有机酸检测方法

有机酸检测 甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、酒石酸、草酸、苯乙酸、阿魏酸 甲酸、乙酸、丙酸、 柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、酒石酸、草酸、 仪器与设备 waters2695 Alliance SeparationsModule高效液相色谱仪;waters2996 PhatadiodeArray二极管阵列检测器;Heraeus离心机;HORIBApH计。 色谱分析 (1)混标配置。分别准确称取适量上述10种有机酸并用超纯水溶解或稀释,以孔径0. 45μm的微孔滤膜过滤,转移至50mL容量瓶中,定容,配制浓度为100mg/L的储备液,保存于4?冰箱中。 (2)曲线绘制。有机酸标准液的配置:根据紫外吸收灵敏度,将草酸、酒石酸、苹果酸、甲酸、丙二酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、琥珀酸、丙酸按照0. 2?2. 5?5?5?5?2. 5?5?5?5?5的比例配制混标,逐级稀释,配制成A、B、C、D、E五个浓度级别的标准溶液,以绘制标准曲线。其中A级别标准溶液浓度为0. 2; 2. 5, 5, 5, 5, 2. 5, 5, 5, 5, 5(μg/mL);B、C、D分别为上一个级别浓度的5倍稀释,E级为D级的2倍稀释。并将这10中有机酸编号为:OA01-OA10。 (3)色谱条件。反相C18柱CAPCellPAK C18MG 4. 6mm×250mm, 5um, pH范围: 2~10,流动相: 0. 1%H3PO4的去离子水和乙腈(V/V)98?2;检测器波长: 210nm;流速: 1mL/min;进样量: 20u;l柱温: 35?; (4)流动相配置。取1mLH3PO4用超纯水稀释至1000mL,经孔径为0. 45μm的微孔滤膜过滤,超声脱气后备用。乙腈(色谱纯)超声脱气备用。 阿魏酸 阿魏酸的测定:称取风干样品1.0000g置50ml量瓶中，加入乙酸乙酯约45ml，超声处理30min并静置过夜，加乙酸乙酯到刻度，摇匀，过滤，吸取滤液25ml水浴蒸干，残渣加甲酸溶解并移入10ml容量瓶，定容之后用荧光分析仪测定。 实验仪器 KQ-360DE型数控超声波清洗器、玻璃仪器烘干器、TDI5-WS多管架自动离心机、电子天平、RF-540荧光分光光度计。 实验药品 乙醇、乙酸乙酯、1%碳酸氢钠、2%碳酸钠等试剂均为分析纯,水为亚沸高纯去离子水,阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号: 0773-9910)。 激发波长和发射波长的选择 精密称取阿魏酸对照品12. 00 mg,置100 mL容量瓶中,加2%碳酸钠溶解,室温下对不同浓度的阿魏酸对照溶液在200-600 nm波长范围内进行激发波长扫描,阿魏酸的最大激发波长(λex)为343 nm,固定该激发波长,扫描得发射谱图,得到其发射波长(λem)为463 nm,且随着阿魏酸浓度的增加其波长没有偏移,荧光强度随着阿魏酸浓度的增加而增大,因此,选择该最大激发波长和最大发射波长(即λex/λem为343 nm/463 nm)作为后继测定的工作条件。 标准曲线 精密量取适量的阿魏酸对照品溶液,分别稀释成浓度为0. 3、0. 6、1. 2、1. 8、2. 4、3μg/mL标准溶液,选定激发波长和发射波长条件下,测定其荧光强度,以阿魏酸对照品溶液的浓度为横标轴(x),以荧光强度为纵坐标轴(y),得回归方程为y=19.469x +4?805 8,r=0.997,结果明进样量在0. 3-3μg/mL范围内线性关系良好。 样品测定 精密称取当归药材0. 5 g,置具塞三角瓶中,加1%碳酸氢钠25mL,超声提取30min,离心10min,取上清,加稀盐酸调pH值至2-3,用乙酸乙酯10 mL萃取3次,取上清液合并为30 mL乙酸乙酯液,再加2%碳酸钠20 mL,萃取3次[4]。取下层溶液用2%碳酸钠定容至100 mL,微孔滤膜滤过液取1 mL,加2%碳酸钠溶液稀释至10 mL。即作为供试品溶液 高效液相色谱法测定阿魏酸的含量 潘成学 贾欣 申小静 郑州大学药学院郑州市450052 ? 23 ? 摘要 目的建立妇科调经片q-阿魏酸含量测定方法:方法 采用HPLC法，使用C。 柱，流动相为甲醇 一0(1, 磷酸溶液(30:70)，流速1(0 ml,min，紫外检测波长313 nm。结果 阿魏酸线性范围0(0388— 0(3104 tzg，平均回收率97(16, :结论所建立的方法稳定可靠、灵敏、准确、简便，可用于该制剂的质量控制。 关键词 妇科调经片 阿魏酸HPLC 中图分类号:11927(2 文献标识码:A 文章编号:1672(3422(2005)18-0023-02 Determination of Content of Ferulic Acid by HPLC PAN Chengxue，JIA Xin。