【精品文档】高效液相色谱-蒸发光散射法测定驴胶补血颗粒中黄芪甲苷的含量药学论文_医药学论文_27425
论文
题目:高效液相色谱-蒸发光散射法测定驴
胶补血颗粒中黄芪甲苷的含量药学论文_医
药学论文
编辑:小小
【关键词】 高效液相色谱
摘要:目的建立驴胶补血颗粒中黄芪甲苷的含量测定方法。方
法采用高效液相色谱(HPLC)法,蒸发光散射检测器~色谱柱采用安捷
伦C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)柱, 乙腈水,37?63,为流动相,
流速为1.0 ml,柱温为40?, 漂移管温度105?,载气流速为2.7
ml?min-1。结果结果表明黄芪甲苷进样量在2.505~12.525 μg范
围内呈良好的线性关系,相关系数为0.999 1,平均回收率为
100.1%,RSD为0.54%(n=6)。结论该方法简便,准确~重现性好,可作
为该制剂的质量控制。
关键词:高效液相色谱蒸发光散射法, 驴胶补血颗粒, 黄芪
甲苷
Determination of Astragaloside in Lvjiaobuxue Granule
by HPLC-ELSD
Abstract:ObjectiveTo establish an HPLC-ELSD method for determination of astragaloside in Lvjiaobuxue Granule.MethodsWith Agilent XDB C18(4.6 mm×250 mm,5 μm) ,
acetonitrile-water(37?63) was used as the mobile phase,
the temperature of drift tube was 105?.ResultsThe linearity was obtained from 2.505~12.525 μg(r=0.999 1).The average recovery was 100.1% with RSD=0.54%(n=6).ConclusionThe method is
sensitive ,simple ,specific and accurate for determination
of astragaloside in Lvjiaobuxue Granule.
Key words: HPLC-ELSD, Lvjiaobuxue Granule,
Astragaloside
驴胶补血颗粒由阿胶、黄芪、党参、熟地黄、白术、当归等组成~具有滋阴补血、健脾益气、调经养血之功效。主要用于久病体虚、血亏气虚、妇女血虚、经闭、经少等症。方中黄芪具有益气养血的功效~而黄芪甲苷是其中主要化学成分。本文采用高效液相色谱-蒸发光散射器法对黄芪甲苷含量进行研究。
1 仪器与试药
日本岛津LC-2010C高效液相色谱仪~class-vp ver.6.1色谱数据处理工作站,Alltech ELSD 2000ES。驴胶补血颗粒,湖南九芝堂股份有限公司,,乙腈为色谱纯~水为重蒸水,新鲜制备,~其余试剂均为国产分析纯。黄芪甲苷对照品,批号0781-200109~中国药品生物制品检定所,。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性实验色谱柱:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,安捷伦C18~4.6 mm×250 mm~5 μm,,流动相为乙腈-水,37?63,,流速1.0 ml,进样量15 μl,ELSD参数:漂移管温度105?,载气流速2.7 ml?min-1,柱温40?。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4 000。用蒸发光散射检测器检测。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷适量~加甲醇制成0.5 mg/ml的溶液~即得。
2.2.2 供试品溶液的制备取本品细粉约10 g~精密称定~置索氏提取器中~加甲醇40 ml~冷浸过夜~再加甲醇适量~加热回流4 h~提取液回收甲醇并浓缩至干~残渣加水10 ml~微热~使溶解~
