免疫球蛋白E作业指导书

免疫球蛋白E作业指导书 文件编号:LAB,OP,MY020 Elecsys E 170/e 601/e 411 XXXXXX 医院 1第 页，共 页 5 检验科免疫室 版本:A/0 免疫球蛋白E 分析项目作业指导书 生效日期:2008-02-01 1. 分析原理 采用双抗体夹心法，整个过程18分钟完成。? 1) 第1步:10μl标本、生物素化的抗IgE单克隆抗体和钌(Ru)标记的抗IgE单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。 2) 第2步:加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 3) 第3步:反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压 后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。 4) 检测结果由机器自动从曲线上查出。此曲线由仪器通过2点校准校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原 版标准曲线而得。 2. 标本要求 血清:按标准常规方法采集。 血浆:肝素锂、钠，EDTA-K3或枸橼酸钠抗凝。用枸橼酸钠抗凝的血浆，测定结果需+10%。用氟化钠/草酸钾抗凝血浆，结果比血清低18%。 标本在2,8度可稳定7天，-20度可稳定6个月。可冻融5次。含沉淀的标本使用前需离心。不要使用加热灭活的标本。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。标本、校准液和质控品在测定前的温度应与室温平衡;放入仪器后应在2小时内测定以避免蒸发的影响。 3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料 采用罗氏原装配套试剂。 试剂: M:链霉亲和素包被的微粒(透明瓶盖)，1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml，生物素结合能力 470ng生物素/ml 粒子。含防腐剂。 R1:生物素标记的抗IgE单克隆抗体(灰盖)，1瓶，10ml。浓度2.4mg/l，磷酸缓冲液0.085mol/l，pH6.5。含 防腐剂。 R2:Ru(bpy)3 2+标记的抗IgE单克隆抗体(黑盖)，1瓶，10ml。浓度4.8mg/l，磷酸缓冲液0.085mol/l，pH6.5。含防腐剂。 校准品:ElecsysIgE校准液(CalSet)货号11930427 文件编号:LAB,OP,MY020 Elecsys E 170/e 601/e 411 XXXXXX 医院 2第 页，共 页 5 检验科免疫室 版本:A/0 免疫球蛋白E 分析项目作业指导书 生效日期:2008-02-01 质控品:Elecsys 通用质控品(PreciControl Universal)货号11731416 其他所需材料: 常规实验设备 Elecsys E 170/E 411 Elecsys 系统清洗液(SysClean),货号11298500 Elecsys E 170分析仪所需材料: Elecsys 系统缓冲液 (ProCell M),货号12135019 Elecsys 检测池洗液(CleanCell M),货号12135027 Elecsys PC/CC杯,货号03023141 Elecsys 清洗液(ProbeWash M)，货号03005712 Elecsys 反应杯/加针头/废物袋(CUP/TIP)，货号12102137 Elecsys 系统清洗适配器(SysClean Adapter M)，货号03027651 Elecsys E 411分析仪所需材料: Elecsys 系统缓冲液(ProCell)，货号11662988 Elecsys 测量池清洗液(CleanCell)，货号11662970 Elecsys 系统清洗液(SysWash)，货号11930346 Elecsys 适配器 (Adapter for SysClean)，货号11933159, Elecsys 反应杯(CUP)，货号11706829 Elecsys 加样头(TIP)，货号11706802 4. 仪器和校准 使用仪器:罗氏公司生产Elecsys 2010/E 170/e601/e 411全自动电化学发光免疫自动分析仪 仪器校准:每批试剂必须用新鲜试剂和校准一次。另外，以下情况需要再次校准: 校准过期:批校准稳定28天，盒校准7天。 根据要求进行标定:如质控结果超出范围时;更换某些试剂时，根据规定进行多次标定。 5. 操作步骤 参见仪器标准操作规程。 6. 质量控制 文件编号:LAB,OP,MY020 Elecsys E 170/e 601/e 411 XXXXXX 医院 3第 页，共 页 5 检验科免疫室 版本:A/0 免疫球蛋白E 分析项目作业指导书 生效日期:2008-02-01 用质控品1和质控品2，至少每24小时或每一次校准后测定一次。质控间隔期应适用于各的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正。 