ABO血型鉴定

ABO血型鉴定 【注意事项】 1(严格按操作规程操作，认真核对标本并做好标记。 2(所用试管、滴管和玻片必须清洁干净，防止溶血。 3(一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。 4(抗血清每次使用完后，应放回冰箱保存，以免细菌污染。 5(为了防止冷凝集现象的干扰，一般应在室温下进行试验。 6(严格控制离心速度和时间，防止假阳性或假阴性结果。 7(观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。 8(未用的微柱凝胶免疫检测卡应人室温保存，用完后放4?冰箱保存1周。 9(观察结果时，若出现溶血现象，明存在抗原抗体反应并有补体激活，应视为凝集。 10(判断结果后应仔细核对，，避免笔误。 11(分型试剂+受检者红细胞与受检者血清+试剂红细胞结果不符时，要看受检者基本情 况，如果是婴幼儿、肿瘤患者，理论上应该检测到的抗体没有查到，可以忽略不计， 以查到的抗原定型。 12(分型血清+受检者红细胞与受检者血清+试剂红细胞结果不符时，受检者基本情况， 又不是婴幼儿、肿瘤患者。理论上应该检测到的抗体没有查到，多见老年人，可 以用以下方法加以检测抗体: (1)用试管法重做，在做完1、2步后，把试管放4?环境15分钟，后取出离心，观察 结果。 (2)用试管法重做，在做完1、2步后，把试管放37,环境15分钟，后取出离心，观察 结果。 (3)用试管法重做，用聚凝胺方法查抗体:?取洁净小试管3支，分别标明A型、B型 和O型细胞。用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入A、 B、O型5,试剂红细胞悬液1滴，混匀;?于三个试管中分别加入低离子强度液(low ionstrength solution，LISS液)0.7ml、聚凝胺液(polybrene solution)2滴，混 匀;?1000r/min离心(离心时间应按离心机校准时间);?倒掉上清液，管底残液 体留约0.1 m1;?轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做; ?加入解聚液(resupension solution)2滴，轻轻转动试管混合并同时观察结果。 如果在30秒至1分钟内凝集散开，代表是由聚凝胺引起的非特异性聚集;如凝集 不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应。如反应可凝，可进一步倒在玻片 上用显微镜观察。 13(受检者血清+试剂红细胞试验中，O型细胞凝聚要查自身抗体和不规则抗体。 【临床意义】 1(血型鉴定是实施输血治疗的首要步骤。进行交叉配血前必须准确检测受血者和供血 者的血型。 2(进行组织器官移植时，供、受器官者的ABO系统血型必须相同。 3(母、子ABO系统血型不合可以造成ABO系统新生儿溶血病。 4(查抗体的目的在于复检血型抗原结果的准确性，纠正漏检、误报。 5(查抗原时，对一些具有弱抗原的亚型，如AB型，因其A型抗原较弱而被忽略，误2 定为B型。通过查抗体可发现此类患者血清中既无抗A，也无抗B凝集素，提示检 查的抗原可能有误，应进一步核实鉴定结果。 6(查抗体可以纠正某些肿瘤患者因红细胞抗原性减弱造成的抗原检测错误，同时还可 以克服和排除获得性类B抗原和全凝集现象对红细胞定型的干扰。 7(查抗体还可以发现血清中存在的一些不规则抗体，如抗M、抗N、抗P、抗Lewi等。 1 Rh(D)血型鉴定 【注意事项】 1(Rh血型系统的抗体多由免疫产生，血清中有很多天然抗体存在，故不需作抗体检测试验。 