小鼠脾脏树突细胞的免疫刺激作用

小鼠脾脏树突细胞的免疫刺激作用 () 【摘要】 ?目的 探讨小鼠脾脏树突细胞 的免疫刺激作用。 ?方法 以 作为刺激细胞, 淋巴细胞 D C D C T () 作为反应细胞, 检测同种混合淋巴细胞反应 。 ?结果 的免疫刺激作用比巨噬细胞显著增高, 差异有显M L R D C ) ( 著意义 ′= 29. 5, 48. 7, P < 0. 001; D C 刺激 T 细胞对氧化物丝裂原 N a IO 的增殖反应比巨噬细胞有显著增强 t4 ( )′= 46. 3, < 0. 001。 ?结论 具有较强的免疫刺激作用。 tP D C 【关键词】 树突细胞; 巨噬细胞; 淋巴细胞, 增殖; 小鼠T 中国图书馆分类法分类号 392. 12R D ep a r tm en t o f IMM UNE ST IM UL A TO RY EFFECT O F M UR INE SPL EN IC D END R IT IC CELL S X u e J ing bo, L iu X iy ing , , 266021Imm uno lo gyQ ingdao M ed ica l Co llegeQ ingdao ()【】 . A BSTRACTO bj ec t ive T o study th e imm une st im u la to ry effec t o f m u r ine sp len ic dend r it ic ce lls D C M e th od s W ith (), . D C a s st im u la to ry ce ll and T ce ll a s reac t ive ce llsto induce th e m ixed lym p ho cy te reac t io n M L R R esu lts T h e st im u la to ry ( ) ′= 29. 5- 48. 7, < 0. 001; effec t o f D C w a s sign if ican t ly h igh e r th an th a t o f m ac rop h age in p r im a ry m ixed lym p ho cy te reac t io n tP ( ′= 46. 3,T h e p ro life ra t io n reac t io n o f T ce ll st im u la ted by D C to m ito gen N a IO 4 w a s m uch st ro nge r th an th a t o f m ac rop h age t)< 0. 001. .P C on c lus ion D C po sse sse s a po ten t imm une st im u la to ry effec t 【】 ; ; , ; KEY WO RD Sdend r it ic ce llm ac rop h age sT lym p ho cy tep ro life ra t io nm ice () 1. 072ƒ的 分 离 液 上然后加在密度为 机体的免疫应答首先是抗原递呈细胞 捕 k gL P e rco ll A PC ( )获并加工处理抗原, 然后将抗原信息传递给 淋 , 作连续密度梯度离心分离 25800吸 ƒ. T B m in rm in 1. 072密度液界面上的低密度层细胞。 用磷 ƒ巴细胞, 从而引发一系列的特异性免疫应答。 因此, k g L 是引起免疫应答的首要环节。 近年来发现, 树 盐缓冲液洗 2 次, 1 000离心 5. 细胞重 ƒA PC rm in m in 〔1〕() () 突细胞 是一种抗原递呈细胞。由于 的分于 21640 内含体积分数为 0. 05 的 ,D C D C R PM IN BC S 10 () 离纯化较困难, 所以国内有关 的研究并不多见。 D C 胞浓度 1, 2〓10接种于 9塑料平皿上,ƒ, L cm 本文从小鼠脾脏经多步骤分离纯化 与巨噬细 37?, 体积分数为 0. 05 的 条件下培养 2. 去 , D C CO 2 h ( 胞比较其功能, 初步探讨了 的免疫刺激作用。非 黏附细胞, 黏附细胞重新加入 21640 内 D C R PM I ) 体积分数为 0. 1 的 过夜培养。仍然黏附的N BC S 1 材料与方法 胞是巨噬细胞。