【doc】复方五仁醇胶囊保肝作用的实验与临床研究

【doc】复方五仁醇胶囊保肝作用的实验与临床研究复方五仁醇胶囊保肝作用的实验与临床研究时珍国医国药2008年第19卷第12期LISH1ZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2008VOL.19NO.12表2结果表明,薯良大,小剂量组均能延长冰醋酸致痛小鼠疼痛潜伏期,并能显着减少小鼠的扭体次数,具有明显的镇痛作用.从薯良大,小剂量组的镇痛百分率来看,也都有一定的镇痛作用.3讨论实验结果显示,薯良水煎液具有一定的镇痛作用,或有这种作用的良好趋势,但从中也看到其镇痛作用不是很稳定,小剂量组在热板法致痛中并无明显的镇痛作用.另外其镇痛作用机制有待进一步研究.现在用的是水煎液,其他提取物如醇提液是否有效或更有效也还值得进一步研究.薯良是民间长期使用的药材,具有活血,止血,理气,止痛等功效,主要用于清热解毒,凉血止血等,具有较好的疗效,本实验结果与民间临床使用基本一致.本实验为薯良的进一步开发及临床应用提供了一定的理论依据.参考文献:,[1]中国科学院植物研究.中国经济植物志[M].北京:科学出版社1961:649,1245.,沈映君,刘青云,等.中约药理学实验,第1版[M].上海:[2]陈奇上海科学技术出版社,2001:24[3]广西壮族自治区革命委员会卫生局.广西本草选编,下册[M].南宁:广西人民出版社,1974:1984.复方五仁醇胶囊保肝作用的实验与临床研究朱浩然,窦志华,罗琳,张兵,李民,达坤林(1.江苏省南通市第三人民医院226006;2.南通大学,江苏南通226001)摘要:目的考察复方五仁醇胶囊对损伤肝细胞的保护作用及对慢性肝炎的治疗效果.方法以sD大鼠为供体制备复方五仁醇胶囊舍药血清,CC1诱导大鼠原代培养肝细胞损伤模型,采用血清药理学方法考察含药血清对损伤肝细胞增值(M1丫r法)和培养上清液中丙氨酸氨基转移酶(AIJT)的影响;将446例慢性乙型肝炎患者随机分成治疗组和对照组,以I】缶床症状,体征,肝功能为主要指标,考察复方五仁醇胶囊的治疗效果.结果与模型组比较,含药血清组M1Tr值明显升高,上清液中AI均显着下降,体系中加入10%含药血清效果最佳;治疗组,对照组临床症状,体征及肝功能指标均明显得到改善,复方五仁醇胶囊的疗效优于阳性对照药护肝片.结论复方五仁醇胶囊对肝细胞损伤具有明显保护作用,对慢性肝炎有较好治疗作用.关键词:复方五仁醇胶囊;保肝作用;血清药理学;临床观察中图分类号:R285.5;R285.6文献标识码:A文章编号:1008-0805(2008)12-2968-02ClinicalandExperimentalStudyonLiver——protectiveEffectofCompoundWurenchunCapsulaZHUHao—ran,D0UZhi—hua,LUOLin",ZHANGBing,LIMin,DAKun—lin(1.ePeople'SHospitalofNantong,Nantong226006,China;2.NantongUniversity,Nantong226001.China)Abstract:ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectoftheCompoundWurenchunCapsula(CWC)oninjuredhepatocytepatientswithchronichepatitis.MethodsHepatocyteinjurymodelwasinducedbyCC14andtheinjuredhepatocyteswereincuba—tedwithratserunlobtainedafteroraladministrationofCWC.Thehepatocyteproliferationrate(MrITI')andalanineaminotrans—ferase(A『|T)concentrationincellculturemediumweredetermined.446patientswithchronichepatitisweredividedintoexpefi—mentalgroup(treatedbyCWC)andcontrolgroup(treatedbyHuGanTablets,HGT)randomly.Withphysicalsign,symptomandhepaticfunctionasmainindices,thetherapeuticeffectofCWConpatientswithchronichepatitiswasevaluated.Re—suitsSerumcontainingdrugcouldelevateMTFincrementanddepressAsignificantly.withthebesteffectataconcentrationof10%.Physicalsign,symptomandliverfunctionofpatientsinexperimentalandcontrolgroupswereallimprovedaftertreatment,andthetherapeuticeffectofCWCwassurpassedtheoneofHGT.ConclusionCWChasanobviousprotectiveeffectoninjuredhepatocyteandpossessesanexactlytherapeuticeffectforchronichepatitis.Keywords:CompoundWurenchunCapsula(CWC);Liver—protectiveeffect;Serumpharmacology;Clinicalobservation复方五仁醇胶囊是我院经过长期临床实践而研制的科研制剂(批准文号:苏药制字Z04001984),处方由五味子,柴胡,叶下珠,三七4味中药组成,具有清热解毒,疏肝活血,补益肝肾作用….初步研究结果表明,该制剂能改善慢性肝炎患者症状和体征,降低血清转氨酶j.为了进一步深化开发和推广应用,收稿日期:2008-05-28;修订日期:2008-10-07基金项目:江苏省中医药局中医药科学技术研究专项课题(No.H05173);江苏省南通市社会发展科技计划项目(No.$40006)作者简介:朱浩然(1966一),男(汉族),江苏南通人,现任江苏省南通市第三人民医院副主任中医师,学士学位,主要从事肝病的临床与科研工作.通讯作者简介:罗琳(1976一),女(汉族),江苏南通人,现任南通大学,硕士学位,主要从事药理学教学与科研37-作.?2968?近年来我们在省市多项科研计划的资助下对复方五仁醇胶囊进行了药效物质基础,作用机理,质量控制等较为全面的研究娟J.现将有关药效及临床扩大研究的结果报道如下.1资料与方法1.1实验研究1.1.1材料sD大鼠[SPF级,体重(230?19.8)g,辛6兼用,南通大学实验动物中心提供,许可证号SYKX(苏)2002—0022];羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES,香港FARCO公司,批号IDO24LJO101M21);乙二醇双(2一氨基乙醚)四乙酸(EGTA,美国AMRESCO公司分装,批号0732);胶原酶IV(美国Sigma公司分装,批号0406);胰蛋白酶(美国Sigma公司分装,批号030702);DMEM培养基(美国GIBCO公司,批号1255136);新西兰新生小牛血清(美国HyClone公司,批号DPEO166);溴化3一(4,5一二LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2008VOL.19NO.12时珍国医国药2008年第l9卷第12期甲基噻唑)一2,5一二苯基四氮唑蓝(MTr,AMRESCO公司,批号1324B37);四氯化碳(宜兴市第二化学试剂厂,批号20010608);复方五仁醇胶囊(本院自制,批号050505);HERAceilCO,培养箱(德国GmbH公司);BT一200B数显恒流泵(上海沪西分析仪器厂);BIO—TEK340酶标仪(美国Sigma公司);Et立7170全自动生化分析仪(日本日立公司).1.1.2含药血清,空白血清的制备SD大鼠4只,禁食12h(自由饮水),称重,每天按照4.50ml/kg(相当于成人临床等效剂量的10倍)分两次灌胃复方五仁醇胶囊甲醇提取物的0.5%CMC—Na?昆悬液,连续给药3d.末次给药后2h以3%戊巴比妥钠1.5ml/kg腹腔注射麻醉,颈总动脉取血,置冰箱4?