为了正常的体验网站,请在浏览器设置里面开启Javascript功能!

[优质文档]人二胺氧化酶(DAO)ELISA试剂盒说明书

2017-11-24 6页 doc 18KB 20阅读

用户头像

is_005190

暂无简介

举报
[优质文档]人二胺氧化酶(DAO)ELISA试剂盒说明书[优质文档]人二胺氧化酶(DAO)ELISA试剂盒说明书 人二胺氧化酶(DAO)酶联免疫分析(ELISA) 试剂盒使用说明书 厦门慧嘉生物科技有限公司 本试剂仅供研究使用 目的,本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中二胺氧化酶(DAO)的活性。 实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人二胺氧化酶(DAO)水平。用纯化的人二胺氧化酶(DAO)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入二胺氧化酶(DAO),再与HRP标记的二胺氧化酶(DAO)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗...
[优质文档]人二胺氧化酶(DAO)ELISA试剂盒说明书
[优质文档]人二胺氧化酶(DAO)ELISA试剂盒说明书 人二胺氧化酶(DAO)酶联免疫分析(ELISA) 试剂盒使用说明书 厦门慧嘉生物科技有限公司 本试剂仅供研究使用 目的,本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中二胺氧化酶(DAO)的活性。 实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人二胺氧化酶(DAO)水平。用纯化的人二胺氧化酶(DAO)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入二胺氧化酶(DAO),再与HRP标记的二胺氧化酶(DAO)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的二胺氧化酶(DAO)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定 二胺氧化酶(DAO)浓度。吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人 试剂盒组成: 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存 说明书 1份 1份 封板膜 2片(48) 2片(96) 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1×48 1×96 2-8?保存 标准品:27 U/ml 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8?保存 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8?保存 酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8?保存 样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8?保存 显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8?保存 显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8?保存 终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8?保存 浓缩洗涤液 (20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8?保存 样本处理及: 1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上 清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。 2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心 20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次 离心。 3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程 中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/ 分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞 浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分 钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。 5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备 用。标本融化后仍然保持2-8?的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器 将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待 检测,其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验,可将标本放于-20?保存,但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标 准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二 孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl, 混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔 中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各 取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混 匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准 品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl, 浓度分别为18 U/ml,12U/ml ,6 U/ml,3 U/ml,1.5 U/ml)。 2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液50μl,然后再加待测样品10μl(样 品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混 匀。 3. 温育:用封板膜封板后置37?温育30分钟。 4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。 5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此 重复5次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7. 温育:操作同3。 8. 洗涤:操作同5。 9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37?避光显色 15分钟. 10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 注意事项: 1( 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未 用完,板条应装入密封袋中保存。 2( 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 3( 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 4( 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值 大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计 算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。 5( 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 6( 底物请避光保存。 7( 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8( 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9( 本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。 计算: 以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标, 在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释 倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标 准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值 代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释 倍数,即为样品的实际浓度。 试剂盒性能: 1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。 2.批内与批间应分别小于9%和15% 检测范围: 15.6 mIU/ml-1000 mIU/ml 灵敏度: 3.9 mIU/ml 保存条件及有效期: 1.试剂盒保存:;2-8?。
/
本文档为【[优质文档]人二胺氧化酶(DAO)ELISA试剂盒说明书】,请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑, 图片更改请在作品中右键图片并更换,文字修改请直接点击文字进行修改,也可以新增和删除文档中的内容。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生,若发现您的权利被侵害,请联系客服邮件isharekefu@iask.cn,我们尽快处理。 本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用。 网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。

历史搜索

    清空历史搜索