党参多糖对环磷酰胺损伤小鼠造血和骨髓细胞增殖能力的影响

党参多糖对环磷酰胺损伤小鼠造血和骨髓细胞增殖能力的影响 大连医科大学2012届本科生毕业论文 党参多糖对环磷酰胺损伤小鼠 造血和骨髓细胞增殖能力的影响 摘 要 目的: 探讨党参多糖对环磷酰胺诱导的化学损伤小鼠造血和骨髓细胞增殖能力的影响。 方法 :36只小鼠随机分为治疗组、CTX组和对照组。小鼠腹腔注射CTX 200 mg,kg制备化学药物损伤小鼠模型。在注射CIX前26 h和20 h，党参多糖组和CTX组各注射党参多糖250ug/kg等体积的PBS缓冲液稀释液，对照组只注射等体积的PBS缓冲液。通过体外体外血细胞计数测定党参多糖对CIX损伤小鼠造血能力的影响;通过测定小鼠胸腺指数和脾指数变化，以及巨噬细胞吞噬实验探究党参多糖对小鼠免疫能力的影响。结果:注射CTX后第7天CTX组红细胞数较对照组显著减少;第14天党参多糖组红细胞数较CTX组显著增多。小鼠胸腺指数脾指数增加明显，巨噬细胞吞噬能力显著增强，其骨髓细胞增值能力显著提高。结论:党参多糖对小鼠造血能力和骨髓细胞增殖能力有显著的提高作用。 。 关键词:党参多糖; 环磷酰胺; 造血能力;骨髓细胞 大连医科大学2012届本科生毕业论文 Polysaccharide cyclophosphamide injury in mouse hematopoietic and bone marrow cell proliferation ability Abstract: Objective To investigate the impact of chemical injury in mice induced by Codonopsis polysaccharide on hematopoietic and bone marrow cell proliferation ability. 36 mice were randomly divided into treatment group, CTX group and control group. Mice by intraperitoneal injection of the CTX 200 mg / kg of preparation of the chemicals damage the mouse model. Before the injection CIX 26 h and 20 h,, the Codonopsis polysaccharide group and the CTX group was injected Polysaccharide 250ug/kg such as volume in PBS diluent control group only injection volume of PBS buffer. Determination of Polysaccharide on the the CIX damage of murine hematopoietic ability in vitro in vitro blood cell count; by measuring changes in the thymus index and spleen index, as well as macrophage phagocytosis experiment exploring Polysaccharide immunity in mice. Red blood cell count of the seven days of the CTX group than the control group after injection of CTX significantly reduced; 14 days Polysaccharide group red blood