血小板-t细胞活化抗原1

血小板-t细胞活化抗原1 血小板/T细胞活化抗原1 　　1985年Burns等以活化T细细细细细细细细细细细胞免疫原制了抗活化T 细细细细细细细细细细细胞面抗原的克隆抗体,并将其中1细细细细细株克隆抗体Leo-A1细细细细的抗原命名人T细胞系特异性活化抗原1，T lineage-specific activation antigen1, TLiSA1细细细细,, TLiSA1参与了CTL细胞的活化与分化〔1-3细细细细〕。随后的 TLiSA1也高表达于血小板表面,并与血小板的活化和凝集功能有,遂将此抗原重新命名血小板细细细细细细细细细细细细细细细/T细胞活化抗原1，platelet and T cell activation antigen 1, PTA1,〔4〕。1997细细细细细细细细年我室与澳大利Newcastle大学癌症研究中 心合作成功克隆了人PTA1 cDNA〔5〕。随后,我室又成功克 隆了臂猿和猴细细细细细PTA1细全cDNA。PTA1细细细细基因的克隆一步 深入探细PTA1细细 的功能打下了良好的基。 　　有趣的是,PTA1的基因序列与1996年DNAX分子与 细胞生物学研究院Shibuya细细细等表的DNAM-1分子，DNAX accessory molecular-1, DNAM-1,序列相同。DNAM-1分子 的程同细细细细细PTA1细细细细十分相似,最初作者制人CTL细的抗,其中细细细细DX11细细细细抗能明抑制CTL细细细细细细细多瘤胞系(如Colo205、PA-1、MCF7等)细细细细细的作用。Shibuya等首先从外周血个核胞细细细细细(PBMC)细中通DX11细细细细细细细细抗和析化了DX11 细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细的抗原,行了部分蛋白序列定,以多的PCR引物增出细细细DNAM-1的部分片段,再以32 P细细细细细细的探行 细细细细细,最得了DNAM-1的cDNA序列。Shibuya细细DNAM-1细细细细细细细细细细细细细细细细细细细分子是一新的粘附分子,并可能与信号有〔6 〕。 　　到目前止,细细细PTA1的配体，PTA1 ligand, PTA1L,尚 未基因克隆成功。本室已成功构建、表达了细细细细细细细细细细细细PTA1胞膜外 区/IgG1 Fc细段融合蛋白,通PTA1/Ig细细细融合蛋白行的 免疫化及粘附阻断细细细细细细细细细细细PTA1细细细细细配体表达于瘤胞系 Colo205细胞膜表面。PTA1细细细细细细细细细 配体的定正在行之中。 　　PTA1细细 的基因及构 　　1997年Sherrington等从以pCDM8细细体的活化Jurkat细胞cDNA细细细细细文中,通Leo-A1细抗panning的方法细细得到人PTA1阳性克隆〔5〕。人PTA1细细细细细基因拷基因,定位于染色体18q22-q23。其cDNA细全1.4kb,5,和 3,端分有细细174bp和111bp细细细细细细细细非区。放框1　011bp,细细336个氨基酸,包括18细细细个疏水氨基酸的信号,成熟蛋白由318细细细细个氨基酸成,属I型跨膜糖蛋白。胞膜外区由232细细细细细个氨基酸成,形成2个免疫球蛋白超家族V细细构 域,构在免疫球蛋白超家族成中是唯一的一个。细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细PTA1分子第19和90细细细细细细细位的保守半胱氨酸形成内二硫,第134和204细细细细细细细位的保守半胱氨酸形成第二个内二硫,2个二硫分起到定胞膜外区细细细细细细细细细细细2细细细细细细细细个构域的作用。在90位和204 位半胱氨酸均存在免疫球蛋白超家族细细细细细细细细细细细细V细细构域的特征性基序Asp-X，Gly或Ala,-X-Try-X-Cys基序。PTA1胞膜外区含有8个潜在的N-糖基化位点和3个潜在的O-糖基化位点。