冷藏过夜,分离血清,即为含药血清.SD大鼠每天0.5%CMC—Na4.50ml/kg灌胃,同法制备空白血清.1.1.3肝细胞的分离与培养大鼠用3%戊巴比妥钠1.5ml/kg腹腔注射麻醉,门静脉插管,以37?无钙灌流液(组成:HBSS500ml,HEPES1.19g,EGTA0.095g,NaHCO0.175g,pH7.4)灌流约20rain后,换用37?的通氧胶原酶灌流液(组成:HBSS100ml,HEPES0.238g,CaC10.07g,胶原酶IV0.075g,胰蛋白酶0.O1g,NaHCO0.035g,pH7.4)继续灌流10rain后取下肝脏,剪开肝包膜,将肝细胞悬液过滤清洗后悬浮于含10%新生小牛血清的DMEM培养基中,并用台盼蓝染色法检测细胞活力达90%,以1×10/cm接种于96孔及48孔板中,置CO培养箱(5%CO:)37%培养.1.1.4肝细胞的分组与处理培养24h后,吸弃上清液,随机分成6组(正常组,模型组及5%,10%,20%,40%含药血清组),每组设6个复孑L.模型组和各含药血清组更换为加入CC1lOmmo]/L的DMEM培养液,正常组相应加入DMEM培养基,正常组和模型组加入终浓度为10%的空白血清,5%,10%,20%,40%含药血清组加入含药血清,使终浓度分别为5%,10%,20%和40%.作用24h后,收集48孑L板中培养上清液检测A.96孔板中每孔加入5mg/ml的Mrrr液20l,继续孵育4h,每孔再加入DMSO200Ixl,振荡,使结晶物充分溶解,用酶标仪于检测波长570nm,参比波长655rim测定各孔吸光度(A).1.1.5统计学处理数据以?S表示,使用wstata7.0统计软件包进行统计处理,样本数据比较采用单因素方差分析和Seheffe检验,以P<0.05为显着性判断界值.1.2临床研究1.2.1病例选择与分组随机选取446例慢性乙型肝炎患者,均为我院2001,2006年门诊及住院患者,其中男性328例,女性118例;年龄16—69岁,平均37.4岁;病程1,6年.排除合并其他肝炎病毒感染,无心,脑,肾,内分泌等并发症.诊断符合2000年西安全国病毒性肝炎学术会议制订的诊断标准,选择HBsAg(+),HBeAg(+)或HBV—DNA(+),Ar80,200U/L,SB<35.61xmo]/L.病例随机分成两组,其中治疗组264例,对照组182例.两组在年龄性别病情及病程方面具有可比性(P>0.05).见表1.表1两组患者一般临床资料比较(?s)1.2.2治疗方法治疗组应用复方五仁醇胶囊口服,4粒/次,3次/d.对照组给予护肝片口服,4片/次,3次/d.疗程均为2,4周.1.2.3观察指标临床症状,体征的变化;肝功能(主要观察ALT)指标变化;不良反应.1.2.4统计学处理采用检验和检验.2结果2.1各组合药血清对细胞增殖和上清液中ALT的影响与正常组比较,模型组MTT值显着下降(P<0.O1),上清液中A显着升高(P<0.01),说明造模成功;与模型组比较,各浓度含药血清组MTT值均明显升高(P<0.01或P<0.05),上清液中A均显着下降(P<0.O1);与10%含药血清组比较,20%,40%含药血清组M1Tr值明显下降(P<0.O1或P<0.05),5%含药血清组无显着差异(P>0.05),5%,20%,40%含药血清组上清液中ALT均明显升高(P<0.O1或P<0.05).以上结果说明体系中加入10%的含药血清效果最佳.见表2.表2肝细胞增殖及培养上清液中A测定结果(?s)与正常组比较,P<0.01;与模型组比较,P<0.05,P<0.O1;与10%含药血清组比较,P<0.05,P<0.叭;n=62.2临床症状,体征变化乏力,纳差的消失率治疗组与对照组无显着差异(P>0.05);肝区疼痛,肝脾肿大消失率,治疗组明显优于对照组(P<0.01).见表3.表3临床症状体征消失率比较检验,与对照组比较,P<O.012.3肝功能变化治疗后两组肝功能ALT均显着下降(P<0.01);治疗组明显优于对照组(P<0.05).见表4.表4两组患者治疗前后A变化情况u检验,与治疗前比较,.P<0.01;与对照组比较,P<O.052.4不良反应治疗组极少数患者服药后出现胃部不适,减量或停药后消失,无其他不良反应.对照组未见明显不良反应.3讨论本次药效研究采用的是体外进行的血清药理学方法,该方法由日本学者首先提出.