甘氨胆酸的抗炎作用及其作用机理的研究

甘氨胆酸的抗炎作用及其作用机理的研究 内蒙古农业大学 硕士学位甘氨胆酸的抗炎作用及其作用机理的研究 姓名:李慧峰 申请学位级别:硕士 专业:基础兽医学 指导教师:李培锋 20060501 摘 要 目的:开展从羊胆汁中提取、分离和纯化甘氨胆酸(,,,;,;,,,,; ,;,,，,,,)的工艺研究，探讨,,,的抗炎作用及其作用机理。:采用除蛋白、除色素、回收乙醇、盐析、萃取等生物化学方法，从羊胆汁中分离提取,;,，采用了吸附色谱法和薄层层析色谱法分离纯化和鉴定了,,,。分别采用小鼠耳廓致炎法、皮内染料渗出法、大鼠足跖肿胀法、棉球肉芽肿胀法观察,;,的抗炎作用。采用紫外分光光度法、,,，,,方法、硝酸还原酶法探讨了,,,的抗炎作用机理。结果:采用本研究方法所提取的,,,纯度达,,(,,，回收率为,,,。抗炎作用结果显示，,;,对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀、小鼠毛细血管通透性、甲醛和琼脂所致的大鼠足跖肿胀、棉球所致的小鼠肉芽肿均有极显著的抑制作用。抗炎作用机理的研究结果显示,,,能极显著地抑制炎性组织中前列腺素,。(,,,。)的含量，,,,能显著降低正常和炎症大鼠血清中一氧化氮(,,)的含量，,,,能显著降低佐剂性关节炎大鼠血清中自三烯,,(,,,,)的含量。结论:本实验首次建立了从羊胆汁中提取甘氨胆酸的技术路线。,;,对急慢性炎症均有显著的抑制作用。,，,,的抗炎作用机理与其降低太鼠血清中的,,和,,,,水平，减少炎性组织中,,,:含量有关。关键词:甘氨胆酸;抗炎作用:作用机理 ,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,;,, ,,, ，,??,,;,,,,,,, ,, ,,,,,;,,,,; ,;,,,,,,,,;, ,,,;,;,,,,; ,;,, ,, ,, ,,,,,,,,, ;,,,,,,,,, ,;,, ,,,,(,,,,, ,,,,,;, ,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,, ,,;,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,，,,,,,;,,,, ,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,,,,,, ;,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ;,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,;,,,,,, ,,,, ,, ,,,,,,,;,,,,,, ,,, ,,,,,,,,;,,,,, ,, ,,,(，,’, ,,,,,, ,,,;,,, ,,,,,,,,,, ,,;,,,,, ,,,, ,, ,,,( ,, ,,,,, ,,, ,,,,—,,,,,,,,,,,, ,,,,;,, ,, ,,,，,;,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,;, ,,,,,”一,,,,,,,, ,, ,,;, ,,,,;,, ,, ,,,,,,，,,,, ;,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,, ,,;, ,,,,;,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,, ,, ,,, ,,,, ,,, ,,,,;,, ,, ,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