当用内切糖苷，细细Endo F,消化N-细接的糖基后,PTA1 的相分子量减小了细细细细细细细细30×103,表明PTA1分子胞膜外区是高度糖基化的,可能与细细细细PTA1细细细细细参与分子有。PTA1的糖基中含有大量的唾液酸,神氨酸，细细细细细neuraminidase,消化唾液酸后,其pI由3.5,4.2细细细7.8,8.2。PTA1穿膜区 由25细细细细细细细个疏水氨基酸成。胞区有61个氨基酸,含有3个酪氨酸、6细细细细个氨酸和6细细细细细细细细细细细细细个氨酸,胞区尾部含有一段EDIYVNY基序,中央酪氨酸的氨基端有2细细细细细个荷的谷氨酸和天冬氨酸，ED细细细细细细细细细细细细细细细,,基端氨酸、天冬胺和酪氨 酸，VNY细细细细细细细,,此基序可作非受体型蛋白 酪氨酸激，细细protein tyrosine kinase, PTK,的底物。并可以 和蛋白酪氨酸磷酸细2，protein tyrosine phosphatase 2, PTP2,氨基端的SH2细细细细细细细细构域合。另外,在PTA1细细细胞区 存在着酪蛋白激?， 细细细casein kinase ?,和PKC作用的底物S/T细细细细细细细细细细细细细构。胞区的上述构和基序提示PTA1分子可能参与T细细细细细细胞和血小板活化的信号程〔4,5〕。人、猿、猴PTA1分子cDNA细及蛋白水平的同源性93%,95%,表明 PTA1细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细 在生物化程中高度保守并可能具有重要的功能。 　　Burns细等通Leo-A1细细细细细细细细细抗和析的方法从 血小板上化了细细细PTA1细细细细细细细分子,并行了蛋白部分序列定,细细细细细PTA1细细细细细细细细细细细细细分子一全新的分子。通化的PTA1分子再次免疫制了抗细细细PTA1细细细细细的克隆抗体NEWE1和NEWI1〔3细细细细细细细细细细细细〕。而后通免疫沉淀从血小板、Jurkat细胞和T 细细细细细细细细胞上沉淀下来的分子是相同的。采用流式胞Leo-A1和NEWE1细细细能合到PMA刺激的Jurkat细胞膜表面,并且平均光度相同,但细细细细细细强NEWI1不能在PMA刺激的Jurkat细胞膜表面着色,当增加Jurkat细胞膜通透性后,NEWI1 能使Jurkat细细细细胞着色,并且得与Leo-A1和NEWE1相同 的光度,表明细细细细细强NEWI1细细的表位位于PTA1细细细 胞区。 　　用Leo-A1细细细细细细细细细细细细细细细细抗行的血小板裂解物免疫沉淀PTA1相分子量细细细细细细(65,70)×103细细细细细细,蛋白并不均一。O’Farrell双细细泳，two dimensional gel analysis,表明从活化T细胞免疫沉淀得到的PTA1细细细细细细细分子一弥散物,pI细细范4.0,6.5, 而血小板来源的PTA1分子的pI细3.5,4.2细细,其差可能是由于糖基化不同造成的,用神氨酸切细细细细细细细除唾液酸后,两细细细细来源的PTA1分子pI细细细均8.0细细细,相分子细细量减少(60,65)×103〔4〕。Burns细细细细细细细等,在不同 的胞系及不同的刺激细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细条件下,通免疫沉淀有2,3细细相蛋白同PTA1细细细细细细分子共沉淀下来,相分子量(65,90)×103不等,pI4.0,6.5。当用Leo-A1细抗及不同血小板活化刺激血小板,细细细细细细细细PTA1细细细细被快速磷酸化,同相蛋 白中的部分分子也生了细细细细细细细细细细细低水平的磷酸化〔4,7细细细〕。但些共沉淀分子的特性、作用及构细细细细细细细细细细细细细细细细仍不清楚。些附加蛋白在人嗜T细细细细细细细细细淋巴胞?型病毒感染的HUT102B2细细细胞系中能被免疫沉淀下来,在PHA刺激的T细细细细细胞中有能沉淀 下来,而在Jurkat细细细细细细细细细细细胞系中未能沉淀下蛋白。