可溶性糖测定

可溶性糖测定 (7)可溶性糖含量的测定:蒽酮比色法 630nm 原理:蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖。蒽酮可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在630nm处有最大吸收。本法多用于测定糖原的含量，也可用于测定葡萄糖的含量。 仪器:紫外分光光度计、电子天平、50ml直量筒、100ml三角瓶、保鲜膜、水浴锅、50ml容量瓶、漏斗、滤纸、移液枪、大试管、试管架、移液管、比色杯。 试剂: 1 蒽酮乙酸乙酯:取1g蒽酮溶解到50ml乙酸乙酯中，适当加温助溶，随用随配 2. 浓硫酸 测定方法:. 1. 打开水域锅预热，温度100?; 2. 称取0.2g样品，剪碎放入试管中，每个样品三份，加入10ml蒸馏水，用保鲜膜封 口，以防提取时过度蒸发; 3. 将试管放入水浴锅中计时40min; 4. 试管在室温冷却，将提取液过滤定容到25ml，定容时用少量蒸馏水冲洗试管几次， 定容后颠倒混匀即为待测定液，暂时不测定放4?冰箱保存; 5. 吸取试剂: 加浓硫酸时用移液管吸取，贴着试管管壁缓慢的加入，防止飞溅。 反应试剂(ml) ck 1 2 3 蒸馏水 1.5 1.5 1.5 1.5 样品 0.5(蒸馏水) 0.5 0.5 0.5 蒽酮乙酸乙酯 0.5 0.5 0.5 0.5 浓硫酸 5 5 5 5 6. 震荡试管，使颜色混合均匀，倒入比色杯中，在630nm处比色。 绘制曲线: 标准蔗糖溶液(0.1mg/ml):10mg葡萄糖溶解到蒸馏水中，定容到100ml备用。 取9支试管标号，加入稀释成一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液: 管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 葡萄糖标准溶(ml) 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 0.9 1.0 蒸馏水(ml) 2.0 1.9 1.8 1.7 1.6 1.4 1.2 1.1 1.0 蒽酮乙酸乙酯(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 浓硫酸 5 5 5 5 5 5 5 5 5 葡萄糖含量(μg) 0 10 20 30 40 60 80 90 100 以标准葡萄糖含量(μg)做横坐标，以吸光值做纵坐标，作出标准曲线。 结果处理: 6可溶性糖含量(%)=(C×V/a×n)/(W×10) 式中C---标准方程求的蔗糖量(微克)。a---吸取样品液体积(ml) V---提取液(ml) n---稀释倍数(ml) W---重量(g)