果蝇唾液腺染色体制片和观察

果蝇唾液腺染色体制片和观察 、 1.实验目的：理解果蝇巨大染色体产生的原因和特点；掌握果蝇睡腺剥离技术以及 果蝇唾腺染色体制片法；观察果蝇睡腺染色体。 2.实验要求：本实验为必做实验。 本实验为验证型实验。 三、实验原理及 20世纪处，D Kostoff用压片法首先在黑腹果蝇幼虫唾液腺细胞核中发现了特别巨 大的染色体。双翅目昆虫（摇蚊、果蝇等）幼虫的睡腺细胞很大，唾液腺染色体比普通 染色体大得多，唾液腺染色体经过多次复制不分开，大约有1000-4000根染色线拷贝，称为巨大染色体；具有体联会的特点，即体细胞同源染色体呈配对状态，是前期中一种 永久性配对形式，所能观察到的染色体只有半数（n）；多线染色体经染色后，出现深浅不同、密疏各异的横纹，这些横纹的数目和位置往往是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种 的特征。如染色体缺失、重复、倒位、易位等，很容易在唾液腺染色体上识别出来，所 以果蝇的唾液腺是研究遗传学和基因组学的好。 序号 仪器名称 台数 1 双筒解剖镜 20 2 培养箱 2 3 高压灭菌锅 4 4、 电饭锅 4 5 显微镜 20 五、实验内容和步骤 1.实验准备： （1）用具：双筒解剖镜,显微镜,镊子,解剖针,载玻片,盖玻片，滤纸等. （2）药品：醋酸洋红,冰醋酸,盐溶液(0.7%的氯化钠),1NHCL,蒸馏水，45%醋酸， 乳酸-醋酸溶液（乳酸-60%=1：1）醋酸，乳酸-醋酸-地衣红染色液。乳酸-醋酸-地衣红 染色液的配法： A液：饱和地衣红乳酸溶液（2g地衣红+100 ml乳酸，加热，谨防沸腾），充分溶解后过滤。 B液：饱和地衣红醋酸溶液（2g地衣红+100 ml冰醋酸，加热，谨防沸腾），充分溶 解后过滤。 1份A液：1份B液+1份蒸馏水充分混合后在棕色瓶中保存备用。 2.实验步骤： （1）取载玻片于双筒镜下，其上滴一滴生理盐水，幼虫置于生理盐水内，两手各 握一枚解剖针，以针揿住幼虫末端的1/3处。固定幼虫，将另一针揿住幼虫头部，用力 向拉，把 头部自身体拉开，腺体即随之而出。腺体们于食道两侧，中间夹有神经球。腺体拉出后剔除 图4-1 解剖产物中唾线的位置及形态 图4-2 果蝇幼虫唾液腺 脂肪。 （2）加1-2滴45%醋酸于腺体上，作用5-7s。用滤纸吸净剩余的溶液，谨防腺体丢失！。 （3）加1滴1NHCL溶液于腺体上，作用30-40 s，用滤纸吸净剩余的溶液，谨防腺体丢失！。 （4）加1滴蒸馏水于腺体上，作用浸1-2 s，用滤纸吸净水分的溶液，谨防腺体丢失！ （5）加1-2滴染色液于腺体上，静止染色30-45min。注意染色过程中要随时添加染色液，谨防腺体变干。 （6）用乳酸-醋酸溶液洗染好的腺体，重复2-3次，用滤纸吸净剩余溶液，同时擦 2 净腺体周围的杂质，谨防腺体丢失！ （7）加1滴乳酸-醋酸溶液于腺体，盖上盖片，用拇指用力压，或用玻璃棒一端轻 轻敲打盖片，吸净盖片周围的水分。 （8）用透明指甲油涂封在盖片四周，待指甲油变干后在显微镜或油镜下观察。 六、实验数据处理与结果分析 1.观察图象的特点：显微镜观察可见到果蝇4对染色体。其中第4对染色体和X染色体的着丝粒在端部，形成一条线状和点状染色体。第2和第3条染色体的着丝粒在中央，它们从染色中心以V字型向外伸出（2L，2R，3L，3R），共有6条，但是，在显微镜下，短小的第4条染色体有时不易观察到，所以最容易识别的是第5条。雄果蝇的Y染色体几乎包含在染色中心里。 图4-3 果蝇唾液腺染色体 2.绘出显微镜下观察到的果蝇4对染色体。 七、注意事项 1.剥离果蝇幼虫唾液腺时，尽量选择较肥大的三令幼虫，以获得较大的唾液腺； 2.果蝇幼虫唾液腺剥离后，在解离和水洗过程中，防止滤纸距离材料太近，以免唾 液腺粘到滤纸上。 八、预习与思考题 1.预习果蝇唾液腺染色体的特点。 2.什么是体联会？通常联会应出现在什么类型的细胞质中 3.利用果蝇唾液腺染色体可进行哪些研究？ 3