Cyclin D1及p16在肥大乳房腺体组织中表达及意义

Cyclin D1及p16在肥大乳房腺体组织中表达及意义 Cyclin D1及p16在肥大乳房腺体组织中表 达及意义 [摘要]目的:探讨CyclinD1以及p16蛋白在肥大乳房乳腺组织中的表达及意义。方法:采用免疫组化SP法,检测35例肥大乳房及16例正常体积乳房乳腺组织中cyclinD1及p16蛋白的表达情况及相互联系。结果:35例肥大乳房腺体组织中CyclinD1蛋白阳性表达率51.4%(18/35),16例正常体积乳房标本腺体组织中无一例CyclinD1呈阳性表达(0/16),两组间比较差异有统计学意义(P 1.1.4 正常对照组患者应行病理诊断确诊为正常腺体组织,排除其他病变,回避月经期。术前必须征得患者同意。 1.2 标本来源及分组:所有病例均来自2007年9月,2009年3月间,武汉市协和医院收治的要求行乳房缩小整形术的患者。以及同期收治的乳房体积在正常范围(250,350ml)的行其他乳房手术患者。 1.2.1 肥大乳房组:共35例,年龄13,37岁,平均年龄 1 22.3岁,乳房体积平均值为(852.33?144.20)ml。根据年龄段 分为三组:13,20岁,21,30岁,31,37岁。 1.2.2 正常发育乳房组:共16例,年龄15,41岁,平均年龄24岁,乳房平均体积为(261.32?16.51)ml。 两对照组的年龄无统计学差异。 1.3 实验方法及判断标准 1.3.1免疫组织化学染色:采用SP法,主要步骤为:二甲苯脱蜡、梯度酒精脱水, 高压组织抗原修复,正常山羊血清37?封闭,滴加羊兔一抗(KIT-0305,羊抗鼠/兔,迈新生物)4?冰箱孵育过夜,次日分别滴加二抗(Rabbit Anti-Cyclin D1(RMA-0541,福州迈新),P16(Mab20070710,远泰生物),DAB显色10,15min,苏木素复染胞核,脱水透明并用中性树胶封片。 1.3.2CD1染色的诊断标准[5]:cyclinD1蛋白表达定位于胞核,胞核呈黄色或棕黄色颗粒着色为阳性细胞,染色结果在高倍镜下,每例中随机选择十个视野,每个视野中细胞数不少于500个细胞,利用光密度仪来检测阳性细胞的百分率。若细胞的阳性率>10%为阳性表达(+),>50%为强阳性表达(++)。 1.3.3P16染色的诊断标准[6]:p16蛋白在胞质中的反应性可以被忽略,唯有在胞质背景中的细胞核染色才认为是p16蛋白的表达的证据,染色结果在高倍镜下,每例样本中随机选 2 择十个视野,每个视野中细胞数不少于500个细胞,利用光密度分析仪来检测阳性细胞的百分率。若细胞的阳性率>10%为阳性表达(+),10%则说明该样本阳性表达,>50%为强阳性表达,10%为阳性表达(+)(图5), CyclinD1与 p16二者的动态平衡是细胞保持正常增殖的一个重要保证, CyclinD1的高表达,p16的缺失或失活都将直接导致细胞发生癌变。研究表明, Cyclin Dl的过量表达和p16的缺失,在多种肿瘤细胞中是同时发生的。王强修等[19]在胃癌组织中发现Cyclin Dl高表达和p16蛋白低表达多同时存在。国外有学者[20]将抗 Cyclin D1抗体和 p16蛋白共同注射至正常的成纤维细胞,比单独注射上述两种蛋白造成的生长抑制更明显。提示这两种异常相联合,使肿瘤细胞获得更大的生长优势。其次在瘢痕,血管瘤等病变中也存在着二者的异常改变。 目前,国内外大多数研究侧重于研究CyclinD1及p16在乳腺肿瘤组织中的表达及临床意义,但对其在乳房肥大中的作用及机制报道甚少。本研究发现,在肥大乳房腺体组织中,同样存在着CyclinD1蛋白的高表达以及p16蛋白的低表达,这种异常表达与年龄分组无相关性,但是,CyclinD1的高表达 3 与p16的低表达之间存在着相关性,说明这两种异常改变同时是乳房肥大的发病因素,且二者存在着某种影响关系。这一结果与Tekeuchid等[21]的研究结果相同。 根据本课题组已有的研究结果,在乳房肥大乳腺组织中,雌激素受体[4]、芳香化酶[22]、表皮细胞生长因子[23]、雌激素受体相关受体[24]等均有表达的异常,但它们之间是否存在联系还有待进一步探究。CyclinD1和p16是细胞增殖周期中重要的分子,二者是许多信号传导通路的关键环节,乳房肥大的发病机制中存在那种信号通路的异常?在遗传学方向,肥大乳房的患者是否存在基因的变异,这些基因变异与临床表现之间有何联系?据已有的研究结果,在乳腺癌和肥大乳房中均存在CyclinD1的异常表达,但至今还没有相关研究明确显示二者之间有何区别。这些问题都有待于进一步的探索。 综上所述,在肥大乳房腺体导管上皮中,CyclinD1蛋白呈高表达,p16蛋白呈低表达,二者的异常变化具有负相关性,共同参与了肥大乳房的发生和发展。本研究在分子水平对乳房肥大的发病机制进行研究,研究结果对今后对乳房肥大的新治疗方法的研究具有重要的指导意义。但本研究仅仅在蛋白水平测试了CyclinD1和p16的异常,并没有在基因水平对其进行验证,需要相关研究进一步证实。 [参考文献] [1]Stuart-Harris R,Caldas C,Pinder SE,et al. 4 Proliferation markers and survival in early breast cancer: a systematic review and meta-analysis of 85 studies in 32,825 patients[J]. 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