血清药理学研究方法既能防止中药粗制剂本身理化性质对体外实验的干扰,又能反映中药在胃肠道消化吸收,再经生物转化,最后产生药理效应的过程,因此作为中药研究的新思路和新方法而备受推崇u….实验研究结果发现,体系中加入5%,40%的含药血清均具有一定的保护肝细胞免受损伤的作用,但与10%含药血清组比较,20%,40%含药血清组M1丫r值均明显下降(P<0.0l或P<0.05),5%含药血清组虽无统计学差异,但也有下降趋势,5%,20%,40%含药血清组A1Jrr均显着升高(P<0.01),说明在一定范围内体系中含药血清浓度与药效强度之问具有一定量一效关系,但血清浓度超过一定范围药效反而降低,这可能是由于血清浓度过高又会对细胞产生一定的毒性.临床观察结果显示,复方五仁醇胶囊对慢性肝炎的治疗效果,在肝区疼痛,肝脾肿大等体征和症状的消失以及ALT下降等?2969?时珍国医国药2008年第19卷第l2期LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2008VOL.19NO.12方面,均明显优于治疗前(P<0.01),也明显优于对照药护肝片(P<0.05).中医学认为,慢性病毒性肝炎的主要病因是湿热疫毒导致肝脾肾脏腑功能失调,阴阳气血亏损.虚者脾虚,肝肾阴虚,实者湿热,瘀毒多见,为虚实夹杂之症.临床治疗应以补益肝肾,疏肝健脾,活血化瘀,解毒扶正为主法.目前市场上以护肝降酶为主要功效的治疗慢性病毒性肝炎的中成药品种不少,但从病因病机出发兼顾以上几方面治法的不多,特别是兼顾活m化瘀的更少.复方五仁醇胶囊在重用五味子护肝降酶的同时,配伍了叶下珠清热解毒,柴胡疏肝理气;三七活血化瘀.诸药合用共奏标本兼治之效,可能是其疗效突出的主要原因之一.参考文献:,施忠,李伟红,等.复方五仁醇胶囊的研制[J].时珍国医[1]窦志华国药,2005,16(10):953,956[2]达坤林,王陆军,张兵,等.复方五仁醇胶囊治疗慢性乙型肝炎78例I临床疗效观察[J].时珍国医国药,2006,17(5):798[3]窦志华,丁安伟,王陆军,等.复方五仁醇胶囊含药血清指纹图谱研究[J].中国药学杂志,2007,42(12):892.[4][5][6][7][8][9][10][11]窦志华,罗琳,丁安伟,等.复方五仁醇胶囊含药血清指纹图谱与保肝作用的谱效关系[J].第四军医大学,2008,29(2):116.窦志华,丁安伟,居文政,等.复方五仁醇胶囊含药血清中木脂素类成分的UPLC—MS/MS分析[J].中成药,2007,29(4):550.丁安伟,窦志华,王陆军,等.HPLC—ELSD测定复方五仁醇胶囊中三七皂苷Rl,人参皂苷Rgl及Rbl的含量[J].南京中医药大学学报,2007,23(1):4O.窦志华,丁安伟,王陆军,等.复方五仁醇胶囊血清药化学研究[J].中草药,2006,37(8):1137.罗琳,窦志华,丁安伟,等.大鼠灌胃复方五仁醇胶囊后血清和血浆中五味子醇甲和五味子乙素的比较[J].中草药,2006,37(1O):1486.贺玉琢.日本汉方药"血清药理学","血清药化学"的研究概况[J].国外医学?中医中药分册,1998,20(5):3.张红敏,谢春光,陈世伟.含药血清体外药理试验的评价[J].中国中西医结合杂志,2004,24(8):741.5王霖,张云,汪受传.中药血清药理学研究中含药血清添加量问题的商榷[J].山西中医,2006,22(1):51.?学术探讨?不同产地丹参遗传关系的DNA标记分析徐红一,王燕燕,王峥涛,,胡之壁'(1.上海中医药大学中药研究所?中药标准化教育部重点实验室,上海201203;2.上海中药标准化研究中心,上海201203)摘要:目的分析不同产地丹参的遗传背景与遗传关系,为丹参药材的栽培育种提供依据.方法采用RAPD与ISSR标记对4个产地的野生丹参,6个产地的栽培丹参共计5O个样本进行分析,利用分析软件计算遗传相似性,建立遗传聚类图.结果DNA标记共检测了102个位点,多态条带比率(P)为95.10%,栽培丹参的P值高于野生丹参;居群的总遗传变异Ht为0.2389;UPGMA聚类可以将不同来源的丹参很好地区分开来.结论不同产地间的丹参存在丰富的遗传多样性,丹参种质在遗传背景上较为复杂,不同产地的丹参已出现明显的遗传分化,但是与地理分布没有相关性.