凝血酶—抗凝血酶Ⅲ复合物的研究及临床意义

凝血酶—抗凝血酶Ⅲ复合物的研究及临床意义 凝血酶—抗凝血酶?复合物的研究及临床 意义 国外医学输血盈血藏学分册1999年第l5眷第l期 清除率从373.9分缩短到204.6分,微血蕾出血时 阗从83.4秒延长到226.0秒}第二组动牺-l-白 蛋白清除率延长到433分I第三组动物-”‘I一白蛋 白清除率芷常,徽血蕾出血时间正常.由此可见,Ds 具有保护血管壁的作用-并能使血浆白蛋白通透性 下降. 三,结语 综上.DS通过HC-l催化抑翻凝血酶,阻止静 参考 E1]Do=F.Bloodi989I74ji577 [2]mwJ.ThrombHaemcsti989I62{945 :3]0f?uFAAnnNYAcadSei1999’556|123 [|]F~nand电F.BTitishJHaematoJ1996;64:909 [5]R一McKenn~JV.AnnNYAcadSci1989;556,304 [6]uLIyMF.ThrombHaemost1989;62{511 [7]wal~.IMThrornblqaern~t1989;62{517 ]0f?uFAsema”thumbHaemm6ti988I14{9 [9]McK~naVR.Tt~ombHaemost1987I5817 ? 9? 脉血栓形成,抑制已存在血栓上的奸维蛋白增长,诱 导血警内皮细胞释放$-PA-增加钎涪作用,与uF?H 厦LMWH之间具有抗凝活性的协同作用-出血副 作用小.因此,Ds棱认为是一种新型的,不同干uF— H的,有效的抗血栓药,有可能会成为临床上有效的 抗血栓药.但Ds的抗血挂机理尚束阐明-例如在 体内作用的主要部位还不清,是内皮细胞面还是 在血液中+或两者兼有还知道,有待进一步探索和 研究. 文献 口1]MertonRE.ThrombHaern,~l”i987I58:839 [10]M嚣jA.Haemostasis1997I17:329 [19]HoplgenstcadlD.ThrobHaerT瞄l1989~62l905 [i4]朱广瑾.中国医学科学院1989:l0:9 [15]PaquEP,ThtombResL996{42l79 [16]Andfads-GordonP.Bd-cm1996{254033 [17]MussoniLAnnNYACadseli989:556t465 [18]Hoppenst~adlD.ThrombHae~tj989I62|407 [19]B丑sk_MickM.”~hrombHaemcst1999;62j521 , 凝血酶一抗凝血酶?复合物 ,/的研究及临床意义 皖南医学院盟垦堡综述文尚武唐甘超审校R,ff 摘要在血寝凝固与杭凝过程申.凝血酶与抗凝血酶l(ATI)毗一定雌尔浓度结台:生成酰 基若侪键结合的凝血醇?抗凝血酶l复合物(Thrembin-antithrombin, 下AT复台物).设复合物的生成 量与生成率可能是体内抗凝,凝血物质活化的标志.目前常啦EL1SA法检测血浆TAT复合物音 量+其敏感性爱特异性均较好.请项指标有益干检测血栓形成,对抗凝爰溶桂疗数观察具甫重要作 用,对DIC的诊断较准确-且恶性肿瘤苷患者血浆TAT复告物含量均显着增高. TAT复合物系血液凝固与抗凝的矛盾产物.体 内TAT复合物的演变过程与出凝血机制密切相关- 渡项指标可望成为某些出凝血疾病的敏感参数.本 文就近年该方面的研究简述如下. 一 ,TAT复合物的形成机理 在生理或病理状态下-凝血酶原分子中的肽链 嵌次棱切断-或多或少产生由二硫键连接的A链及 B链,即凝血酶.其中A链的N端发生水解,变成 B_凝血酶和Y一凝血酵,最终失去凝血活性.而ATI 却另辟途径以1t1摩尔与凝血蘸结合,生成酰基若 价健结合的TAT复合物,使凝血酶失活. Olson辱提出肝衰可隧通过,系列的反应而加 速A下I与凝血酶结台.该过程主要分二步,先形成 一 种ATI一肝索复合物,后形成ATI-肝索-凝血酶 三元复合物,紧接着由于肝素解离而形成不可逆的 TAT复合物.Timothy等进一步发现+肝素与ATI 表面的结合残基结台,弓【起AT1分子异构化-一旦 反应完毕,AT1分子内部凝血酶结台基团充分显 露州-当与凝血酶结时,其分子内精氪酸(393)丝 氮酸(394)结合基先棱凝血酶水解.