等.葡萄糖对白色念珠菌芽管形 成的影响[J].中国皮肤性病杂志,1998,12(3):140.141. (收稿日期:2005-07-01.修回日期:2o06-01珈) (本文编辑:杨林) 正文见191页) I培_荐4心呐I.1包结 正文见215页 (正文见218页l nH IH染色仲件ll悱 x40O) 降『2I立养8的1色结J 2fl~, 72h麓I枷莽厝成的厚膜孢F(x0(M))