关键词:丹参;遗传关系;DNA标记中图分类号:R2—03文献标识码:A文章编号:1008-0805(2008)12—2970-03AnalysisofGeneticRelationshipsOfz/amiltiorrhizafromDifferentHabitatsBasedonDNAMolecularMarkersXUHong,WANGYan.yan,WANGZheng.taoll".HUzhi—bi(1.KeyLaboratoryofStandardizationofChineseMedicines0厂Education,InstituteofChineseMateriaMedica.ShanghaiUniversityof0ditionalChineseMedicine,Shanghai201203.China:2.ShanghaiR&DCentreforStandardization0厂ChineseMedicines.Shanghai,201203,China)Abstract:ObjectiveTostudythegeneticbackgroundandrelationshipofSalviamiltiorrhizaefromdifferentpopulation,andpro—videreferencefortheseedselectionandcultivation.MethodsGeneticrelationshipoftotal4wildpopulationsand6cultivatedpopulationsofS.miltiorrhizaewereinvestigatedbyISSRandRAPDanalysis,thegeneticidentitywasanalyzedbysoftwarePoD—gene3.2andtheDNAmoleculardendrogramwassetupbythesoftwareNTSYSpc2.1.ResultsAtotalof102markerswith95.10%polymorphicloci(P)werescored,andthenumberofPamongcultivationpopulationwashigherthanthatofwildpopu—lation.TheNei?genediversityindex(Ht)was0.2389,andthedendrogramfromtheClusteringofUPGMAshowedthegoodclassificationofallpopulations.ConclusionS.miltiorrhizaefromdifferentpopulationshowsabundantgeneticdiversities.andtheirgeneticbackgroundarecomplex.ThereareobviousgeneticdifferentiationsamongdifferentS.miltiorrhizae,butthegeneticrelationshipsdidnotshowcoherentwithgeographicaldistribution.Keywords:Salviamiltione;Geneticrelationship;DNAnolecularmarkers收稿日期:2008-07-01;修订日期:2008—10—15基金项目:上海市教育委员会科研项目(No.04CB06):上海市科委中药现代化科技专项项目(No.03DZ19546);上海市重点学科建设项目资助(No.Y0301)作者简介:徐红(1966一),女(汉族),陕西汉中人,现任上海中医药大学中药研究所副研究员,博士学位,主要从事生药学领域的科研工作.通讯作者简介:王峥涛(1956一),男(汉族),辽宁朝阳人,现任上海中医药大学中药研究所教授,博士学位,主要从事中药活性成分与质量标准研究工作.?2970?丹参SalviamiltiorrhizaBge.为唇形科多年生草本植物,具有活血化瘀,消肿止痛,养心安神等功效,常被用于单方,成药,保健品及化妆品,是我国重要出15大宗药材之一.近年来,随着野生资源的减少,野生丹参已远远不能满足临床用药需求,全国许多地区开始栽培丹参,目前栽培品成为丹参的主要来源.但是由于丹参分布范围广,各栽培地区种源来源不同,以及长期无性繁殖导致的品种退化,给丹参的栽培和育种工作造成困难,同时也严