动物组织块染色石蜡包埋制片法

动物组织块染色石蜡包埋制片法 经验交流23 第二天,主诉:精神好转,仍不吃不喝.用升,ATP2毫升,病毒唑1毫升,混入10葡萄 注射器灌服糖盐水后,吐少量粘液.现症:糖溶液内,静脉滴注.VC和VB,各2毫升,分 T37.6?,P156次/分,R34次/分,能站立走别皮下注射.呕泻宁2毫升皮下注射.强力解 动,皮肤弹力渐恢复.不吃,经口灌糖盐水后,毒敏2毫升皮下注射.下午3点补液一次. 没吐,拉黄褐色粘液便治疗,上午补液一次,第二天,主诉:精神好转,已不吐不吃,能 同第一天.饮少量糖盐水,没排便.现症:T37.5?,P148 第三天,主诉:能饮糖盐水.现症T37,次/分,R32次/分.精神好转,可视粘膜淡红. 8?,P152次/分,R32次/分.治疗:补液一次心音稍有力.治疗上午补液一次. 同第一天.第三天,T38.1?,精神明显好转,能自饮 第四天,主诉;精神明显好转,能饮少量牛牛奶.治疗:补液一次.共补液6次,治愈. 奶,拉黄色粘液便.现症:T38.3?,PI42次/体会:沽疗应极力维护心功能.静脉滴注 分,R32次/分.上午补液一次共补液五次,治葡萄糖,ATP,VC和VB,等药物,初期一天应 愈.补液两次.并积极治疗原发病,应用抗菌,消 病倒2:犬,品种狮子狗,性别母,年龄1炎,解毒等药物进行综合治疗.作好护理,安静 岁.主诉:已拉,吐两天,另外有皮肤病,病变部休养,保温,经常少量口服糖盐水.对胃肠炎, 涂治疗皮肤病药(敌百虫,来苏儿)后可能中毒细小病毒病,中毒性疾病等,一旦发病,要早期 了.不吃不喝.诊断:胃肠炎,中毒后继发急性诊断,及时治疗.决勿拖延病期,严防继发5-力 心力衰竭.现症:T36.2?,P168次/分,R42衰竭.发病后,抢救不及时,特别是幼犬心力袁 次/分.精神高度沉郁,可视粘膜发绀,饮,食欲竭,体温下降时,死亡率高.防止犬急性心力衰 废绝,呕吐(白色粘沫子),拉黄色粘液稀便,脱竭的关键,是加强饲养管理,饲养要规律,按时 水,瘦弱.心音快,弱.四肢束稍冷感,刺激无预防接种.严防胃肠炎,中毒性疾病和传染病 反应.尿少,色黄.肠音弱.治疗:l0葡萄糖的发生.一 溶液100毫升,氯霉素3毫升,地塞米松1毫 ;一缎坎碡,经 动物组织块染色石蜡包埋制片法 业(河北省张家口农业高等专科学校075l31) 动物组织切片的制作,是教学,科研和病 理检验中的一项经常性工作.但在大批制作 时,由于程序繁多,所以工作效率不高.为了简 化制作过程,提高工作效率,笔者进行了组织 块染色石蜡包埋制片法试验.是将组织的染 色,改放在组织包埋切片之前进行,组织切片 后不再染色,直接贴片至封固,即成永久标本. , 这种方法是笔者经多次试验摸索改进的.其优 点是,简化了操作程序,明显地节省药液,且染 色效果同于常规H.E染色.现将此法介绍如 下: 一 ,染色液的配制 (一)苏未精染色液的配制 苏木精0.6克,硫酸铝4.4克,碘化钠 24吉林畜牧兽医 0.1克,蒸馏水130毫升,乙二醇60毫升,冰 醋酸5毫升. 将苏术精溶于蒸馏水中.再加入硫酸铝, 然后加入碘化钠,不易溶化时稍加温,最后加 入乙二醇和冰醋酸. (二)复制伊红染色液的配制 将0.5克伊红先溶于3毫升蒸馏水中,滴 加冰醋酸(一滴滴加,边加边搅拌),使之产生 沉淀,至液体呈浆糊状.再加蒸馏水3—5毫 升,搅匀后再滴加冰醋酸,至不见沉淀增加.过 滤,将沉淀连同滤纸放在6O?温箱中烘干,待 伊红干燥后,加入95酒精100毫升即成. 二,制片步骤 (--)取材;各种动物的心,肝,脾,肺,肾, 脑,胃,肠等各种组织都可作为制片材料.取材 大小以1×1×0.3厘米为宜.取材要迅速,以 减少组织细胞内的死后变化.同时,还要尽可 能注意到整个器官的结构特点. (二)固定:配10中性福尔马林,37一 40甲醛液100.毫升,水900毫升,磷酸二氢 钠4克,磷酸氢二钠6.5克.固定时间24小 时. (三)水洗;常规水洗至蒸馏水.一般用自 来水冲洗24小时,再用蒸馏水洗数小时. (四)脱脂:水洗后经各级酒精(50一 7O一8O一9O一95)各1小时.无水酒 精I,I各15分钟.11酒精二甲苯,二甲苯 1,I各10分钟.