HPLC法测定茵栀黄软胶囊的含量

HPLC法测定茵栀黄软胶囊的含量 安徽医药AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal2008Apr;12(4)'313' HPLC法测定茵栀黄软胶囊的含量 鲁晓蓉,桂双英 (1.安徽中医学院药学院,安徽省中药研究与开发重点实验室;2,安徽省标准化研究 院,安徽合肥230001) 摘要:目的建立茵栀黄软胶囊中黄芩苷的含量测定. 方法采用高效液相色谱法,VP—ODS250L×4.6 (SHIMADZU)为色谱柱,流动相:甲醇-0.4%(v/v)磷酸(45 :55).结果黄芩苷在0.2—1.2g范围内呈良好的线性关 系,4=10000000C一29312,r=0.9996,回收率为99.47%. 结论本方法快捷,简便,准确,重复性好. 关键词:茵栀黄软胶曩;含量测定;黄芩苷;HPLC法 茵栀黄软胶囊为茵栀黄VI服液的改剂型品种,具有清热 解毒,利湿退黄的功能,用于湿热毒邪内蕴所致急性,迁延性, 慢性肝炎和重症肝炎(I型)和其他型重症肝炎的综合治疗. 本文参照中国药典…收载的十个含有黄芩的成方制剂品种, 制订了茵栀黄软胶囊中黄芩苷的含量测定方法. 1材料与方法 1.1仪器与试剂LC一10AT型液相色谱仪主机,SPD一10A型 紫外检测器(SHIMADZU);高效液相色谱柱:VP—ODS250L× 4.6(SHIMADZU);FA1004电子天平(上海精密科学天平仪器 一 1 >1 量1 一】 O151Ol5 图1对照品 厂):SB2200T型超声波清洗器(上海奥特赛恩斯仪器公司); 黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号:0715— 200010,供含量测定用);磷酸(中国医药上海化学试剂站,AR 级);甲醇为色谱纯,水为双蒸水.茵栀黄软胶囊和阴性对照 样品由安徽大东方药业有限责任公司提供. 1,2色谱条件的选择流动相:甲醇-0.4%(v/v)磷酸(45 :55);流速:1.0ml?rain,;检测波长:277.6nm;进样量: 10l. 1.3对照品溶液的制备精密称取黄芩苷对照品6mg,置 100ml量瓶中,加70%甲醇80ml,超声溶解,放冷至室温,加 70%甲醇稀释至刻度,摇匀即得(每1ml含黄芩苷60g). 1.4供试品溶液的制备取内容物0.35g,精密称定,置100 m1量瓶中,加70%甲醇约6om1,振摇,置70~C水浴加热溶解, 放冷至室温,加70%甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液, 精密量取续滤液5m1,置50m1量瓶中,加70%甲醇稀释至刻 度,摇匀,用微孔滤膜(0.45m)滤过即可(见图1,2,3). 图2供试品图3阴性对照 2结果 2.1空白试验取缺味黄芩阴性对照样品,依1.4项方法操 作配制溶液,进行液相色谱,结果显示其它成分对黄芩苷 测定无干扰. 2.2线性关系考察精密吸取黄芩苷对照品溶液(每1ml 中含黄芩苷20,40,60,80,120txg)各10l,分别注入液相色 谱仪中,测定色谱峰面积.以黄芩苷对照品进样量c(g)为 横坐标,相应色谱峰面积4为纵坐标绘制标准曲线,得回归方 程为A=100O0000C一29312,r=0.9996,结果表明黄芩苷 在0.2—1.2g范围内呈良好的线性关系. 2.3稳定性试验取供试品液进样测定,并每隔2h重复进 样测定一次,持续24h,结果RSD为0.74%,结果表明样品溶 液24h内稳定性良好. 2,4进样精密度试验取供试品液连续进样5次,测定黄芩 苷峰面积,结果黄芩苷峰面积分别为5771548,5780735,5, 5803473,5,5749030,5,5769185,5,平均峰面积为5774794,2, RSD为0.11%; 2.5重现性试验取同一批号的茵栀黄软胶囊内容物,按 1,4项方法操作,测定,重复操作测定5次,结果RSD为 1,34%.表明该法精密度良好. 2,6回收率试验采用加样回收法,取已知含量的同一批号 样品6份,分别精密加入一定量的黄芩苷对照品,依法操作进 样测定,测得黄芩苷的平均回收率为99.47%,RSD为 1.05%,结果见表1. 表1回收率试验结果 试验号已知量/mg加入量/mg测得量/mg回收率/% 14.3】204.43258.667499.12 25.O6034.728l9.69l】99.0O 34.98084.92559.984010O.78 44.35895.02439.45201OO.73 54.55725.12259.577298.94 64.43125.14319.405198.23 2.7样品含量测定经对10批样品进行含量测定,则每粒 黄芩苷含量分别为95.71,94.33,98.14,95.58,94.76,95.86, 94.23,94.13,96.13,92.97mg,黄芩苷的平均含量为每粒 95,18mg,RSD为1,5%. 3讨论 资料显示,茵栀黄相关制剂的质量检测均以黄芩苷 为其指标性成分,茵栀黄颗粒和胶囊中的黄芩苷采用HPLC 法测定.结合本品剂型特点以及黄芩苷的理化性质,本研究 采用HPLC法测定黄芩苷作为茵栀黄软胶囊的质量控制方 法.本品为中药提取物均匀分散在油性基质的混悬液,样品 的提取纯化除杂是关键,本研究根据对处方中各味药及辅料 的理化性质及成分分析的了解,经多次试验,最后确定了样品 ? 314?安徽医药AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal2008Apr;12(4) HPLC法测定明目地黄丸中芍药苷的含量 程合理 (安徽医科大学第一附属医院药剂科,安徽合肥230022) 摘要:目的采用高效液相色谱法测定明日地黄丸中芍药苷的含量.方法高效液相色 谱法,HypersilC.