cell count more than in CTX group. Increased significantly the thymus index, spleen index, macrophage phagocytic capacity was significantly enhanced, value-added capacity of bone marrow cells significantly increased. Keywords: Polysaccharide; cyclophosphamide; hematopoietic capacity; bone marrow cells ? 大连医科大学2012届本科生毕业论文 一( 前言 1.1 党参简介 党参为桔梗科植物党参Codonopsis pilosula(Franch)的干燥根。党参及其同属多种植物的干燥根主要分布于黑龙江、吉林、辽宁、陕西、甘肃、宁夏和四川等省。始载于《本草从新》，性味甘、平、无毒。归脾、肺经;有补中益气、生津止渴、活血化淤等功效，主治脾胃虚弱、中气不足、肺气亏虚、热病伤津、气短口渴、血虚萎黄和头晕心慌等症，临床上可单独使用或与其他中药配合使用。作为传统名贵中药才，在治疗重症方面的功效不言而喻。本实验以高效抗癌药物环磷酰胺所致的低免疫能力小鼠为实验目标，研究党参多糖提高小鼠造血能力和免疫能力方面的功效，旨在于为癌症等重症患者放化疗后机体造血免疫能力低下的辅助治疗手段。 1.2应用前景 1.2.1由党参组成的方剂，传统的如四君子汤和十全大补丸等，有补脾肺气和养血生津之效，但其药效弱，且不能持久，故需在临床上加大剂量。临床上常用于治疗脾肺虚弱、脾胃虚寒、呕吐泄泻、胸腹痛、消化不良、气血两亏、体倦无力、久泻或脱肛患者，以增强机体抗病能力，还常用于治疗缺铁性、营养性贫血等患者。立足于本实验，可以提取有效成分，使得药物有效成分浓度增大，药效提高，作用时间延长，只服用有效成分，还能减小用药剂量。用以改善传统用药的缺陷。同时，党参在抑菌方面作用，可以用于调理有细菌引起的 1 大连医科大学2012届本科生毕业论文 胃肠道炎症等，减少人体对抗生素的依赖，发挥天然产物无毒，副作用较小的优势，同时减少传统抗生素生产中产生的污染问题，可谓一举多得。 1.2.2在营养保健品上的应用 党参含多糖、葡萄糖、果糖、菊糖、蔗糖、磷酸盐和17种氨基 酸，其中包括赖氨酸等7种人体必需氨基酸，此外还含皂苷、挥发 油、脂肪和钾、钠、镁、锌、铜和铁等14种元素以及维生素B 、B。 等，立足于本实验，党参在其造血功能和免疫能力上的功效，以及其对常规致病菌的抑制作用，人们可以开发出党参系列产品。这些保健药品既可以利用其药用价值，又可以发挥其营养价值，突破了传统的果蔬保健模式，对许多中草药补品、天然营养品的加工和新产品的开发具有重要的意义。 2 大连医科大学2012届本科生毕业论文 二( 材料与设备 2.1设备 FA2004B电子分析天平，上海精密科学仪器有限公司; SC-2556低速离心机，安徽中科中佳仪器有限公司;RE-301旋转蒸发仪，北京瑞成伟业仪器设备有限公司;高压蒸汽灭菌锅，上海博讯实业有限公司医疗设备厂;SCC-A-700洁净工作台，上海三超净化专业有限公司;Thermo酶标仪，赛默飞世尔科技(上海)有限公司;血细胞计数器，滤菌器。 2.2试剂 无水乙醇，蒸馏水，注射用无菌水，胰蛋白胨，党参多糖提取物，注射用环磷酰胺。 2.3原料 2.3.1 动物昆明种小鼠，6,8周龄，体重l8,24g，由大连医科大学实验动物中心提供。 2.3.2 药物党参采购于甘肃省陇西县，党参多糖为大连医科大学生物技术系实验室提取。 3 大连医科大学2012届本科生毕业论文 三(实验方法 3(1 动物造模及分组 随机将小鼠分为党参提取物(低、高2个剂量)组及正常对照组和模型组，共6组，每组6只。