正交法优选盐炙骨碎补的最佳炮制工艺

正交法优选盐炙骨碎补的最佳炮制工艺 【摘要】  目的研究骨碎补盐炙最佳工艺。方法以柚皮苷的含量为指标选择盐用量、浸泡时间、砂烫温度3个因素～用L9(34)正交设计～采用方差分析法～对骨碎补进行盐炙工艺优选。结果浸泡时间对骨碎补中柚皮苷含量影响显著～最佳炮制工艺为:每20 g药材用30 ml盐水,含4 g盐,～浸泡8 h～在190?下砂烫4 min。结论优选了盐炙骨碎补的最佳炮制工艺。 【关键词】  骨碎补 盐炙 正交实验 柚皮苷     骨碎补为水龙骨科植物槲蕨Drynaria fortunei,Kunze,J.Sm .的干燥根茎～具有补肾强骨、续筋止痛等功效～常用于治疗肾虚腰痛～耳聋耳鸣～牙齿松动～跌打闪挫～筋骨折伤,外治斑秃～白癜风,1,。骨碎补的炮制最早载于南北朝刘宋时期雷敩的《雷公炮炙论》:“骨碎补～凡使～采得后～先用铜刀刮去黄赤毛尽～便细切～用蜜拌令润～架柳甑蒸一日后～暴干用”。现代药典收载的炮制方法为砂烫法～有研究表明～经砂烫后～可以使骨碎补中的活性成分柚皮苷,2,溶出率提高。河砂只是作为一种传热体～而用其他辅料炮制的作用如何,很少有人研 究。宋代《圣济总录》记载“盐炒令黄”～元代《瑞竹堂经验方》曰:“去毛～盐炒”。现代在其它地方炮制上也有盐炙的方法如《四川省中药饮片炮制规范》收载了盐炙骨碎补。古人认为骨碎补盐炙走肾～益增补肾之功力,3,～但现代对盐炙法研究甚少～因此为了探讨骨碎补盐炙后的炮制作用和化学成分变化～本文对其炮制工艺进行了优化～为进一步研究骨碎补的炮制作用提供了科学依据。 1  仪器与试药 1.1  仪器烘箱,WS70B 型,、水浴锅、LC 10ATvp高效液相色谱仪,日本岛津公司,、高速万能粉碎机,Fw 80型 ,、温度计。 1.2  试药甲醇为色谱醇～其余均为分析醇。柚皮苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号722 200107)～骨碎补购于亳州药材市场～按2005版《中国药典》鉴定为水龙骨科植物槲蕨Drynaria fortunei,Kunze,J.Sm .的干燥根茎。 2  方法与结果 2.1  不同盐炙工艺与传统砂烫工艺的比较 2.1.1  骨碎补的炮制砂烫品:将一定量砂置锅中～加热至180?～投入骨碎补生品20 g～砂烫至鼓起～迅速出锅～筛去砂～放凉～粉碎～过20目筛～备用。     先润后烫品:取骨碎补生品20 g～加盐水,盐4 g～用30 ml水溶解,～拌匀闷润8 h～砂烫至鼓起～迅速出锅～筛去砂～放凉～粉碎～过20目筛～备用。     先烫后润品:取骨碎补生品20 g～180?砂烫至鼓起～将砂烫品加盐水,盐4 g～用30 ml水溶解,～拌匀闷润8 h～烘干～放凉～粉碎～过20目筛～备用。 2.1.2  柚皮苷含量测定对照品溶液的制备:取在110?干燥至恒重的柚皮苷对照品3.22 mg～置50 ml量瓶中～加甲醇稀释至刻度～摇匀,即得每毫升含柚皮苷0.064 4 mg的对照品溶液。供试品溶液的制备:分别称取各炮制品粗粉约0.25 g～精密称定～加甲醇30 ml～至水浴锅上加热回流3 h～放冷～滤过～滤液至50 ml量瓶中～用少量甲醇分数次洗涤容器～加甲醇至刻度～摇匀～即得～备用。     色谱条件 色谱柱:shim-pack VP ODS,4.6 mm ×150 mm,,流动相:甲醇 醋酸 水,35?4?65,,检测波长:283 nm ,柱温为室温,流速为1 ml/min。结果见表1。表1  盐制品与砂烫品柚皮苷含量比较,略,     由表1可见～先润后烫品柚皮苷含量最高～因此确定先用盐水闷润再砂烫至鼓起的炮制方法～并对其具体工艺参数进行优选。 