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关于奎诺酮酶联免疫检测试剂盒的使用(组织生乳全蛋)(论文资料)

2017-09-20 7页 doc 20KB 18阅读

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关于奎诺酮酶联免疫检测试剂盒的使用(组织生乳全蛋)(论文资料)关于奎诺酮酶联免疫检测试剂盒的使用(组织生乳全蛋)(论文资料) 喹诺酮类酶联免疫检测试剂盒说明书 【反应原理】 回收率: 喹诺酮类(QNS)酶联免疫检测试剂盒,主要是利用抗原与抗生乳………………………………………70~130% 体的特异性免疫化学反应的基本原理来进行的,换句话说,就鱼肉………………………………………70~130% 是利用酶标记物与样品中的喹诺酮与微孔中的抗体进行竞争反鸡肉………………………………………70~130% 应。在整个反应当中,如果样品中的喹诺酮残留的越多,相对虾…………………………………………70...
关于奎诺酮酶联免疫检测试剂盒的使用(组织生乳全蛋)(论文资料)
关于奎诺酮酶联免疫检测试剂盒的使用(组织生乳全蛋)(论文资料) 喹诺酮类酶联免疫检测试剂盒说明书 【反应原理】 回收率: 喹诺酮类(QNS)酶联免疫检测试剂盒,主要是利用抗原与抗生乳………………………………………70~130% 体的特异性免疫化学反应的基本原理来进行的,换句话说,就鱼肉………………………………………70~130% 是利用酶标记物与样品中的喹诺酮与微孔中的抗体进行竞争反鸡肉………………………………………70~130% 应。在整个反应当中,如果样品中的喹诺酮残留的越多,相对虾…………………………………………70~130% 地就会竞争反应越多的酶标记物,使得能结合上抗体的酶标记猪肉………………………………………70~130% 物相对地减少,用TMB底物显色,样品中的喹诺酮含量与样品养殖水……………………………………70~130% 的吸光度值呈反比,与曲线比较即可得出喹诺酮含量。 全蛋………………………………………70~130% 批间、批内变异系数:CV?10% 【试剂盒组份】 1、酶标板:8孔/条,12条/板 【所需仪器和试剂】 2、喹诺酮标准溶液(1.5 mL / 瓶):0 ppb、0.3 ppb、1所需仪器:酶标仪、离心机、均质机、微量移液器(单道.1 ppb、 20µl-200µl、100µl-1000µl、多道250µl) 3.3 ppb、10 ppb、30 ppb; 100ppb 3、10倍浓缩萃取稀释液/清洗液 …………………… 50 mL 所需试剂: 4、200倍喹诺酮酶结合物………………………… 0.1 mL 、分析级甲醇:1 5、显色液 ………………………………………………12 mL 甲醇甲醇×萃取稀释液 80%: 100% 80ml + 120ml 6、反应终止液 …………………………………………13 mL 甲醇甲醇×萃取稀释液70%: 100% 70ml + 130ml 甲醇甲醇×萃取稀释液 60%: 100% 60ml + 140ml 【试剂盒技术指标】 甲醇甲醇×萃取稀释液 55%: 100% 55ml + 145ml 试剂盒灵敏度: 0.3ppb 甲醇甲醇×萃取稀释液 25%: 100% 25ml + 175ml 样本检测下限: 甲醇甲醇×萃取稀释液 8%: 100% 2ml + 123ml 生乳…………………………………………………2 ppb 甲醇甲醇×萃取稀释液 4%: 100% 1ml + 124ml 鱼肉……………………………………………… 0.45 ppb 、正己烷2 鸡肉 ………………………………………………0.45 ppb 3.(Analyzed Ethanol) 分析级乙醇 35%: 100% 35ml + 1x65ml 虾 ………………………………………………0.45 ppb 乙醇乙醇提取液 猪肉……………………………………………… 0.45 ppb 【样本前处理 全蛋……………………………………………… 2 ppb 样品处理前须知: 交叉反应率: (1)实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的试剂时要更换恩诺沙星……………………………………………100% 吸头。 