色谱柱(4.6mm× 250mm,5tzm),流动相:乙腈.05mol?L磷酸二氢钾溶液(12:88),检测波长:230am,流 速:1.0ml?min,;结果芍药苷 在0.2032—1.0160g范围内有良好的线性关系,r=0.9997(n:5),平均回收率为97.18%. 结论该方法简便,准确,可用于 明目地黄丸的质量控制. 关键词:高效液相色谱法;明目地黄丸;芍药苷 DeterminationofpaeoniflorininmingmudihuangpillsbyHPLC CHENGHe.1i (DepartmentofPharmacy,TheFirstAffiliatedHospitalofAnhuiMedicalUniversity.Hefei2 30022,China) Abstract:AimTodeterminePaeoniflorininMingmuDihuangPillbyHPLC.MethodsHPLC wasusedinthequantitativeanalysisof Paeoniflorininthesample.TheseparationwasperformedonHypersilCl8(4.6mm× 250mm,5tzm)columnwithamixtureofacetoni— trile-0.05mol'Lpotassiumdihydrogenphosphate(12:88)asmobilephase.Thedetectionwa velengthwassetat230nmandtheflow rateWas1.0ml?min,.ResultsThestandardcurvewaslinearintherangeof0.2032— 1.0160gforPaeoniflorin(r=0.9997,n= 5).TheaveragerecoveryWas97.18%.ConclusionThemethodissimple,reliable,andisagoo dmethodforPaeonitlorin. Keywords:HPLC;mingmudihuangpills;paeoniflorin 明目地黄丸是由枸杞子,菊花,熟地黄,山茱萸(制),牡 丹皮,山药,茯苓,泽泻,当归,白芍,蒺藜,石决明(煅)组成的 中药复方制剂,具有滋.肾,养肝,明目之功效.临床应用于肝 .肾阴虚,目涩畏光,视物模糊,迎风流泪.牡丹皮和白芍 在处方中的用量较大,可确保临床疗效.芍药苷是明目地黄 丸中的主要有效成分,原部颁药品标准只收载了显微鉴别 和理化鉴别,没有制定含量测定方法,我们采用高效液相色谱 法测定明目地黄丸中芍药苷含量,具有快速简便,专属性强,重 现性好等特点.因此,现行质量标准较原质量标准有明显提 高,能更好的用于明目地黄丸的质量控制,保证其临床疗效. 1仪器与试药 SPD.10AT高效液相色谱仪(日本岛津公司); SPD.10AP型紫外检测器(日本岛津公司);浙江大学(N2000) 色谱工作站;芍药苷对照品(购自中国药品生物制品检定 所),乙腈为色谱纯,其余试药均为分析纯. 2方法与结果 2.1系统适用性试验-6]HypersilCl8柱(4.6mm×250 mm,5m);流动相:乙腈.05mol?L磷酸二氢钾溶液(12 :88);检测波长:230nm;流速:1.0ml?min,.理论板数以 芍药苷计不低于2500,分离度:R:1.64(R>1.5).按照处方 组成制备不含牡丹皮和白芍的阴性样品,阴性样品溶液在芍 药苷峰位置处无干扰峰出现,所以处方中其它味药对测定结 果无影响.参见图1. 2.2供试品溶液的制备取本品1.5g,研细,精密称定,置 具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50rrIl,密塞,称定重量,超 声处理(功率250W,频率50kHz)30rain,放冷,用甲醇补足 减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,精密量取续滤液25ml,上 氧化铝柱(直径1.8cm,100—200目,2g),用50%甲醇洗 脱,收集洗脱液100ml,摇匀,滤过,取续滤液,即得. 的处理方法,实验结果显示70%甲醇处理样品最佳;另外,有 关HPLC法测定黄芩苷的含量文献.很多,其流动相通常 为磷酸系统和醋酸系统两类,结合本制剂的药味特点,并比较 了中国药典和文献担.中以HPLC法测定黄芩苷含量中的流 动相,结果以磷酸系统为流动相更适合本制剂,经多次试验, 最后优选出甲醇-0.4%(,V)磷酸(45:55)为流动相,使黄芩 苷主峰与其它峰达到了较好的基线分离效果.10批样品的 含量测定结果为每粒92.97—98.14mg,建议按照本检测结果 最低值的80%即每粒74.38mg作为茵栀黄软胶囊质量标准 的最低限量. 本方法快捷,简便,准确,重复性好,可作为茵栀黄软胶囊 的质量控制方法. 参考文献: [1]国家药典委员会.中国药典(一部)[s].北京:化学工业出版 社,2005:288—379. [2]徐晓光,程仁刚,于晓蕾.HPLC法测定茵栀黄颗粒中黄芩苷的 含量[J].齐鲁药事,2004,23(6):229—3O. [3]刘武占,卢英翠,庄学珍.HPLC法测定茵栀黄胶囊中黄芩苷的 含量[J].山东医药工业,2001,20(5):2l一2. [4]傅桂兰.HPLC法测定黄芩及其复方制剂中黄芩甙的含量[J]. 中国中药杂志,1994,19(12):73l一2. [5]柯长青.高效液相色谱法测定孕康13服液中黄芩苷含量[J].安 徽医药,2006,10(6):428—9. [6]郭平,李章万,蒋学华,等.HPLC测定l2种中药制剂中黄芩 甙含量[J].药物分析杂志,1995,15(5):13—6. [7]董玉中,陈萍.高效液相色谱法测定芩连口服液中黄芩苷的 含量[J].安徽医药,2005,9(1):38—9. (收稿日期:20o7一ll—l9)