,，;,,,,,;,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,;, ,, ,,,,,,,,, ,,,,;,, ,, ,,,,,,,, ;,,,,, ,,,, ,, ,,;, ,,,,,,,,,,,(,,, ,,,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,, ;,,,, ,,,,,,,;,,,,, ,,,,,,, ,;,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,;,,,,,; ,,,,,,,,,,,,( ,,, ;,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,;, ,, ,,,,(,, ,,, ,,,, ,, ,, ,,,,,;,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,, ,,,,;,,,, ,,, ,,，,, ,,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,?,,,,,,,,,,,, ,,;,,,,,,, ,, ,,,(,,, ,,,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,, ;,,,,,,,,,,,;,,,,, ,,,,;, ,,, ;,,,,,,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,, ,,, ,, ,, ,,,,, ,,,,,(,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,(,,, ;,,,, ,,,, ,,,,;,, ,,, ;,,,,,,, ,, ,,,, ,, ,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,;,, ,,,,,,,,, ,,,,(,,,,,,,,,,,,,,,, ,,;,,,,,,, ,, ,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,,;, ,,, ;,,,,,,, ,,,,,,(,, ,,, ,，,,,(,,, ,,,,,:,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,;,,;,,,, , ;,,,,,, ,,;,,, ,,,,,,,(,， ,,,,,,,,?，,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,:, ， ,, , ,,,,(,,,,,,,,,, ,,,,,,;,,,,,)(,,,,,, ,;,,,;, ,,,,,,,,,,,,,;,,,，，,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,时，,,,,,, ,,,,,,，,,,,,) 内蒙古农业大学硕士学位论文 ,, 引言 近年来，由于国内外对羊肉、羊毛及羊绒需求量的不断增加，养羊业正发展成为一个黄金产业。据有关部门统计,，，,,,,年底羊存栏,(,,亿只，比,,,,年增长,(,,，,,,,年全国羊存栏量达,(,,亿只，比,,,,年增长,(,,,。作为全国五大牧区之一的内蒙古自治区，发展畜牧业有着得天独厚的优势。,,,,年全区牲畜存栏,,,,(,,万只(头)，同比增长,,,，其中羊存栏量达,,,,(,,万只。全年牲畜出栏,,,,，,,万只(头)，同比增长,,(,,，羊出售和屠宰量达,,,,(,,万只。 