然后精氨酸残基 与凝血酶的活性丝宴【酸残基发生酰化反应+生成酰 基共价键TAT复合物 TAT复合钳的形成受ATI,凝血酶的摩尔浓 度影响,而不依赣其绝对浓度J,在一定范围内凝血 酶活性与NaC1浓度成正比+当pH值变的结速度靠于凝血酶与ATI 之间I 认为TAT复台物水平可能反应ATl,凝血酶与内 皮细胞的相互作用Klaus等认为TAT复台物与 蛋自S(PS)具有高度亲和力.可形成S-TAT复台 物.在血栓形成过程中.Ps的作用如同肝素中和固 子,可结合到起蛄形成的TAT复台物上.对凝血酶 固AT?作用的失活起一定保护作用,虽然TAT 复合物生成增加并非单一困凝血酶的结台及活性增 强所引起.但TAT复台物生成量奠生成率不失为体 内凝血与抗凝物质活他的标志 【989年Asakura等研制了一种抗TAT中ATI 重链部分的单克隆抗(McAb).并将此什McAD与 ATl,凝血酶一起孵育.发现该McAb可艇使稳定 酰基复台物形成的主要选径变成具有选择竞争性逾 径,因而可以启动TAT复台物内部的酰基脱酰基作 用’.探入研究发现该种MeAD与TATCNBr片段 相互作用的抗原决定簇位于高疏水性残段382— 3,86肽片段(含丙氨酸一丙氨酸一丙氨酸4氩酸一苏氨 酸),其中丙氨酸靠近C端虽然该特定区域是AT l的作用部位.但是反应早期也可能显露与抗体相 互作用的位点当该位点或靠近该位点区域发生变 化时,即可促进AT11被凝血酶水解”谊项研究有 益于阐明TAT复合物的分子生物学特性 三,TAT复台物的检澜 血浆TAT复合物的正常值各家报道稍有差异- 多认为与学有关.pelzer等ELISA法柱 测血浆TAT复合物含量.发现灵敏性硬特异性较 好所用抗凝血酶及ATI抗体均”高纯他的凝血 酶,ATI于家免体内获得.该方法基于适当浓度的 抗体与TAT复占物上相应抗原结:含TAT复台 物的标本与包被的抗凝血酶抗体孵育.洗板后加入 辣根过氧化酶标记的抗AT?抗体,标记的酶活性由 邻苯二艘发色TAT复台物品制备I.2mg的 纯化凝血酶(特异结台活性t3n.r/ps,加入纯化 AT’I】00IU,与肝素(2IU/ml共同孵育后经层析法 国外医学输血压血液学井珊1992年第l5巷第l期 提纯…Katalin等则20008凝血酶与70ugAT? 混台后,加入0.IM硫酸盐厦肝素(0.05~g/m]).在 DH由7.4.反应总体积为300.1的条件下.22C孵育 5分钟I游离凝栓(DVT)患者血浆TAT夏合物占 量显着增高.认为TAT复台物可能成为血栓形成的 敏感参数Seitz等报道I5倒PE及I6例DVT也 者血浆TAT复物含量均显着增高.证实该项指标 有益于拉测血栓形成同时发现9例急性心肌梗塞 患者链激酶(SKJ治疗后与7倒DVT患尿瀚酶 <UK)治疗后TAT复台物维度均显着增高.且与纤 维蛋自肽片段水平呈正相关相反.8例此娄患者月F 索治疗后.TAT复台物浓度无显苦改变.体外宾 验证实.SK,UK的作用与TAT复台物形成有关.即 该娄药物的清洗”使冠壮动脉再通.梗塞的心肌再 灌注.导致凝血酶解离,释放该结果预示TeXT复 物对抗凝及溶栓疗效的观察具有重要作用.亦有 文献报道DVT患者初诊时TAT复台物浓度显着增 高.而于血栓形成一周后显着下降..基指标最适 于早期诊断.14j 2TAT复台物与DICI938年Hoek等垃现 DIC患者血浆TAT复台物浓度与AT?.围于V,F 维蛋自原舍量呈显着正相关.而与BPC,FDP间来 见存在直线相关关系.认为TAT复物检测对DIC 谚断较准确.敏感牲由嬲.特异性为63,阳性诊 断率为70.阴性诊断率为88LIZj.Asakura等对 0例急性早幼粒细胞性自血病(APL)引起的DIC与 其它血液病引起的DIC分别进行研究-发现两组 DIC患者血浆TAT含量均较正常组显着增高.且 ApL组DIC患者TAT复物含量较其它疾病组 DIC患者显着增高.APL组血浆TAT复物水平与 其纤维蛋白成反比-与Ltz-纤溶酶抑制物一纤洁酶复 合物(咄P卜P复台物,成正比,与ATl之间未见存在 线性相关这一现象APL所致DIC主要是由于 兰f溶作用增强所引起可见综台评价TAT复 国外医学输血丑血}匿学丹册1992年第l5巷第l期 物有助于探讨不同类型DIC的发生机理. 