环丙沙星……………………………………………102% (2)实验之前须检查各种实验器具是否干净,必要时可对实验培氟沙星……………………………………………85% 器具进行清洁,以避免污染干扰实验结果。 诺氟沙星……………………………………………70% 样品处理 :单诺沙星……………………………………………65% 氧氟沙星……………………………………………60% 本试剂可检测生乳、鸡肉、猪肉、鱼、虾全蛋等残留之喹 恶喹酸 ……………………………………………55% 诺酮类抗生素: 氟甲喹 ……………………………………………50% 、待测物为生乳,则依以下方法进行处理1 加替沙星……………………………………………47% 1 ml20 (3500 取之待测生乳以离心机离心分钟, 洛美沙星 …………………………………………31% rpm) 200uL35%,吸取中间液体层,并加入乙醇依诺沙星 …………………………………………25% 800uL5 稀释倍。 氟罗沙星 …………………………………………15% 检品敏感度:, 2 ppb 左氧氟沙星…………………………………………9% 稀释倍数:, 5 色拉沙星 …………………………………………4% 萘啶酸………………………………………………6% 2、待测物为鸡肉或猪肉或鱼类样品,分别依感度需求以下列方4.以离心机离心15分钟(3000 rpm),利用吸管吸去包含 法择一进行: 中间乳化层部分的上层液,正己烷,,再吸取下层液备用。 方法一: , 检品敏感度:0.45 ppb 1.将2g已均质样品放入15 mL离心管中,再加入4mL 25%, 稀释倍数:1.5 1N NaOH 50uL,震荡混合约1分钟,以60?隔4、待测样品为养殖水 甲醇及 取15ml养殖水于50ml离心管中,4000rmp/min离心10水加热约10分钟,再以上下转动充分混合约10分钟。 分钟。用离心后的养殖水上清液将10倍的样品稀释液,稀释2.以离心机离心15分钟 (3500 rpm) ,再吸取上层液中的 底部以1×萃取稀释液再稀释1.5倍 (即上层液200 μL成1倍的溶液 (9体积养殖水和1体积10倍浓缩样品稀释加1×萃取稀释液100 μL)。 液),混匀待检。 检品敏感度:, 1.5ppb , 检品敏感度:0.3 ppb , 稀释倍数:1.1 , 稀释倍数:4.5 待测物为全蛋,则依以下方法进行:, 5. 方法二: 将已均质之全蛋放入离心管中,再加入, i.1g15 mL3 1.将1g已均质样品放入15 mL离心管中,再加入3 mL 80% 甲醇,,,并震荡混合,,mL 70%Methanolvortex甲醇,震荡混合约1分钟,再以上下转动充分混合约10 分钟。 约分钟。1 以离心机离心分钟,,,再吸取上层液以离心机离心分钟(),取上层液(, ii.153500 rpm2.153000 rpm1 mL80% 至干净离心管中,并以提取液再稀释倍,即1X1.5甲醇)至玻璃管中,于下,利用氮气将有机10 mL50 ? 上层液加原倍提取液,。200μL100μL 溶剂吹干。 检品敏感度, : 2 ppb 于此玻璃管中加入加入甲醇,先将残余物完全3.0.5 mL 4%稀释倍数, : 6 溶解后(若未能完全溶解,可能会导致回收率降低),再 加入正己烷,震荡混合约秒钟。1mL20~30 注:若萃取过程中乳化现象太严重,看不到下层液有澄清部以离心机离心分钟(),利用吸管吸去包含中4.153000 rpm分,请先将玻璃管中大部分上层液(正己烷)取出,剩余乳间乳化层部分的上层液,正己烷,,再吸取下层液备用。 化部份再利用隔水加热?约分钟后,即可大幅改善80~1003检品敏感度:, 0.45 ppb 乳化现象。 稀释倍数:, 1.5 【检测程序】 3. 待测物为虾,则依以下方法进行萃取: 1、将标准品(0 ppb、0.3 ppb、1.1 ppb、3.3 ppb、10 ppb、方法一: 30 ppb)对应微孔按序编号后分别分别加入100 µL喹诺酮标准1.将2g已均质样品放入15 mL离心管中,再加入4 mL 55%溶液。 甲醇,震荡混合约1分钟,再以上下转动充分混合约10 2、在其他的微孔加入100 µL已完成前处理的样品溶液。 分钟。 3、再于每一微孔另加入50 µL已稀释的喹诺酮酶标记物(参2.