脱落细胞用前法再次黏附, 收集非 1. 1 动物选择附细胞, 即为 . D C 2 小鼠, 576 小鼠, 均为雌性, 体质量1. 4 小鼠脾脏 细胞的提纯 按 文献〔3〕方法提ƒƒDBA C BL T ( )18, 20, 由中国医学科学院实验动物中心提供。取 细胞, 然后在 3, 5g T 9 1. 2 仪器与试剂10细胞悬液中加入抗 单抗和新鲜的豚鼠血ƒL Ia ) ( 系 公 司 产 品; , P e rco ll P h a rac ia M itom yc in 补体, 在 37?下温育 1h , 用大量的 PB S 洗 3 次 ( 系 公司产品; 抗 单克隆抗体系华美N a IO 4 S igm a Ia 最后将纯化的 T 细胞悬浮于 R PM I21640 内含体 ) 公司产品; 21640 由 公 司 生 产; 新 生 小 分数为 0. 1 的 培养液中。R PM IG ib co N BC S 3() () 牛血清 由天津生化制药厂生产; 2由 1. 5 混合淋巴细胞反应 的测定 N BC SH U dR M L R ( ƒ2 小鼠脾脏 和巨噬细胞 均用丝裂中国科学院原子能研究所提供。液闪仪系 DBA D C B echm an 素 预处理 30, 然后用 洗 3 次 25ƒ公司产品。C m g L m in PB S 为刺激细胞, 57ƒ6 小鼠的脾脏 细胞为反应 1. 3 和巨噬细胞的分离与纯化C BL T D C 胞。测定按文献〔3〕的方法进行。按 文 献〔2 〕的 方 法。 将 2 小 鼠 脾 细 胞ƒM L R DBA 11 () 10悬浮于密度为 1. 032的 液中,1. 6 刺激的 细胞增殖反应及测定ƒƒL k gL P e rco ll N a IO 4 T 按文献〔4〕的方法进行。( ) 作者单位 青岛医学院 青岛 2660211 免疫学教研室 2 微生物学教研室 1. 7 统计学处理 θ 实验结果以 〒示, 组间比较采用 ′检验。 少。随着分子生物学、分子免疫学等理论和技术的发xs t 展, 近年来克隆和表达了许多细胞因子, 使 能在 D C 2 结果 体外大量扩增。的研究逐渐成为免疫学研究中D C 2. 1 在中的刺激作用 D C M L R 一个不断升温的热点。 8 ( 2 〓10ƒ细胞和不同 ƒ反应细胞ƒ刺激 本文采用多步骤从小鼠脾细胞分离纯化 ,L T R S D C ) 细 胞比值的 或巨噬细胞作 试验于 72研究其刺激同种初级结果表明, 在此反 , . D C M L R h M L RD C (()) 终止。结果显示, 在 ƒ值为 1?8, 1?64的各 应中的作用, 要远远强于巨噬细胞的作用。 并且, 在 R S ( 组 间, 的 刺 激 作 用 较 巨 噬 细 胞 显 著 增 强 ′=氧化物丝裂原诱导的 淋巴细胞增殖反应中, 也需 D C t T )要 的辅助作用, 而 的刺激作用明显强于巨 29. 5, 48. 7, < 0. 001。 见表 1.A PC D C P - 1 噬细胞的作用。 从一个侧面反映了 是机体免疫 D C θ()刺激 细胞的增殖作用 , ? ƒD C T f m in x s 表 1 应答中最强有力的免疫刺激细胞。 R ƒS 组别 n 体内外研究表明, 成熟 高表达, I ?D C M H C 1?8 1?16 1?32 1?64 类分子, 同时提供充分的协同刺激信号, 在与 细T 6 436〒 1 2 173〒 5 161〒1 3 巨噬细胞 112〒 1 5 3 3 33胞结合后而强烈激活 细胞。 另外, 在体外经抗原T 树突细胞4 237〒9836 15 337〒1 64313 455〒1 2558 849〒821 致敏的 或抗原基因转染的 回输或免疫接种, D C D C 3 与巨噬细胞比, 较′= 29. , 54 8. 7, < 0.00 1 tP 至荷瘤小鼠体内, 能显著诱导机体产生抗原特异性2. 2 刺激 细胞对 的增殖作用D C T N a IO 4 〔6〕 进行肿瘤免疫治疗。, C TL 细胞对 作用的增殖反应也需要刺激 T N a IO 4 有关 体内游走、选择性趋化、抗原递呈、激 D C 细胞的作用。 在 48时, 测定增殖反应。 结果显示,h 发免疫应答的分子机制是一崭新的研究领域, 深入 巨噬细胞仅有微弱的增殖作用, 而 D C 则有明显的 认识其作用不仅有助于了解机体免疫应答的调控机( 增殖反应, 二者比较差异有极显著性 = 46. 3,