随着养羊业的不断发展，人们也逐渐把屠宰后的羊进行充分利用，包括羊肉、羊皮、羊毛和羊内脏等。鉴于历代医药论著及现代药典中都记载了动物胆汁的药用价值，而羊胆汁又一直未得到充分地利用，为此我们开展了本项研究。,(,动物胆汁的研究概况 在祖国的传统医药中使用动物胆汁防治疾病已有悠久的历史。从汉《神农本草经》记述鲤鱼胆开始，到明代李时珍《本草纲目》止，共收载各种动物胆有,,种之多，遍布了脊椎动物的各个纲，有鱼纲、两栖纲、爬行纲、鸟纲和哺乳纲。胆汁的医药价值早在《司牧安骥集》、《本草纲目》、《元亨疗马集》等古籍，以及近代的《中药大辞典》、《民间兽医本草》、《中兽医药物学》、《兽医中草药大全》等医药论著中都有记载。动物胆汁性味苦寒或苦甘，具有良好的清热解毒、息风止痉、明目等功效。牛、羊、鸡、猪胆汁均有明显的镇咳、祛痰、平喘、抗炎、抗菌等作用。国内外以胆汁为原料的药品(不包括牛黄配置的制剂)(已达,,余种。其中不少是被提取的活性成分，如熊胆中的主要成分熊去氧胆酸(;,,,,,,,,,;,,,,; ,;,,)可治疗以胆固醇为主的胆结石症;国外一些国家的商品有英国的,,,,,,,，意大利的,,,;,,，日本的,,,,,,,’荷兰的,,,,;,,,。,一猪去氧胆酸(?一,,,,,,,,,,,,,,,;,,)可降低血液胆固醇和甘油三酯，治疗高血压及血管粥样硬化 症，适用于，或 ，,型高脂血症。鹅去氧胆酸(;,,,,,,,,,;,,,,; ,;,,)，主要存在于鸡胆汁中，熊脱氧胆酸和鹅脱氧胆酸互为立体异构体，能溶解胆固醇结石，但是对于胆石中含石灰量过多的病人，以及色素结石病人无效。目前，、因疗效不如熊去氧胆酸，故逐渐被熊去氧胆酸所代替，也用于老年慢性支气管炎的治疗。胆酸(,,,,,; ,;,,，,,)制成胆酸钠片，用于气管炎和胆囊炎等炎症的治疗以及用来配置人工牛黄等。近年来，猪、牛、羊胆汁作为常用中药，在临床上应用较为普遍，在医药杂志上也屡见报道一”。 ,(,胆汁酸的研究概况 胆汁酸是胆汁的重要成分，是动物体内胆固醇代谢过程中所产生的一系列固醇类物质，因为主要经由胆囊和胆汁一起排泄到肠道中，并具有酸性，因此统称为胆 , 甘氨胆酸的抗炎作用及其作用机理的研究汁酸。胆汁酸的化学研究历史较长。,,,,,,,于,,,,年已开始对牛胆汁酸进行过研究，到了,,,,年,,,,;,,,;,发现了胆酸，,,,,年确定了胆固醇结构，同时确定了胆酸、石胆酸(,,,,,;,,,,; ,;,,)、去氧胆酸(,,,,,;,,,,; ,;,,)及对鹅去氧胆酸等的结构。这为后人对胆汁酸的进一步研究奠定了坚实的基础。近年来随着医学和生物化学的发展，研究者们对胆汁酸提取合成、药理作用、酶促转化的代谢途径及血中浓度与疾病关系等均进行了较深入的研究。,(,(,胆汁酸的代谢 胆汁酸的代谢主要包括胆汁酸合成、胆汁酸的跨膜转运和肠肝循环。人体内的胆汁酸按其生成部位及结构不同分为初级、次级和三级胆汁酸。初级胆汁酸由肝内胆固醇转化而来，通过一系列反应，改变胆固醇的核心和侧链，最终生成胆酸 (;,,,,; ,;,,，;,)和鹅脱氧胆酸(;,,,,,,,,;,,,,;,;,,，,,,,)。初级胆汁酸在肠道中受细菌作用，进行,一,脱羟作用生成的胆汁酸，称为次级胆汁酸(,,;,,,,,,,,,, ,;,,)，包括石胆酸(,,,,,;,,,,, ,;,,，,,)和脱氧胆酸(,,,,,;,,,,; ,;,,，,,,)， ,,,的次级胆汁酸被重吸收经腔静脉返回肝脏，形成胆汁酸的肠肝循环。肠肝循环是胆汁酸代谢的重要环节。肝细胞分泌的胆汁酸随胆汁进入肠道后，经历复杂的细菌转换，大部分被重吸收入肝脏，并再次参与体内代谢。重吸收的胆汁酸被肝细胞窦状隙膜摄取，经肝细胞内转运，最后由肝细胞小管膜分泌入肝胆汁。三级胆汁酸则是重吸收次级胆汁酸在肝脏的代谢产物。