正常对照组与模型组每日用注射用无菌水灌胃，共14 d;模型组在第3天开始腹腔注射环磷酰胺(17(5 mg?kg )，共4 d;试验组分别用党参提取物低剂量0(25 g?kg 高剂量0.8g?kg，持续14d，并在第3天开始腹腔注射环磷酰胺(17(5 mg?kg )，共4 d。分别于第七天和第十四天断尾取血和处死检测各项指标。 3(2 外周血象测定分别于试验的第7d和第14d断尾采血10ul ，用血细胞计数板数白细胞总数(WBC)、红细胞总数(RBC)。 3(3 小鼠脾脏指数、胸腺指数测定 第14d称重，眼眶采血后，将小鼠处死，取脾脏和胸腺。用滤纸将表面的组织液尽量吸干后，称湿重，并计算脾脏指数和胸腺指数[胸腺、脾脏指数:胸腺、脾脏质量(mg),鼠体重(g)]。 3(4 小鼠血清溶血素滴度测定(血凝法) 实验结束前的第4 d免疫动物，每只腹腔注射 2, 的绵羊红细胞0.2 mL。第十四天摘除眼球采血，分离血清备用。凝集反应:用生理盐水将血清倍比稀释于微量反应板内，各50 L，加入0(5, 绵羊红细胞50 L，混匀，装入湿润饭盒内盖好，置于37? 温箱3 h后，观察抗体凝集反应程度。 3( 5小鼠腹腔单核吞噬细胞吞噬功能的测定 小鼠注射2, 鸡红细胞，1 mL,只;30 min后注射生理盐水1 mL,只，断颈处死小鼠，吸取腹腔液涂片，1:l丙酮甲醇固定5 min，染色后油镜观察。每份标 4 大连医科大学2012届本科生毕业论文 本油镜下观察200个巨噬细胞，计算吞噬率。吞噬率=(吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数,200个巨噬细胞)X100,。 3. 6有核骨髓细胞计数 制备骨髓有核细胞悬液注射CTX后第7天，第14天，每组小鼠以颈椎脱臼法处死。取出股骨，剔除肌肉和结缔组织，剪开股骨两头，用6号针头以RPMI1640液冲出骨髓细胞，再用4号针头过滤制成单个骨髓细胞悬液，检测骨髓有核细胞(bone marrow karyocyte，BMK)数。 3(7 统计方法在Exel软件进行。实验数据以 ?S表示，多组计量资料进行单因素方差分析，组间比较采用t检验，P<0(05为统计学意义。 5 大连医科大学2012届本科生毕业论文 四( 结果 4(1对环磷酰胺所致白细胞减少症模型小鼠外周血象的影响由表1可 见，腹腔注射环磷酰胺后(即试验的第7 d)，模型组与给药组白细胞 明显低于正常组(P0(05)，但第14天骨髓有核细胞数明显增加，与CTX 组比较差异有统计学意义(P<0(01)。 组别 剂量 白细胞比率(%) 7天 14天 正常组 无菌水2ml 39.7 34.5 模型组 CTX 17(5 mg?kg 42.2 32.6 低浓度组 0.25g.kg 55.3 66.9 高浓度组 0.8g.kg 61.9 64.4 模型低浓度组 CTX 17(5 mg?kg+ 0.25g.kg 48.7 82.4 模型高浓度组 CTX 17(5 mg?kg+0.8g.kg 66.9 69.2 7 大连医科大学2012届本科生毕业论文 综上所述，党参多糖对环磷酰胺损伤小鼠造血功能骨髓细胞增殖能力有着显著地提高作用。， 五(讨论 环磷酰胺是肿瘤化疗最常用的烷化剂，通过与讨论DNA交叉联结而直接破坏DNA，其疗效高低与血 药浓度成正比。CTX除对G期细胞作用0较弱外，对增殖周期中各期细胞均有破坏作用，还可致染色体畸变、突变而影响分裂，引起造血细胞的坏死、凋亡。为研究党参多糖对CTX化疗后小鼠骨髓造血干细胞增殖、分化能力的影响，我们进行了上述实验。实验结果表明党参多糖具有增强小鼠血细胞增值能力和细胞免 8 大连医科大学2012届本科生毕业论文 疫、体液免疫及非特异性免疫之功效，为临床进一步用药奠定了良好的实验基础。但是由于实验采用的是党参粗多糖，其化学组分相对复杂，其确切的作用机制还待进一步研究。 六(结论 党参多糖对环磷酰胺损伤小鼠造血功能骨髓细胞增殖能力有着显著地提高作用。 9 大连医科大学2012届本科生毕业论文 参考文献 (1) JCouser W G，Neilson E G(Overview of renal inflammationimmunologic renal diseases 2 [M ](Philadelphia:Lippineott—Raven Publishers，2001:47( (2) 周洪明，操继跃(中草药免疫促进剂的药效研究进展(中国兽药导报，2002，36(6):42( (3) 粟群芳，周紫婧(党参超微饮片对小鼠抗疲劳和耐缺氧作用的观察[J](中医药导报，2010，8(16):95( (4)吴祖泽，贺福初，裴雪涛(造血调控[M](上海:上海医科大学出版社，2000:101—111( (5)高瑛，杨岚，田琼(血小板因子4对急性放射损伤小鼠骨髓基质细胞的保护作用[J](第四军医大学报，2005，26(16):1457—1459( (6)黄涛，唐瑛，邹瑞，等(党参水煎提取物对化学药品诱导小鼠学习记忆障碍的影响(华南国防医学杂志，2007，21(2):10—12，7 (7)徐叔云，卞如濂，陈修(药理实验方法学【M】(北京，人民卫 10 大连医科大学2012届本科生毕业论文 生出版社，2002(1429，1436 党参研究进展 党参为桔梗科植物党参Codonopsis pilosula(Franch)的干燥根。党参及其同属多种植物的干燥根主要分布于黑龙江、吉林、辽宁、陕西、甘肃、宁夏和四川等省。始载于《本草从新》，性味甘、平、无毒。归脾、肺经;有补中益气、生津止渴、活血化淤等功效，主治脾胃虚弱、中气不足、肺气亏虚、热病伤津、气短口渴、血虚萎黄和头晕心慌等症，临床上可单独使用或与其他中药配合使用。近年来，党参在治疗冠心病、高血脂症、低血压病和功能性子宫出血等病症方面取得了新的进展，并将党参用于保健食品的研制与开发，使其用量速增。 本文在分析中药党参中的主要化学成分的基础上，

设计

领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计

如下实验来研究党参不同成分的作用。实验一，党参醇提物的体外抑菌活性的研究;实验二，党参水提物对小鼠造血能力和免疫能力的影响。 l化学成分 1(1氨基酸。据研究，党参含有苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘 11 大连医科大学2012届本科生毕业论文 氨酸、胱氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、赖氨酸、脯氨酸、精氨酸和组氨酸等多种氨基酸。 1(2微量元素。党参含有多种微量元素，如ca、Mg、zn、Fe、cu、Mn等。 1(3糖类。李艳孙萍等用不同方法对党参单糖及多糖进行提取及含量测定进行研究，王新杰和韩桂茹等对不同产地党参的单糖及多糖含量进行比较，结果表明，党参含有多种糖类成分。 1(4甾体类。包括菠甾醇、菠甾酮、豆甾醇、豆甾酮、D葡萄糖甙、豆甾烯醇和豆甾烯酮。 1(5生物碱及含N成分。包括胆碱、正丁基脲基甲酸酯，党参碱和5一羟基，2一羟甲基吡啶。 1(6党参甙。包括党参甙(I，?，?，?)、正己基一D葡萄糖甙、a—D果糖乙醇甙、丁香甙和肛D葡萄糖乙醇甙。 1(7挥发性成分。包括棕榈酸、己酸、庚酸、辛酸、壬酸、壬二酸、十二酸、十四酸、十五酸、十六酸、十八酸、十八碳二烯酸、2,4壬二烯酸、2烯醇、叔丁基苯、正十五烷、1，5-二异丁基，3，3二甲基(3(1(0)环基二酮、姜黄烯、正十七烷、正十八烷、正十九烷、正二十烷、正二十一烷、正二十二烷、十四酸甲酯、十五酸甲酯、十六酸甲酯、硬脂酸甲酯、十八碳二烯酸甲酯、十六酸乙酯、棕榈酸甲酯、棕榈酸乙酯、辛酸甲酯、己醛、6一甲基、十三碳烷、2一甲基十三碳烷和3一甲基十五碳烷等。 