2(阳性对照，取3人O型红细胞混合配成。阴性对照不易得到，一般配制方法为正常人AB型血清1滴，5,D阳性红细胞悬液1滴和菠萝酶试剂1滴混匀，与受检管一同置于37?水浴1小时。 3(酶介质中的酶很容易失活，故每次试验都要设置阳性对照。若阳性对照不出现凝集，表明酶或抗血清已失效，酶的活性过强也可使阴性标本出现假阳性结果，因而也要设立阴性对照，以排除假阳性。 4(Rh血型鉴定要严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体凝集反应的凝集块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻弹动试管，不可用力摇动。 5(Rh(D)抗原检测原则 对受血者一般只测Rh(D)抗原，而对供血者不仅要检查Rh(D)抗原，并在其为阴性的前提下，必须进一步确定是否为Rh弱D型。 【方法评价】 单克隆混合试剂可特异性地与含D抗原的红细胞发生凝集反应，能检出过去认为是阴性的弱D表现型，其中包括极罕见Dvariant型。 酶介质法用于Rh血型系统抗原检测或其IgG类相应抗体的检测。在ABO、P和Lewi血1型系统抗原抗体反应中，可用酶介质加强其反应强度。但酶介质可破坏MNSs和Duffy血型系统抗原，因而不能用此法进行MN和Duffy血型系统抗原抗体检测。 微柱凝胶卡检测使用安全，操作简单，结果稳定可靠，灵敏度高，重复性好。目前有手工、半自动和全自动三种检测仪器。 【临床惫义】 1(大多数Rh血型抗体由免疫而产生，如怀孕或输血刺激而致。D抗原具有高免疫原性，它能引起50,,85,接受D阳性血的D阴性受血者产生抗D抗体，抗D抗体在医学中十分重要，因为这种抗体可引起严重的新生儿溶血病和溶血性输血反应。 2(Rh(D)抗原阴性受血者的输血原则是供受者双方ABO血型相同，还Rh(D)抗原阴性。 3(Rh(D)新生儿溶血病患儿输血或换血原则，ABO血型同患儿相同，Rh血型同母亲相同。 4(Rh弱D型输血原则，Rh弱D型为供者应视为Rh(D)阳性使用。作为受者应输Rh(D)阴性血。 5(Rh弱D型妇女与Rh(D)阳性丈夫生育的婴儿可能会产生新生儿溶血病。 6(Rh弱D型受者血小板输注原则是尽管血小板表面无Rh抗原，但制剂中仍含有一定量的红细胞(可使受血者致敏)故Rh(D)阴性生育期妇女(含女童)应输Rh(D)阴性血小板。 不规则抗体筛选和鉴定 【注意事项】 1(每种试验必须做自身对照，即待检者自身血清和自身红细胞反应，无凝集则试验有效;若有凝集则提示存在自身免疫抗体。 2(抗体筛选阳性后，要用生理盐水洗涤红细胞3次，离心后再观察结果，避免假阳性反应。 3(根据反应凝集强度?,+4记为阳性结果，表示待检者血清中有不规则抗体，结合谱细胞反应格局，确定抗体特性;无凝集表示待检者血清中无不规则抗体。 4(抗球蛋白法或微柱凝胶法出现凝集，而盐水法无凝集，则提示不规则抗体为IgG性质。 5(不规则抗体筛检试验在临床输血中是很有价值的，但仍有其局限性，其原因有二:一是低频抗原的抗体可能被忽略，二是以往免疫的抗体已降到难以检出的水平。因此抗体筛检试验不可能检出有临床意义的全部抗体。 6(不规则抗体筛检，必须对有输血史，妊娠史或短期内需要接受多次输血者及交叉配血不合者进行筛检。 7(不规则抗体筛查的技术要求:尽可能多地检测出有临床意义的抗体;尽可能少地检测出无临床意义的抗体;尽可能快地完成抗体检测。 【临床意义】 对受血者的血清和血浆，应作常规的抗体筛选试验，以发现有临床意义的不规则抗体，即能引起各类免疫性输血反应、新生儿溶血病或使输入红细胞存活时间缩短的特异性抗体。