些蛋白的 细细细细细细细与肌蛋白，actin细细细细细细细细细细细细细细,同存在,提示些蛋白定位于 胞内。 　　用125I细细PMA刺激的Jurkat细胞及血小板胞膜,再 用磷酸肌醇磷脂细C，phosphatidyl inositol phospholipase C细细细细细细细细,理胞,然后在Jurkat细细细细细细胞上清中可以到从 胞膜上放的细细细PTA1抗原,表明PTA1细分子至少是部分通糖基磷脂肌细细 1醇，glycosyl phosphatidyl inositol, GPI细细细细细,方式定于胞膜上的。其它参与胞信号的膜表面分子中,有部分是通细细细细细细细细细细细细细细细细细细细 细GPI细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细方式定于胞膜表面的。而在血小板上清中未PTA1细细细细细细细细抗原的放,可能血小板PTA1细分子主要以跨膜方式接于血小板胞膜上,另一可能是血小板胞膜外源性的细细细细细细细细细细细细细细细作用不敏感。 　　PTA1细细 的表达及表达 　　已得的细细细细细细细细细细据表明,PTA1主要表达于巨核/细血小板 系、活化T细胞、NK细细细细细细细细细细细细细细细细细细胞、核胞、胸腺胞、及多化的造 血胞系。细细细细PTA1细高水平地表达于血小板,平均1　200个 分子/每个血小板〔4〕。PTA1在巨核/细细细细细血小板系有成性表达,并且受到TPA，PKC细细细激活,及PHA细细细细的上。在部分白血病细细细细细胞系中,PTA1细细细细具有异性表达(细细细细细细如白血病胞TF-1细细、巨核胞Dami及HEL细成性表达PTA1细细,而白 血病细细胞K562不表达PTA1〔9细细细细细〕。上述果提示,PTA1可能与髓干细细细细?胞CFU-GEMM?细?细细细细巨核胞血小板的育程及功能有。另外,细细细细细细细某些T细细细细细胞交瘤、T细细细胞白血病胞高表达PTA1,HUT-102B2细细细细细细胞系表达高水平的PTA1细, 臂猿胞系细细细MLA-144也高表达PTA1分子〔8 〕。 　　PHA活化的正常T细细细细细细细细细胞及混合淋巴胞反中的活化T 细胞表达PTA1细细细细细细细细分子,并受胞因子及其它活化的,其中细细细细细细细IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-3、TNF-α细及佛波PMA，phorbol ester细,均PTA1细细细细表达有上作用。IL-1和IL-2细细 细最佳反量200U/ml,PMA细细细的最佳度20, 50ng/ml细细细细细。几乎所有的刺激均表明PTA1细在刺激后半小至1细细细细小内引起Leo-A1 McAb细合的减少,随后在10,20小内细细PTA1的表达达到高峰。TGF-β细PTA1细的表达有下作用〔3 〕。 　　PMA和IL-2细PTA1细细细细细细细细细细细表达的上作用依于蛋白的合 成。100μg/ml细细细细放菌，cycloheximide,即完全抑制了IL-2 和PMA细PTA1细细细细表达的。而IL-1细细细细细的刺激有所不同,在细细细细早期PTA1的表达没有减少,表达的高峰在刺激后7,8细细小,15,18细细细细细细细细细细细细细细小后降回本底水平,放菌IL-1的作用细细细细细细细细细细细细几乎无影响,表明IL-1细细的PTA1细快速表达 程不依细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细于蛋白的合成。一象,提示可能存在胞内PTA1细细细分子的存和PTA1细细细细细细细细细细细细细细细受胞因子的再分布。而且,在血小板中确细细细细细细细细细细细细细存在着膜合的空泡构和tortou细细管道系,可以作血小板细细细细PTA1细细细细细分子的胞存池〔4 〕。 　　PHA或CD3 McAb能刺激静止T细胞PTA1抗原的表 达。