3.TAT复台蜘与其它疾痫有作者报道肝功 能衰竭,畋血症伴发的消耗性凝血病,恶性肿瘤患者 血浆TAT复合物浓度显着增高”也有作者报遭 心源性休克患者血浆TAT复合物水平升高 B~kov等认为肾病综合征患者凝血酶产生过多将导 致TAT复合物的生成增加t即肾病综合征患者血浆 ? ll? TAT复台物含量增高与凝血酶形成过剩有关一同时 俘发AT1水平降低?j另有文献报道外科手术后 某些患者血浆TAT复占物岔量显着增高,但这种增 高的发生机制尚缺乏统一认识L_ 总之,开展TAT复台物的研究有助于进一步探 讨止血与血栓的发生机制,对临床工作具有一定的 推动作用. 参考文献 [1]TimolR,ela1.JBiolm1988I263:2187[儿]Pe~etH,elaI.ThrombResl986i Suppl一51 [2]DHw靠J,eta1.ThrombRl884l36:397[12]H~kJA,eta1.CJm0l亡 ml888{34:2058 [3]haG,elLThrobRes1987;46}283[13]AsakulaH.eleJ.ThTombRl938I50: 8(J5 [4haG.etLTbrombRes1989;54:225l4]KnollexS,elaI_ThrombHaem~tasl8 87l53:425 [5]Kalal[~B,a1.ThrombR苗l987}47:511[15]PelzcrH一 al,ThrombHaem~raslU87;58:237 [0]H~zosv.eta1.JAinMed】989;87—38一 l0S[16]Se/tzRR,elalThrombHaem~tasl887f58:7 [7]Kb岫 TP,etal,Bi0chemJ1987I243;195[17]EgbYJn8R,eta1.Tb~ombHaem~las19 87I58:385 [8]JohnTB,a1.ThTombRes1988}5l:187[18]~kovGV—etal,Fd?He 『’E?1088{ll5:82{ [8]Asakuras,etaI.JBioICbem1989I264:18736C】 9]FlarryR,it[JAmMedl889;87—88—44S :一一血BlolC友hem细1999i2,锄揿,圻一血友杓,p,舭,1,,巧 血友病甲的DA重组技术:携带者检测和产前诊断 ,f;mS,杨仁R付 血友病甲的基本缺陷是血浆园子?(F?1缺 乏.I984年报道人F?的第一十cDNA和DNA基 因组克隆,这促进了血友病甲分子机理研究的迅速 发展.I985年,FVi的第一个基周内限制性片段长度 多态性(RFLP)标志镀描述井用于携带者检测椰产 前诊断重组人F?也于J987年首趺输给患者本 文拟简述血友病甲的遗传学.着重阐述DNA重组技 术在血友病甲中的虚用 血友病甲的遗传学 血友病甲的患病率约为【00/【O,按患者血浆 中残留的FVI活性(F?cc1将其分为重型(<I), 中型(1—5)和轻型(5—3O)本病的诊断一般嵌 据常规凝血试验(家族史明确者尤其如此).但约有 l/3的患者无家族史.这可能是瘸史不清所致,而其 中大部分是由于患者的母亲或更早的祖辈的x染 色体突变所致. 男性血友病甲患者的女性亲属可能带有突变的 F1?等位基因,应识别这种携带者,以便她『f]对后代 患病的危险性进行咨询.在F?基因和eDNA披克 隆之前.携带者检铡靠血浆F’vItC或抗原(F?t Ag)水平的测定.但F?-C水平并不毙可靠地预测 携带者.可能是有一些等{豇基固产生不同量的正常 FX2I和不连锁基固影响血浆F?浓度女性的FlI水 平变化很大.因选择性x染色体击活有很太差异 炎症,应激,运动和妊娠能显着影响F?水平,且测 定方法本身也不精确采用vWF测定.有时还包插 患者血型和年龄等指标进行综台判定的方法比仅用 Fli:C水平的预测价值高.但用此法仍有6—20 的妇女可被误分为正常人或携带者.DNA重组技术 可作为携带者检测的一种补充.f口非常可靠的方法 DNA重组技术在皿友病甲中的应用 Ftl基因约有I86kb的DNA.包括261,外显子 和25十内含子.定位于x染邑体长臂的Xq2g已 发现许多F?基固的点突变,敞失和插入用限制酶 TaqI酶切DNA基因组并用cDNA探针进行Sotlth~ el’H印迹,结果表明约l0的患者有点突变或缺戋 几乎所有已知的点突变均囤Taq[位点的丢击而筏 识别该限制酶识别井裂解TCGA序列,后者含有 一 十CG二接苷酸在人基因蛆DNA中-CG二’障苷 酸中胞嘧嚏残基常常甲基化.5L甲基脆嘧啶可脱氰 形成胸腺嘧嚏.结果发生CG~I”G转换而破坏TaqI 的识别序列并导致F’VI基因的错义或无义突变