加水饱和的正丁醇振摇提取4次~40 ml/次~合并正丁醇液~用氨试液振摇提取2次~40 ml/次~弃去氨液~正丁醇液蒸干~残渣加水5 ml使溶解~放冷~通过已处理好的D101型大孔吸附树脂,内径1.5 cm~长12 cm,~以水50 ml冲洗~弃去水洗液~再用40%的乙醇30 ml洗脱~弃去洗脱液~继用70%的乙醇80 ml洗脱~收集洗脱液~蒸干~用甲醇溶解并转移至5 ml量瓶中~加甲醇至刻度~摇匀~即得。
2.3 测定法精密吸取对照品溶液10~20 μl~供试品溶液15
~注入液相色谱仪~测定~以外标两点法对数方程计算~即得。 μl
2.4 方法学考察
2.4.1 流动相的选择分别以甲醇-水,40?60,、乙腈水 四氢呋喃,33?67?4,、乙腈水,32?68,及乙腈水,37?63,为流动相。结果表明~以乙腈水,37?63,为流动相~色谱峰分离效果最佳~无干扰~且保留时间短~故选用该流动相。
2.4.2 柱效的考察按正文方法测定~得到芍药苷对照品以及供试品的色谱图,见图1~2,。暂定理论塔板数黄芪甲苷峰计算应不
。 低于4 000
图1 对照品溶液色谱图,略,
图2 样品色谱图,略,
2.4.3 阴性干扰实验按本品处方
及正文供试品溶液制备方法制备不含黄芪甲苷的阴性对照溶液~按正文含量测定方法进行测定~所得到的色谱图中~在与黄芪甲苷对照品峰相应的保留时间位置无干扰峰检出~即阴性无干扰。见图3。
图3 阴性干扰色谱图,略,
2.5 线性关系考察精密称取对照品黄芪甲苷20.04 mg~置10 ml量瓶中~加甲醇溶解并稀释至刻度~摇匀~再精密量取2.5 ml~置10 ml量瓶中~加甲醇稀释至刻度~摇匀~作为对照品溶液。分别精密量取5~10~15~20~25 μl~注入液相色谱仪~以峰面积的常用对数对进样量,μg,的常用对数进行线性回归~得回归方程:Y=1.049X,6.380,r=0.999 1,。结果表明黄芪甲苷进样量在2.505~12.525 μg范围内呈良好的线性关系。
2.6 精密度实验取同一浓度,0.501 mg/ml,黄芪甲苷对照品溶液~按色谱条件连续进样5次~进样量20 μl/次~记录峰面积~RSD为 0.71%。结果表明本法精密度较好。
2.7 稳定性实验取本品细粉10.002 g~按正文含量测定方法制备供试品溶液~按正文色谱条件每隔6 h进样1次~进样20μl/次~记录峰面积~RSD为2.11%~结果表明供试品溶液在24 h内稳定性较好。
2.8 重现性实验取同一批号(批号050205)样品~按正文含量测定方法~分别配制6份供试品溶液进行测定~计算含量~RSD为1.14,。结果表明本法具有良好的重现性。
2.9 加样回收实验分别取重现性实验项下用样品,含量为0.236 7 mg/g,约7 g~共6份~精密加入黄芪甲苷对照品溶液1.0 ml,0.501 mg/ml,~按正文含量测定方法中供试品制备方法制备样品~测定。结果见表1。结果表明方法的准确性较好。
2.10 样品测定分别取5个批号的样品~按正文含量测定的方法进行测定~计算含量。结果见表2。
表1 加样回收率测定结果,略,
表2 样品含量测定结果,略,
3 讨论
3.1 据文献记载,1,~黄芪甲苷含量测定方法很多~有比色法、分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法等~但由于黄芪甲苷仅在200 nm波长处有微弱吸收~因而干扰大、灵敏度低。ELSD为通用型质量检测器~特别适合无紫外吸收的化合物的含量测定~目前在黄芪等含皂苷类药材及制剂等药品质量控制中使用较多,2,~具有灵敏度高、结果可靠的优点。因此笔者采用了HPLC-ELSD法对驴胶补血颗粒中黄芪甲苷的含量进行了测定。
3.2 实验中选用乙腈-水,37?63,及乙腈-水- 四氢呋喃,33?67?4,为流动相~二者均达到了满意分离效果~黄芪甲苷峰与相邻峰分离度大于1.5~理论塔板数以黄芪甲苷峰计算均大于4 000~综合考虑~在测定中选用乙腈-水,37?63,为流动相。
3.3 结果表明~该法操作简便~重现性好~可用于驴胶补血颗粒的质量检测。
参考文献:
,1, 池玉梅~姜海英.HPLC士差折光检测测定黄芪及其注射液中黄芪甲苷含量,J,.中国药学杂志~2001~36,1,:49.
,2, 徐希科~李慧梁~柳润辉~等.HPLC-ELSD法测定黄芪药材中黄芪甲苷,J,.中草药~ 2005,36(11):1720. 转贴于