1(8三萜类、倍半萜内酯类及其他成分包括蒲公英萜醇、蒲公 12 大连医科大学2012届本科生毕业论文 英萜醇乙酸酯、木栓酮、苍术内酯?、苍术内脂?、5一羟甲基糠醛、5一羟甲基2一糠醛、5一羟基甲糖酸、丁香醛、2一糖酸钠、香草酸、邻苯二甲酸双(2一乙基)己酯、白芷内酯、补骨脂内酯和琥珀酸等。 2药理作用 2(1对心血管系统的影响:党参水浸液和醇浸液具有明显的降压作用，其原因可能是党参提取液可以扩张周围血管，提高心排血量和脑、下肢及内脏的血液量从而不增加心率，降低血压。 2(2对血液及造血功能的影响:张天红等研究发现，党参的醇、水浸液可使小鼠的血红蛋白及红细胞增加，采用皮下注射可使白细和网织细胞显著增加，对环磷酰胺等化疗药物及放射疗法所致白细胞的下降亦有治疗作用，同时党参具有抑制血小板聚集的作用。 2(3抗应激作用:用党参提取物给小白鼠灌胃后发现，党参能明显提高其游泳能力，减缓疲劳，其机制可能与提高其中枢神经系统的兴奋性，提高机体活动能力有关。党参水提浸膏溶液和多糖溶液可使小鼠常压耗氧量减少，从而提高耐缺氧能力，延长小鼠的存活时间，对心脑等重要器官有明显的保护作用。 2(4对中枢神经系统的影响:黄涛等用党参水煎提取物对由化学药品而诱导的小鼠学习记忆障碍进行了研究，结果表明，党参水煎提取物对由化学药品所造成的记忆障碍和空间障碍有明显的改善作用，并能逆转东莨菪碱所致小鼠大脑组织中SOD活性的降低。说明党参水煎提取物有促进学习记忆能力的作用，其对抗东莨菪碱的作用可能是通过增加大脑M2乙酰胆碱能受体，而不是影响乙酰胆碱的含量。 13 大连医科大学2012届本科生毕业论文 2(5对免疫机能的影响:贾泰元等进行了党参对小鼠巨噬细胞吞 噬活性的试验，研究表明，党参明显增强了小鼠巨噬细胞的吞噬活性，从而增强了整个机体的免疫反应。王敏等进行了党参及其复方对亚急性衰老模型小鼠1122影响的研究，试验发现，党参及其复方通过提高衰老机体IL22水平而发挥了增强机体免疫功能、延缓衰老的作用。 2(6对内分泌的影响:用党参水煎液给小白鼠灌服、静脉注射或腹腔注射，均可使血浆中皮质酮量增加，其有效成分皂甙及糖类能部分拈抗地塞米松引起的血浆皮质酮下降，其作用在垂体或垂体以上水平。 2(7对胃肠功能的影响:党参煎剂均能显著提高受严重烫伤的豚鼠胃泌素GAS和胃动素MTL含量，降低血TNF浓度，因而有益于烧、烫伤后胃肠功能紊乱的调整以及肠源性感染的防治。 2(8其他影响:据研究，党参具有调节结肠平滑肌的收缩活动和对小肠推进的促进作用，同时对胃黏膜有快速保护作用。此外，党参还具有增强子宫的收缩作用和抗高温作用，从而可延长存活时间。 综合以上所述，中药党参的研究具有较高的价值，无论是临床用药还是日常生活中的保健作用，党参都不失为一味良药。特设计以下实验: 实验一:党参成分结构分析表明，党参含有大量有复杂结构的成分，这些成分有很多特殊的结构，而这些特殊结构如表面带电基团等能与细胞膜结合。利用这些性质可以推断，党参提取物可以结合到微 14 大连医科大学2012届本科生毕业论文 生物细胞表面，从而抑制或促进其生长代谢。故本实验探究党参醇提物的体外抑菌活性。 实验二:党参作为传统补药为时已久，而其活性成分如多糖等一定发挥了重要的作用。本实验立足于已有研究，进一步探究党参水提取物对机体造血能力和免疫能力的影响。 3应用前景 3(1由党参组成的方剂，传统的如四君子汤和十全大补丸等，有补脾肺气和养血生津之效，但其药效弱，且不能持久，故需在临床上加大剂量。临床上常用于治疗脾肺虚弱、脾胃虚寒、呕吐泄泻、胸腹痛、消化不良、气血两亏、体倦无力、久泻或脱肛患者，以增强机体抗病能力，还常用于治疗缺铁性、营养性贫血等患者。立足于本实验，可以提取有效成分，使得药物有效成分浓度增大，药效提高，作用时间延长，只服用有效成分，还能减小用药剂量。用以改善传统用药的缺陷。