,(,(,胆汁酸的结构 胆汁酸是一类胆甾烷的衍生物，其甾体部分是由,个六元环和,个五元环并接而成，在环上的,,位和,,位各有一个甲基，,,位则连接着一个含,个碳原子的侧链，侧链的末端为一羧基，在环的,，,，,,位可连有羟基,，分子上羟基的数目和位置随胆汁酸种类的不同而不同。 胆汁酸分子内既含有亲水性的羟基及羧基或磺酸基，又含有疏水性烃核和甲基。亲水基团均为。型，而甲基为,型，两类不同性质的基团恰位于环戊烷多氢菲核的两侧，使胆汁酸构型上具有亲水和疏水的两个侧面(肝细胞分泌的胆汁具有双重功能)。由于胆汁酸的结构不同导致胆汁酸在生理特性方面现出明显的差异,。例如，, ,，, ,一二羟基胆汁酸作为药物使用虽对溶石有一定作用，但会对肝脏造成损伤，而其异构体, ,，, ,,二羟基胆汁酸不仅有溶石作用而且对肝脏损伤有治疗作用,。,(,(,胆汁酸的生理功畿,,,(,(,(,消化脂肪 内蒙古农业大学硕士学位论文 , 胆汁酸能促进不溶于水的食物脂肪乳化成微滴，便于胰脂肪酶对脂肪的水解。还能和脂肪的分解产物如甘油一酯、游离脂酸、胆固醇等形成混合微团。 在混合微团中，胆汁酸分子排列在微团的最外层，由于它的分子结构有两性，一端为烷基，具有亲油性，可以和油脂类结合;另一端为羟基和羧基，具有亲水性。正是这些亲水基团，使胆汁酸能携带混合微团中一些脂类物质通过覆盖在小肠微绒毛表面的非流动性水层，从而协助这些脂类物质透过微绒毛的脂膜而进入肠黏膜细胞，胆汁酸则留在肠黏膜细胞外，又与脂肪消化产物等形成混合微团。,(,(,(,调节胆固醇代谢 胆固醇是构成生物膜的重要成分之一，由于它极不易溶于水，因而很不易排出体外。胆汁酸对调节胆固醇的代谢起着重要的作用。?从胆固醇生成胆汁酸是机体从体内清除胆固醇的重要途径。可以把胆汁酸看成是胆固醇经肝脏处理的水溶性代谢物。体内约有,,,的胆固醇是以胆汁酸形式排泄的。?胆汁酸分泌入胆汁时，伴随分泌两种其它胆道脂质，卵磷脂和胆固醇，它们形成混合微团，才使胆固醇随胆汁排出体外。以这种方式排出的胆固醇约占,,,。?胆汁酸被认为是一调节胆固醇合成的因素，至于是直接作用于羟甲基戊二酰辅酶,(,,,—,,,)还原酶，还是通过影响小肠胆固醇的吸收而起作用现在尚未明确定论。,(,(,(,杀菌 胆汁酸还是一种有效的杀菌剂。在动物的大肠中，胆汁酸能够抑制大肠杆菌、链球菌及其它有害细菌的增殖。胆汁酸还能防止食物在胃部腐烂与发酵。因此，胆汁酸能够预防气胀与腹肿胀等疾病。,(,(,(,提高免疫力 胆汁酸具有提高动物免疫力，减少动物体内细菌内毒素吸收量的功能。抗生素杀灭细菌后产生大量的内毒素严重影响动物体的健康，容易引起急性肝脏营养缺乏症，并且不容易防治。而胆汁酸的缺乏会加速小肠吸收内毒素和产生严重韵胃部阻塞物。如果动物摄入适量的去氧胆汁酸，就能有效分解内毒素，维护动物体的健康。,(,(,(,营养作用 饲料中添加适量胆汁酸，可显著提高断奶仔猪体重和采食量，对鸡脂肪表观消化率有所提高，另外，饲料中添加胆汁酸对水产动物的生长也有促进作用。,(,甘氨胆酸的研究概况 胆汁酸与甘氨酸或牛磺酸结合而成称为结合型胆汁酸，其中甘氨胆酸和牛磺胆 , 甘氨胆酸的抗炎作用及其作用机理的研究酸占到,,,一,,,,胆汁酸具有多种生理功能和药理效应。如镇咳、祛痰、平喘、抗炎、抑菌等作用，但以往报道的胆汁酸药理作用大多是以游离胆汁酸为研究对象，结合胆汁酸的药理作用则研究甚少，甘氨胆酸的药理作用至今尚未见报道。,(,(,甘氨胆酸的物理性质 甘氨胆酸为白色晶体，不溶于水，易溶于有机溶剂。化学名称为卜〔(,，,，,，,,)一,，,，,,一,,,,,,,,,,一,,一,,,;,,,,,一,,一,,〕,,,;,,,，分子式为;冰,州,,，分子量为,,,(,,。甘氨胆酸的立体结构见图,，化学结构见图,。 , 图,甘氨胆酸的立体结构 ,缸,,,,, 图,甘氨胆酸的化学结构 内蒙古农业大学硕士学位论文 ,,(,(,甘氨胆酸的研究进展 甘氨胆酸可作为药物赋形剂和吸收促进剂。