SHEN Xiaojing School of Pharmacy，Zhengzhou Universit)’，Zhengzhou，450052，China ABSTRACT Objective To establish a RP—HPLC method for determinating content of ferulic acid in Fuketiaojing tablet(Methods The content was determined by HPLC(The analysis was carried on C 1 8 column，the mobile phase was consisted of methanol一0(1, phosphoric acid(30:70)with the flow rate at 1(Oml,min and the UV detection wavelength was at 3 1 3 nm(Results The linear re( gression for Fuketiaojing tablet was over the range of 0(0388,0(3104 Ixg(r=0(9999)(The average recovery rate of Fuketiaojing tablet was 97(16,(RSD =0(17, (n:5)(Conclusion This method was sensitive，accurate，reproducible and exclusive( KEY WoRDS Fuketiaojing tablet:Ferulic acid:HPLC 已有文献’ 采用高效液相色谱法对妇科调经 颗粒中芍药苷的含量测定的报道;对于妇科调经 片，文献一 采用HPLC方法对阿魏酸进行了含量测 定，但采用的流动相为甲醇一1, 冰醋酸(30:70)。 我们采用高效液相色谱法，对妇科调经片及其中 的药材当归、川I芎中阿魏酸进行含量测定。 1 仪器与试药 1(1 仪器高效液相色谱仪(P200II，大连依利特科学仪器有限公司生产)，UV200 11紫外可见波长检测器，ODS C。 色谱柱，Echrom98色谱工作站。 1(2 试药阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号:773—9202);妇科调经片(河南仲景保健药业有限公司);甲醇为色谱纯;水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2(1 色谱条件与系统适用性试验 ODS C。 色 1 河南省人口和生育科学技术研究院郑州市450002谱柱(4(6 mm ×250 mm，5 m);流动相:甲醇一0(1,磷酸溶液(30:70);流速1(0 ml,min，柱温40? ，检测波长313 nm;进样量10 l。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000。 2(2 线性关系考察精密取阿魏酸对照品，分别制成浓度为3(88 g,ml、7(761xg,ml、15(52txg,ml、23(28 g,ml、31(041xg,ml的样品，进样量101xl，测定阿魏酸峰面积积分值，以峰面积积分值为纵坐标(Y)，阿魏酸的进样量(x)为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程，Y=0(03126255X一0(2889704:(r=0(9999，n =5)，表明阿魏酸在0(0388, 0(31041xg之问呈良好的线性关系。 2(3 精密度试验精密吸取同一对照品溶液10 ，重复进样5次，测定其峰面积积分值，结果其色谱峰的相对标准差为0(72, ，表明其精密度良好。 2(4 样品含量测定 2(4(1 对照品溶液制备取阿魏酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每12(5oe,ml的溶液，即得。 2(4(2 供试品溶液的制备取装量差异项下本品同批次(040428)10片，除去包衣，研细， 混匀，取约l g，精密称定，分别置5O ml具塞锥形瓶中，精密加甲醇l5 ml，密塞，称定重量，超声处理60 rain，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，续滤液用微孔滤膜滤过，即得。 2(4(3 阳性对照品溶液的制备依据处方中的比例，按供试品溶液的制备方法制备缺当归和川芎的阳性对照溶液。结果经进样证明阴性无干扰。 2(4(4 样品含量测定分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各l0 l，进样，由峰面积计算阿魏酸的含量，同法制备并测定l0批中试产品，计算阿魏酸的含量，测定结果见表l。 表1 样品含量测定结果 2(4(5 稳定性试验精密吸取对照品溶液lO l，注入液相色谱仪，按0、2、4、6、8 h各测定1次阿魏酸峰面积，并计算阿魏酸含量，RSD=0(50, 。 2(4(6 重现性试验取批号为040428的样品，按供试品溶液制备方法制备5份供试液，测定分别测定阿魏酸含量，其RSD=0(46, 。 2(4(7 回收率试验 取批号为040428的样品(阿魏酸含量81(841(zg,片)20片，精密称定重量:医药论坛杂志2005年9月 第26卷 第18期 7(0346g，平均片重0(3517g,片，研细，取0(5g，精密称定，共取5份，分别加入阿魏酸对照品适量，进样量l0 l，测定阿魏酸峰面积，计算阿魏酸含量，计算回收率，测定结果见表2。 表2 回收率测定结果 取样量(g)样品中含量加入量测得值回收率平均回收率RSD(, ) 【 g ( g ( g) (, ) (‘ ) 0(498l ll5(9 l20(0 232(34 97 03 0(50Il l16(6 l20(0 233(26 97(22 0(5158 120(0 l20(0 236(80 97(33 97(16 0(17 0(499l 116(1 l20 0 232(44 96 95 0 4974 l l 5 7 l 20 0 2 2 44 97 ，R 3 讨论 因当归、川芎中均含有阿魏酸，为保证制剂质量，我们对药材中当归和川芎中的阿魏酸含量也进行了测定。根据测定结果，拟定本品当归中阿魏酸含量不少于0(050, ，川芎中阿魏酸含量不少于0(020, 。