而后又回来下行各级酒精至 蒸馏水,时间同前. (五)染苏木精:浸入苏木精染色液中染 色.根据组织结构特点确定染色时间.例如, 肠壁较薄,肺组织较疏松,染色时间可短些,一 般在11—16小时{肝,肾等组织结构致密,染 色时间应较长些,一般在25—36小时. (六)分色;经苏木精染色后的组织块,水 洗后投入到1盐酸酒精中进行分色,根据组 织种类和大小的不同,确定分色时间,一般20 分钟至1小时组织块呈紫红色为宜. (七)蓝化:组织块经分色,水洗后投入 1氨水中进行蓝化,时间为1—2小时组织块 呈黑紫色为宜. (A)脱水:经各级酒精(50一70一 8O一90一95)各1小时. (九)复染伊缸:移入95酒精配制的复 制伊红染4—9小时(确定时间的依据同前所 述). (十)脱水,透明;经95酒精一无水酒精 I,I一11酒精二甲苯一二甲苯I,I各级 15分钟.固组织块已经染色,不便于观察其透 明程度,要严格控制脱水透明时间,过久组织 块易变硬,变脆,造成切片的失败. (十一)按常规浸蜡包理,切片. (十二)展片和贴片按常规操作.如发现伊 红有褪色现象.可用自来水所配的0.1冰醋 酸水进行展片.这样可以固定伊红,否则所染 伊红会受热水影响而褪色. (十三)烤片,脱蜡,封固按常规操作. (十四)齄片;和片染组织一样,细胞核呈 蓝色,染色质颗粒清晰可见,胞浆呈粉红色. 三,组织块染色的程序及一部 分试验结果 (--)组织块染色的程序 取材(1×1×0.3厘米)15分钟一固定 (10中性福尔马林)24小时一水洗24小时 一脱指(各级酒精,二甲苯)12小时一染苏术 精11—36小时一分色(1盐酸酒精)20分钟 至1小时一蓝化fl氨水)1至2小时一脱水 (50一95各级酒精)5小时一复染伊红4 至9小时一脱水透明(95酒精一二甲苯I)1 小时3O分钟一浸蜡包埋(--甲苯石蜡,石蜡 1,I)5小时一切片展片(3—6微米,水温 45X])一贴片烤片(温箱50X],4小时)一脱蜡 封固(--甲苯,树脂胶)一检片. 经验交流25 (二)组织块染色试验结果 主要步骤与处理时间 组织种类结果 染苏木精分色蓝化染伊红 肝,肾,脾30小时1小时2小时9小时良好 心,舌,骨骼肌26小时10分钟1.5小时8小时良好 蛊丸34小时1小时2小时7小时良好 大瞄,小脑,脊髓,神经20小时30分钟1小时6小时良好 肺,胃,脑,膀胱15小时20分钟40分钟4小时良好 四,小结与注意事项 (一)在制片步骤中是否脱脂,经笔者多次 试验认为脱脂是提高制片质量的主要环节.目 的在千脱去组织中的脂肪,使染色清晰否则 切片在镜下观察时模糊不清.但要掌握好脱脂 时间,尤其是组织块在无水酒精和二甲苯中时 间不能太长,否则组织变硬,变脆,切片难切易 碎. (二)在染色液的选择上,笔者采用了八种 苏木精染色液和三种伊红染色液的配制法,对 组织块进行了染色比较试验.试验结果认为前 面介绍的苏木精和伊红染色液的配制法较为 理想. (三)笔者还进行了蒸馏水分色,自来水蓝 化试验,结果讨间太长,效果不佳}用1盐酸 酒精分色,1氨水蓝化时间短效果好. 停止分色.此时可用锋利刀片将组织块切下一 小片,镜检细胞核是否清楚,一般应比片染要 稍深些为宜. (四)组织的浸蜡直接影响切片质量.浸蜡 的温度不能太高,宜保持在56?左右,最好蜡 杯内保持有少量未溶化的蜡.温度过高,组织 块易收缩并变硬发脆. (五)等到贴好切片,经常规脱蜡到水时, 可再进行一次镜检,如发现苏木精染色太深 时,可用1盐酸酒精再进行分色}如果染得 太浅,可用苏木精重染. (六)最后也应指出,苏木精的组织整块染 色法,操作简便,缩短时间,节省药液,提高工 作效率,制片质量良好.但有时不易达到使整 块组织均匀染色,尤其是对基本实质性器官, 差别有时很大}如动物不同,大小厚薄不同等. 因此,要求多操作,积累经验才 注意分色是关键,严格掌握时间,组织块的结果. .,%磊颟伤1蝴携,雅呜犬8钎飙协l 雏鸡大肠杆菌病诊治体会 旦查秀瑛(吉林省东丰县畜牧兽医总站化验室136 近几年来,我县有一些鸡场,养鸡户饲养 的雏鸡,多次发生雏鸡大肠杆菌病,由于对疾 病诊断不准确,治疗方法不当,常造成雏鸡大 批死亡,幸存的患鸡育成后,进入产蛋期达不