当抗体筛选试验阳性时，让待检血清与谱细胞反应，通过待检血清与谱细胞反应格局情况，就可以判断待检者血清中存在不规则抗体的特异性。 不规则抗体筛检有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体并可在配血前鉴定此抗体，以获得充足的时间来选择缺乏相应抗原的相配合的供者。以避免因寻找不到相合的血源而延误受血者的治疗。临床上可选择与此相配合的血液供受血者输用。 盐水介质交叉配血试验 【注意事项】 1(配血前严格查对患者姓名、性别、年龄、科别、床号及血型，确保标本准确无误，同时，要复检受血者和供血者的ABO血型是否相符。 2(配血试管中发生溶血现象是配血不合，表明有抗原抗体反应，同时还有补体参与，必须高度重视。 3(试验中，每次滴加不同人血清或红细胞时，都应当更换吸管，或将吸管放置在生理盐水中反复洗涤3次，防止血清中抗体拖带，影响试验结果。 4(红细胞加入血清以后，立即离心并观察结果，不宜在室温下放置，以免影响试验结果。 5(观察结果时，如果存在纤维蛋白时，可以去除纤维蛋白块，主要观察混合液中有无凝集。 6(室温控制在(22?2)?，防止冷抗体引起凝集反应，影响配血结果的判断。 7(患者一次接受大量输血(10个以上献血者)，则献血者之间亦应进行交叉配血 试验。 8(盐水介质配血试验操作简单，是最常用的配血方法，可以发现最重要的ABO血型不合。但只能检出不相合的IgM类完全抗体，而不能检出IgG类免疫性的不完全抗体。对有输血史(特别是有过输血反应的患者)、妊娠、免疫性疾病史争器官移植史等患者，必须增加另外一种可以检测IgG类抗体的方法，保证输血安全。 聚凝胺介质交叉配血实验 【注意事项】 1(若受血者用血量大，需要10个献血员以上时，献血员间也要进行交叉配血。 2(溶血标本不能用于交叉配血，因为配血试管中发生溶血现象，表明有抗原抗体反应，同时还有补体参与，是配血不合的严重情况。 3(血清中存在冷凝集素时，可影响配血结果的判断。此时可在最后滴加解聚液时，将 试管立即放人37?水浴中，轻轻转动试管，并在30秒内观察结果。 4(聚凝胺介质交叉配血试验中，可以用EDTA的血浆标本代替血清使用。 5(当解聚液加人以后，应尽快观察结果，以免反应减弱或消失。 6(聚凝胺是一种抗肝素试剂，若患者血液标本中含有肝素，如血液透析患者，须多加几滴聚凝胺液以中和肝素。 【注意事项】、 1(微柱凝胶卡必须保存在室温下，实验前，要将微柱凝胶卡空卡放入微柱凝胶离心机中，以1000r,min，离心1分钟，避免卡中的凝胶在运输途中产生胶质不均匀、胶面不整齐或气泡等。 2(微柱凝胶介质交叉配血试验，可一次性检出IgM型和IgG型红细胞血型抗体，因此在临床输血实际使用时，可以省去盐水介质交叉配血试验。 3(不要将微柱凝胶试剂卡长期保存4?，在此温度下，试剂卡中液体蒸发凝集于封口铝箔下，胶易干涸，应将试剂卡保存在18,22?。 4(封口已损坏，管中液体干涸或有气泡的微柱凝胶试剂卡不能使用。 5(配血标本要新鲜(3天以内)，不能被细菌污染，否则会出现假阳性反应。 6(血清标本必须充分去纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍阴性红细胞沉淀，呈假阳性反应。 7(如果使用的标本是血浆，一定要用的含抗凝剂的标本管采集，否则血浆中纤维蛋白在微柱离心时析出，阻挡分散的红细胞下降，出现假阳性。 8(微柱凝胶卡中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他因素所致溶血，故标本一定要认真分析。 其他因 9(微柱凝胶介质交叉配血实验操作简单、结果稳定、灵敏度高、重复性好、可标准化、可自动化、使用安全。