2.2  单因素实验考察 2.2.1  溶液用量的考察取生品骨碎补6份～各20 g～放入密闭容器内～分别加入已配好的盐溶液15～20～25～30～35～40 ml～浸泡12 h～结果见表2。表2   溶液用量考察结果,略,     由上表确定盐溶液的用量为每20 g药材用30 ml盐溶液浸泡。 2.2.2  盐用量的考察取生品骨碎补5份～各20 g～放入密闭容器内～分别用不同盐用量配溶液30 ml～浸泡 12 h后～进行砂烫～将温度固定为200?～时间固定为4 min～砂用量固定为药材的30倍。 考察不同盐用量对评价指标的影响～见表3。表3  盐用量考察结果,略,     结果表明不同盐用量下～柚皮苷的含量有所不同～说明盐用量是影响柚皮苷含量的因素。 2.2.3  浸泡时间的考察取生品骨碎补7份～各20 g～放入密闭容器内～分别加入已配好的含盐4 g的盐溶液30 ml～浸泡不同时间后～进行砂烫～将温度固定为200?～时间固定为4 min～砂用量固定为药材的30倍。考察不同浸泡时间对评价指标的影响。见表4。表4  浸泡时间考察结果,略,     结果表明不同浸泡时间下～柚皮苷的含量有所不同。说明浸泡时间是影响柚皮苷含量的因素。 2.2.4  砂烫温度的考察取生品骨碎补6份～各20 g～放入密闭容器内～分别加入已配好的含盐4 g的盐溶液30 ml～浸泡8 h后～进行砂烫～时间固定为4 min～砂用量固定为药材的30倍。考察不同盐浸后砂烫温度对评价指标的影响。结果见表5。表5  砂烫温度考察结果,略,     结果表明不同砂烫温度下～柚皮苷的含量有所不同,说明砂烫温度是影响柚皮苷含量的因素。 2.3  正交实验 从单因素实验可见不同盐用量、浸泡时间、砂烫温度对评价指标有较大影响～故以盐用量、浸泡时间、砂烫温度为考察因素～按L9,34,正交实验表进行实验～其因素水平表见表6～正交实验设计表见表7～方差分析见表8。表6  因素水平,略,表7  正交实验设计,略,表8  柚皮苷含量方差分析,略,     由以上方差分析结果可得出～盐炙骨碎补的影响因素的主次顺序为: 1B,浸泡时间,>A,盐用量,>C,砂烫温度,～且浸泡时间对柚皮苷的含量有显著性影响。经综合分析确定其炮制的最佳工艺为A1B2C1～即每20 g药材用30 ml盐水,含4 g盐,～浸泡8 h～在190?下砂烫4 min。 3  讨论     骨碎补为骨伤科常用药～具有补肾强骨～续伤止痛的功效～为了提高其疗效～根据盐能入肾～能够引药下行的作用～增强骨碎补的补肾而强骨的作用～本次实验也是初步尝试在以中医理论的指导下选用了盐为辅料炮制骨碎补～对传统的炮制工艺进行改进～同时本实验采用HPLC法以柚皮苷为指标将盐炙品及传统砂烫品进行了比较～结果先润后烫品中柚皮苷的含量较高～说明了先润后烫品可能会提高疗效～但还需通过药效学进行进一步验证。     本实验通过单因素考察得出盐用量、浸泡时间、砂烫温度为影响炮制工艺的主要因素～并以3种因素进行正交设计～以柚皮苷含量为指标～对盐制骨碎补的最佳炮制工艺进行优选～筛选出了最佳工艺为每20 g药材用30 ml盐水,含4 g盐,～浸泡8 h～在190?下砂烫4 min。本实验结果为进一步探讨骨碎补盐炙后的炮制作用～制定骨碎补盐炙品的质量提供了参考依据。 【参考文献】   ,1,国家药典委员会.中国药典,?部,S,.北京:化学工业出版社～2005:179. ,2,周铜水,周荣汉,刘晓东.骨碎补对大鼠试验性骨 折损伤愈合的影响,J,.中草药,1994,25(5):249. ,3,吕侠卿.中药炮制大全,M,.长沙:湖南科学技 术出版社,2004:193.