7. 计算方法 对每一个标本，仪器会自动计算结果，单位是IU/ml或ng/ml。 换算方法是ng/ml×0.42=IU/ml或IU /ml×2.40=ng/ml 8. 参考范围 9. 分析性能 检测范围:0.100-2500IU /ml或0.240-6000 ng/ml 精密度:根据NCCLS(全国临床实验室化操作委员会)制订的改良试验计划(EP5-A)，应用Elecsys试剂盒、人血液标本和质控液验证ElecsysTOTAL P1NP试剂盒检测重复性。每日测6 次共10 日(n,60);在E170 分析仪上的组间精密度(n,21)，得结果如下: 文件编号:LAB,OP,MY020 Elecsys E 170/e 601/e 411 XXXXXX 医院 4第 页，共 页 5 检验科免疫室 版本:A/0 免疫球蛋白E 分析项目作业指导书 生效日期:2008-02-01 10. 干扰因素 该方法不受黄疸(胆红素<37mg/dl)、溶血(血红蛋白<1.1g/dl)、脂血(脂质<2200mg/dl)和生物素<100ng/ml 干扰。溶血会产生干扰。接受高剂量生物素(>5mg/天)治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。 不受类风湿因子干扰(6000U/ml)。36种常用药物经试验对本测定无干扰作用。IgE浓度高到50000IU /ml也不出现钩 状效应。接受过小鼠单抗治疗或体内诊断的病人可能会出现假阳性反应。偶尔会遇到抗钌抗体的干扰。IgE测定结果 应结合病人的病史、临床症状和其他检查结果进行诊断。 11. 临床意义 免疫球蛋白E(IgE)在抗寄生虫感染和变态反应(I型变态反应)中起重要作用。I型变态反应的特征在肌体接触 变应原后即刻产生过敏反应。变应原与致敏肥大细胞或嗜硷细胞结合后可与细胞膜上的IgE交叉结合。进而导致细胞 脱颗粒，释放活性因子(如组胺)，产生典型的I型变态反应症状。正常情况下血清IgE的含量很低(低于血清免疫球 蛋白总量量的0.001%)。IgE浓度与年龄有关，新生儿含量最低，以后逐渐增高，5-7岁达到稳定水平。但特定年龄段 的人群，IgE含量变化还是较大。婴幼儿近期的呼吸道感染，检测IgE有诊断参考价值。因为IgE在变态反应中有重要 意义，其含量升高还可见于枯草热、过敏性支气管炎和皮炎。IgE含量正常不能排除过敏性疾病。因此，在临床鉴别 诊断过敏性和非过敏性疾病时，定量测定人血清或血浆中定量测定人血清或血浆中IgE的含量只有与其它临床检查联 合应用才有实际意义。非变态反应性疾病血清IgE含量也可升高，见于支气管肺曲霉病、威-奥综合征、高IgE综合征、 IgE骨髓瘤和寄生虫感染。 13(参考文献 1) Homburger HA. 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Immunoglobulin E in immunologic deficiency diseases. II. Serum IgE Concentration of Patients with Acquired Hypogammaglobulinemia, 8) Thymoma and Hypogammaglobulinemia, Myotonic Dystrophy,Intestinal Lymphangiectasia and Wiskott-Aldrich Syndrome.J Immunol 1972;109(2):304-310. 9) Geha R, Reinherz E, Leung D, McKee KT, Schlossman S, Rosen FS.Deficiency of Suppressor T Cells in the Hyperimmunoglobulin E Syndrome. J Clin Invest 1981;68:783-791. 10) Kojima S, Yokogava M, Tada T. Raised Levels of Serum IgE in Human Helminthiases. Am J Trop Med Hyg 1972;21(6):913-917. 11) Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes;Preanalytical Variables. Brochure in: Samples: From the Patient to the Laboratory. GIT-Verlag, Darmstadt 1996:16-17. ISBN 3-928865-22-6. 12) Kjellman NIM, Johansson SGO, Roth A. Serum IgE levels in healthy children quantified by a sandwich technique (PRIST). Clin All 1976;6:51-59. 13) Ringel KP, Dati F, Buchholz E. 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