甘氨胆酸钠在人体中所分泌的胆酸及其盐类，实际上是与甘氨酸和牛磺酸生成肽键的形式而分泌的，具有较强的表面活性，是良好的乳化剂。分子中的羟基仅在环戊烷多氢菲的一面呈伸出状，胆酸中有,,,,个羟基形成胶束，在盐类存在时还稍多一些“”。表面活性剂可促进药物通过呼吸道黏膜(由于呼吸道黏膜表面积大，黏膜层薄，密集静脉网络，药物易吸收，故可使胃肠道吸收不良的药物考虑用呼吸道给药途径，以获得全身性治疗效果)进行吸收，其吸收促进的机理尚有争议，,,,,,,等…,认为胆酸盐可使呼吸道黏膜上皮细胞受损伤，故透过屏障遭到破坏导致吸收增加;亦有认为促进剂与粘蛋白作用，使黏膜的通透性增高， 表面粘着性降低，从而使药物吸收增加,，。 有报道甘氨胆酸盐能显著抑制鼻腔黏膜内蛋白水解酶的活性，降低了胰岛素在黏膜内的降解速度“。，可能对整个呼吸道的蛋白水解酶的活性都有一定程度的抑制作用。,有资料表明，口服甘氨胆酸是诊断小肠污染综合征和末端回肠病变及其该两病鉴别诊断的最有价值与最敏感的实验;但关于甘氨胆酸的药理作用方面的研究还未见报道。为此，本实验应用药理实验方法，研究了甘氨胆酸对炎症的作用。,(,抗炎药物的研究进展 凡能消除炎症的药物为抗炎类药物。抗炎类药物从总体上分为两大类，即甾体类、非甾体类抗炎药。随着对炎症反应机制的深入研究，除了经典的甾体类、非甾体类外，人们还开发了不同类型的多种抗炎药物，如细胞因子、抗细胞因子单克隆抗体、抗粘附分子单克隆抗体等多种新型抗炎药物。,(,(,甾体类抗炎药物 经典的抗炎药物以糖皮质激素为代表的甾体类抗炎药(,,,,,,,,,,,,,—,,,,,,,,,,,, ,,,,,，,,，,,)的抗炎作用机制是抑制磷脂酶,,的活性，减少花生四烯酸的释放，最终抑制前列腺素类物质(,,,,,,,,,,,,,, ,,,)、白三烯类 (,,,,,,,,,,,,，,,,)和血栓素的合成。另,机制是通过与胞浆内皮质激素受体结合而抑制环氧酶一,(;,;,,,,,,,,,,,，,,,)和诱导型一氧化氮合酶(,,,,;,,,,,,,,,;,,,,, ,,,,,,,,，,,,,)的转录和表达，从而抑制,,,和,,等的生成。最新研究表明糖皮质激素能抑制核因子一, ,(,,;,,,, ,,;,,,—, ,，,,,, ,)的活化，从而抑制致炎介质的转录与表达，但糖皮质激素对,,—, ,激动抑制的确切机制尚有无法解释与矛盾之处。近期还有报道认为糖皮质激素的抗炎作用至少部分与其诱导单核细胞调亡有关,”。一些药物虽然不是,,，,,，但通过兴奋下丘脑一腺垂体一肾上腺皮质轴，增强肾上腺皮质功能，导致糖皮质激素分泌增加而具有抗炎作用,，。, 甘氯胆酸的抗炎作用及其作用机理的研究,(,(,非甾体类抗炎药物 非甾体类抗炎药(,,,,,,,,,,,, ,,,,—,,,,,,,,,,,, ,,,,,，,,,，,,)与甾体类一样，具有抗炎、抗风湿作用，但又与甾体类化学结构不同。,,,,,发挥活性的主要机制是通过抑制,,,进而抑制,,,的合成，,,,为二十烷类脂类物质，具有广泛的生物活性。,,,由花生四烯酸转化而来，是构成细胞膜磷脂的一种成分。在炎症刺激如化学的、物理的或其他炎症介质作用下，细胞的磷脂酶(磷脂酶,,、磷脂酶;)被激活，在,矿的参与下，将细胞膜磷脂的酯键水解，释放出花生四烯酸。花生四烯酸有两条代谢途径，即环氧酶(;,;,,,,,,,,,,,，,,,)途径和脂氧酶 (, ,,,,,,,,,,,，,,,)途径。,(,(,(,选择性,,,一,抑制剂 ,,,有,种同功酶，即组成型,,,,,和诱导型,,,,,““”,。声生理情况下，大多数组织和细胞如胃粘膜、肾脏和血小板，,,,,，活性占主导，,,,—,与细胞内环境稳定和生理刺激引起前列腺素合成有关，前列腺素的合成对于调整细胞的体内平衡有重要作用，如肾脏的血流量。前列腺素还有保护作用，如生成胃粘膜，因而,,,—,发挥“看家酶”作用:而,,,一,在正常组织中极少表达。