以离心机离心15分钟(3500 rpm),再吸取上层液中的见注意事项4)。 底部以1×萃取稀释液再稀释1.5倍(即上层液200μL加 4、轻敲酶标板四周,使其充分混合后于室温下避光静置50原倍萃取稀释液100μL)。 分钟。 , 检品敏感度:1.5 ppb 5、将微孔中的反应液甩掉,再将已稀释清洗液(参见注意事, 稀释倍数:4.5 项3)加满每一微孔后甩掉,重复3次。 6、最后一次甩掉清洗液后,在吸水纸上拍干。 方法二: 7、于每一微孔加入显色液100 µL后,轻敲酶标板四周,使其1.将1g已均质样品放入15 mL离心管中,再加入3 mL 60%充分混合。 甲醇,震荡混合约1分钟,再以上下转动充分混合约10 8、于室温下避光静置20分钟。 分钟 9、加入反应终止液,每一微孔加入100 µL。 2.以离心机离心15分钟(3000 rpm),取1 mL上层液,60% 10、酶标仪以单波长450 nm或双波长450 nm / 650 nm读值。 甲醇,至10mL玻璃管中,于50?下,利用氮气将有机溶 剂吹干。 3.于此玻璃管中加入加入0.5mL 8%甲醇,先将残余物完全 溶解后(若未能完全溶解,可能会导致回收率降低),再加 入正己烷1mL,震荡混合约20~30秒钟。 【结果判定】 【注意事项】 1、定性判定: 1、使用前请先将试剂盒回温至室温 (置于室温60分钟以上), 用样品的平均吸光度值与标准值比较即可得出样本所含喹各溶液皆摇匀后方可使用。 诺酮类浓度范围(ng/ml)。假设样品1的吸光度值为0.313,2、回温后,取出所需酶标板条,将剩余未测的ELISA孔条立样品2的吸光度值为1.032,标准液吸光度值分别是:0ppb为即放回铝箔袋中,置于4 ?保存。 1.892;0.3ppb为1.501;1.1ppb为1.175;3.3ppb为0.751; 3、10倍萃取稀释液与10倍清洗液请用蒸馏水稀释10倍方可10ppb为0.421; 30ppb为0.198。则样品1的浓度范围使用。 (如1 mL浓缩稀释液加9 mL蒸馏水) 稀释后的原倍萃10ppb-30ppb;样品2的浓度范围1.1ppb-3.3ppb。(再乘以相取稀释液和原倍清洗液可于4 ?保存一周。 应的稀释倍数) 4、原倍喹诺酮酵素结合体配制: 2、定量判定: 请用原倍萃取稀释液将200倍喹诺酮酶结合物以200倍稀所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值(B)除释即完成原倍酵素结合体配制。亦即采用浓缩200倍喹诺酮酶以第一个标准(0标准)的吸光度值(B0)再乘以100%,即结合物0.1ml+1×萃取稀释液19.9ml比例稀释;请在进行上盘百分吸光度值。 测试前方可稀释,过早稀释易造成数据偏差。 B 5、萃取流程请使用P.P.材质的15 mL离心管以免腐蚀。 百分吸光度值(%), ×100% 6、反应终止液含0.5 N HCl,请小心操作。 B0 7、本试剂盒的所有试剂出厂前均做过完整的测试,请使用试剂B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值 盒提供的药品及试剂,勿任意更换。 B0—0ng/ml标准溶液的平均吸光度值 8、ELISA所得的喹诺酮浓度若低于该样品检品敏感度即可视为以标准品百分吸光率为纵坐标,以喹诺酮标准品浓度(ng/ml) 该样品背景值,无须回乘稀释倍数。反之若所得的喹诺酮浓度的半对数为横坐标,绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代 若高于该样品检品敏感度,即可能为喹诺酮阳性样品,建议使入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其 用再其它检测方法检测,如GC/MS等。 对应的稀释倍数,然后除以相应交叉率即为样本中相应喹诺酮 9、进行生乳的检品制备时,在ELISA操作时中请确实轻敲酶类的实际浓度。 标板一到二分钟(D.操作步骤的第四点)。 若利用试剂盒专业分析软件进行计算,更便于大量样品的准确、 快速分析。 说明摘录:广州瑞森生物科技有限公司
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