同时，党参在抑菌方面作用，可以用于调理有细菌引起的胃肠道炎症等，减少人体对抗生素的依赖，发挥天然产物无毒，副作用较小的优势，同时减少传统抗生素生产中产生的污染问题，可谓一举多得。 3.2在营养保健品上的应用 党参含多糖、葡萄糖、果糖、菊糖、蔗糖、磷酸盐和17种氨基 酸，其中包括赖氨酸等7种人体必需氨基酸，此外还含皂苷、挥发 油、脂肪和钾、钠、镁、锌、铜和铁等14种元素以及维生素B 、B。 15 大连医科大学2012届本科生毕业论文 等，立足于本实验，党参在其造血功能和免疫能力上的功效，以及其对常规致病菌的抑制作用，人们可以开发出党参系列产品。这些保健药品既可以利用其药用价值，又可以发挥其营养价值，突破了传统的果蔬保健模式，对许多中草药补品、天然营养品的加工和新产品的开发具有重要的意义。 4展望 在对党参作用不断深入研究的基础上，在应用上可进一步开发新的中成药，探索新的适应症，并加快相关保健品的研制开发，使资源优势发挥出更大的社会效益和经济效益。此外，利用DNA分子遗传标记技术和多种生物学手段，可阐明党参的物种起源及变异式样;充分利用野生党参品种，可加速培育新的抗病品种;通过寻找有效成分的功能基因，克隆和表达那些次生代谢产物所需的酶基因，利用基因

工程

路基工程安全技术交底工程项目施工成本控制工程量增项单年度零星工程技术标正投影法基本原理

和蛋白质工程等现代生物技术手段，在工业化条件下可大规模生产出有效成分，以满足市场需求。随着人们的保健意识越来越强，党参需求量会越来越大。今后党参的发展前景将会是一片光明。 16 大连医科大学2012届本科生毕业论文 参考文献 (1)李艳，孙萍，顾承志，等(新疆党参多糖的微波提取及含量测定(江西中医学院学报，2002，14(1):40-41( )李艳，孙萍，刘霞，等(新疆党参多糖的提取、舍量分析及免疫功能的初(2 步研究叨(中成药，2005，27(7):839—840( (3)王新杰(常用党参属药材单糖含量的研究(中医药研究，2001，17(1):48 ( —49 (4)张晓君，祝晨，胡黎，等(党参多糖对小鼠免疫和造血功能的影响(中药新药与临床药理，2003，14(3):174—176( (5)刘杰兰，姚丽，张吉平，等(党参化学成分的系统研究进展(山东医药工业，1999，18(1):35—36( (6)朱臣圆，贺庆，王峥涛(党参化学成分研究。中国药科大学学报，2001，32(2):94—95( (7)谢君，张义正，顾永祚(党参挥发油及脂溶性化学成分的研究(中国药学杂志，2000，35(9):583—586( (8)张天红，张馨，耿爱萍(路党参药理实验研究(时珍国医国药，2P91，12(6):488--489( (9)焦红军(党参的药理作用及其临床应用(临床医学，2005，25(4):89—92( (10)贾泰元，BENJAMIN H，LAu 8(党参对鼠J774巨噬细胞吞噬活性的增强效应(时珍国医国药，2000，11(9):769—770( (11)王少根，徐慧芹，陈侠英(党参对严重烫伤豚鼠肠道的保护作用(中国中西医结合急救杂志，2005，120):144—145( (12)郑天珍，李伟，张英福，等(党参对动物小肠推进运动的实验研究(甘肃中医学院学报，2001，18(1):19—20。 (13)李林，潘志恒，王竹立(党参等中药对胃粘膜的快速保护作用(中国医师杂志，2001，3(2):l12一l14( 17 大连医科大学2012届本科生毕业论文 致谢 本课题是在曹雪姣老师悉心指导与严格要求下完成的，感谢曹老师对我的指导与帮助。曹老师严谨的治学态度和执着的敬业精神值得我们学习。 感谢辛毅主任及全体生物技术老师的关照和帮助～ 感谢我的父母，是他们给予我生命和勇敢向前的信念～ 感谢我的母校大连医科大学，感谢母校多年的培养和教育。 最后，对在百忙之中对我的论文进行精心审阅的各位老师，致以最诚挚的谢意! 18