但受炎症刺激后，其基因表达可急剧升高参与炎症反应。 临床研究证实，过去几十年开发出来的,,多种作用于,,,的,,,，,,对,,,—,的抑制活性大于对,,,一,的抑制活性，这些药物在临床上治疗效果甚佳，但是由于它们对,,卜,的强抑制作用使胃肠道保护性, ,的合成受到抑制，从而导致严重的胃肠副作用。基于此点，研究者根据,,,一,的结构特点合成了一系列,,,一,特异性抑制剂，阻断炎症部位前列腺素的合成，而不影响胃肠正常组织中“有益”的前列腺素，各制药公司也把开发选择性,,,,,抑制剂作为研究重点。如,,,,,,;,,。”、,,,,,,,,,,,”,、,,,,,,,;【…、,,,,,…、,,,,,,,”,、,,,,;,,,,…、,,,,,,,…等已在欧洲及北美上市用于治疗骨关节炎及类风湿性关节炎““。 虽说,,,一,抑制剂是目前抗炎药研究的热点领域，但值得一提的是,,,一,在大脑、精囊及肾脏中存在结构型表达乜一，，抑制这些组织中的,,,一,所产生的作用也不容忽视。此外，人们采用基因敲除小鼠的炎症模型中发现，,,,一,基因(即,,,一,一,一)并不改变炎症的反应性，具有同野生型小鼠(即,,,一,，,，)同程度的炎症反应，而,,,一,基因敲除(即,,,—,一,一)小鼠对花生四烯酸诱导的炎症反应性减弱,。在炎性肉芽肿模型中,,,,,,等人发现对,,,一,具有抑制作用的阿司匹林可以抑制肉芽肿的形成，而,,,一,抑制剂如,,一,,,则不能，他们认为,,,一,在调节慢性炎症组织修复过程中起作用，而,,,一,则诱导急性炎症发作。“…。,(,(,(,选择性,,,,,,,,,,的双重抑制剂 内蒙古农业大学硕士学位论文 , 花生四烯酸通过,,,及,,,两条途径进行分解代谢，两条途径之间存在着一定的平衡制约关系…。即当,,,的活性受到抑制时，,,,,,的活性增强，势必使大量,,沿,,,途径进行代谢。,,,的代谢产物如,,,,、,,,,,等对炎症反应具有促进作用。同样，当,,,,,的活性受到抑制时，则有更多的从进入,,,代谢途径使,,,生成增加，结果都是促进炎症的进一步发展。因此较理想的药物是对,,,、,,,两条代谢途径有双重抑制作用。目前发现的替尼达普为,,,与,,,双重抑制剂,;以及由,, ,,,等人合成的,一苯胺基苯乙酸系列对,,,,,、,,,及,,,皆有良好的抑制作用，具有抗炎、抗过敏及保护细胞免受,,,,,激活造成组织细胞损伤等作用…。,，,(,(, ,,供体的非甾体类抗炎药 ,,,，,,的主要作用机制是通过抑制,,,来抑制炎症部位,,,的生物合成，从而达到治疗目的。但由于,,,在胃肠道保护方面起到了至关重要的作用，所以长期大量服用该类药可导致消化道溃疡、出血甚至穿孔等严重副作用。近年来药理学研究表明，,,能阻断经典,,,，,,产生的副作用，即,,在胃肠道中能起到与,,相同的作用，基于,,和,,,在胃肠道的功能具有类似性和互补性，在胃肠道适量地补充,,可以减少,,,，,,引起的副作用，这样,,供体的非甾体类抗炎药应运而生了。 ,,,,,,，,,药物分子的制各一般是将一些疗效确切的传统,,,，,,和,,供体通过一些连接集团相连而成。常用的,,,，,,是一些含羧基或烯醇羟基的药物，如将阿司匹林转变为带硝基酯取代的苯酯一,,,一,,,,…,，此外双氯芬酸，布洛芬，萘普生，吡罗昔康等已经应用于该类药物的,,供体，包括硝酸酯(肛,,,,)，亚硝酸酯(,,,,,)，硫代亚硝酸酯(,—,,,)等，其中最常用的硝酸酯:连接基团为脂肪烃基或酰胺键将传统的,,,，,,和,,供体连接起来。,,,,,等,合成了一系列,,,,,,，,,，包括,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,，,,—，,,,,,,,,和,,—,,,,,,,;等，并就抗炎活性和致溃疡作用和各自的原药 进行了对照，结果表明，,,(,,,，,,的抗炎活性均高于相应的传统的,,,，,,，而致溃疡作用则大大降低。,(,(,从细胞因子及抗体中开发的抗炎药 在炎症过程中细胞因子也起着重要作用，它们能决定炎症的性质及持续时间。在机体内，细胞因子具有广泛的生物活性，它们通过自分泌及旁分泌，并以网络的形式对机体的各个系统进行调节。与炎症反应有关的细胞因子有白细胞介素一, (,,,,,,,,,,,—, ，,,,)、，,一,、，,一,、，,一,、，,一,、，,一,、，,一,、肿瘤坏死因子(,,,,,,,;,,,,, ,,;,,, ,,,)、,一干扰素(,—，,,)及粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子 (,,,,,,,;,,,—,,;,,,,,,, ;,,,,,—,,,,,,,,,,, ,,;,,, ,,,,,,)等。,,,、，,一,可刺激内皮细胞、粒细胞及单核细胞释放血小板活化因子(,,,,,,,, ,;,,,,,,,,,,;,,, ,,,)。,,,是目前已知的最强的血小板聚集促进剂，中性粒细胞趋化剂。,,, , 甘氨胆酸的抗炎作用及其作用机理的研究还正反馈促进,,,、，,,,的释放。 鉴于细胞因子在炎症和免疫反应中的重要作用，因此，从细胞因子及其拮抗剂 中发展抗炎药已成为国内外研究的焦点。该类药物包括细胞因子、抗细胞因子单克隆抗体、可溶性细胞因子受体等等,。 抗细胞因子单克隆抗体(抗,,,单抗)是目前应用最广泛的一类抗体，其作用机制主要是与,,,的特异性结合，阻断,,,生物学活性的发挥。目前已有,—,,和,,,,,两种抗,,,单抗试用于炎症免疫性疾病的临床治疗。可溶性,,,受体(,,,,,)包括,,,,,,,,,和,,,,,—,,,两种类型，是一种分子量为,,,,,的糖蛋白，其生物学特性是拮抗、抑制,,,的生物学作用。可溶性，,一,受体可抑制，,,诱导的过敏反应，在治疗,,及哮喘等疾病方面具有应用价值。，,—,受体拮抗物(，,—，,,)能对抗佐剂关节炎的炎症反应，在美国已进入?期临床试验阶段,。,(,(,从抗粘附途径开发抗炎药物 由于中性粒细胞与内皮细胞的粘附在炎症反应中所起的重要作用已经被众多的体内、体外研究所证实。抑制粘附分子的表达，抑制其与白细胞的粘附成为防治各,种与炎症有关疾病的重要环节。目前研究发现抗粘附分子单克隆抗体，如抗，,,,,,“单抗，在肝、肾移植和风湿性关节炎的抗炎治疗中具有很大潜力;,,,,,整合素受体的阻滞剂在风湿性关节炎、哮喘和过敏反应中具有显著的疗效,。此外，从细胞膜上提取的可溶性粘附分子，人工合成的与粘附分子结合位点具有高亲和力的肽链 以及应用基因敲除技术敲掉粘附分子基因等均可预防急慢性炎症引起的组织损伤;辅，。因此研究开发该类药物对临床应用具有非常重要的意义。,(,(,中药抗炎 作为我国的瑰宝中药不同于甾体类和非甾体类抗炎药，它除了治疗无菌性炎症外，还治疗感染性疾病，兼具抗炎、免疫、清热解毒和活血化瘀等药理作用，可以改变血液循环和血管功能，有利于多种疾病的恢复。中药可针对机体本身，对炎症 的各个环节均有一定的作阳，所以中药的抗炎机制比较复杂。 除了上述几方面抗炎药物外，还可从神经内分泌激素中开发抗炎药物，如,一 黑色细胞刺激素、褪黑激素:还可从对细胞凋亡调控角度筛选抗炎药物;还可从对,,,,,影响环节发现抗炎药物，总之，随着抗炎免疫药理学的不断深入，炎症反应细胞分子机制研究的不断深入，抗炎药物的研制也将取得巨大成功。 ,(,本课题研究的目的和意义 随着养羊业的不断发展，为了更好地利用动物胆汁这一丰富的资源，本课题开 展了从羊胆汁中提 取甘氨胆酸的研究。为了充分了解甘氨胆酸的药理作用，本课题 内蒙古农业大学硕 士学位论文 ,又开展了对甘氨胆酸抗炎作用及其作用机理的研究，以便为其进一步 开发利用和在，临床上的合理应用提供理论依据。 通过开展对羊胆汁.