但PHA细Jurkat细胞PTA1细细的表达无刺激作用,成 性高表达PTA1的HUT102B2细胞在受PHA刺激后,表达 水平反而下降。 　　除MLA-144细胞受PMA刺激后PTA1表达下降外,几乎所有胞受细细细细细PMA刺激后PTA1的表达均升高。其中,Jurkat细细胞PMA细细细细细细细细细细的刺激反烈最,强敏感静止和Jurkat细胞不表达PTA1 mRNA,当Jurkat细胞受PMA刺激12小 细细细细细后始PTA1 mRNA细细细,其子1.6,5.0kb不等。PHA细先刺激的外周血T细胞受PMA刺激后,首先PTA1的表达下降并低于未细细细细细理水平,6细细细细细细细细细小后始升高,24,30细小后达到高峰，PTA1表达几乎增高5细细细细细倍,,但上作 用出乎意料地被A23187细细细完全阻断。独的PHA、CD3 McAb和A23187均无刺激PTA1细细细细细表达的作用,当上述分同 PMA细细细细细细细细细细细细细细细细同作用,均明减弱或完全阻断了PMA细PTA1表达的作用。细细细细细 　　PTA1 的功能 　　1. 刺激血小板活化及聚集 　　PTA1 McAb细细细细细属于血小板刺激型抗体,抗体与巨核胞细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细育及免疫性血小板减少有密切的系,如CD41/CD61(gpb/a)??、CD9、CD36抗体。PTA1 McAb可以血小板活化、细细细细细细细细细细细细细细细细细细细聚集,作用需要抗体Fc细段的介, Leo-A1 McAb去除Fc段后即失去了刺激血小板聚集的功能〔4,7细细细〕。有意的是PTA1 McAb细细细细细细细格茨曼血小板功能不全，Glanzmen’s thrombasthenia,患者血小板无活化及促聚集作用,提示PTA1可能与血小板功能异常性疾病 的细细细细细细细病机理有〔4〕。NEWE1在5μg/ml细细细细以上度均能 直接刺激血小板分泌和凝集,NEWE1刺激血小板凝集的潜 伏期明细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细 延,并且一潜伏期依于抗体的度。 　　2.细细细细细细细在混合淋巴胞反中抑制CTL 的分化 　　将Leo-A1 McAb或其F(ab’)2片段加入MLC或T细胞培细细细细细细细体系中能抑制T细细细细胞向胞毒T细细细细胞分化,明减少CTL及LAK细细细细细细细细细细细细细细胞率,一作用不依抗体的Fc段。PTA1 McAb只能在MLC细细细细细细细初期作用,抑制CTL细细细细的分化,在段 Leo-A1 McAb不能抑制CTL细细细细细细细细的胞毒活性,提示PTA1作用于CTL细细细的分化段〔1-3〕。但DX11 McAb细细细细细能在相抑制CTL细细细细细细细细细细多瘤胞的〔6〕,提示Leo-A1及DX11 McAb细细的PTA1 表位可能不同。 　　Leo-A1及NEWE1 McAb细细细细细细细细能以量依方式抑制CD3细 细的T细细细细细细细细细细细细胞增殖,它独或合均不能刺激PBMC细细细和化的 T细胞的增殖。在MLC细细细细细细反体系中加入10μg/ml抗体,第7 天细细细细3H-TdR细细细细细细细细细的入率要比照低50% 左右。 　　但Leo-A1及NEWE1 McAb细PHA细细细细细细的个核胞增殖无抑制作用,细细细细细细适量的PHA (1μg/ml)细细细细和羊胞刺激的化细细T细细胞的增殖也无抑制作用,2细细抗体CD2，T111和T112 细细细刺激,的T细细细细胞增殖反亦无 抑制作用,提示PTA1与CD2 活化通路是不相同的。 　　3.PTA1细细 可能参与信号 　　PTA1与Tactile、neuroglian及CEA家族的粘附分子有 一定的同源性,PTA1的表达特点及上述同源性提示PTA1 可能是某细细细细细细细细细细细细细胞外分子的胞膜受体〔7〕。PTA1细细细细胞区具有PTK细细细、酪蛋白激?、PKC细细细细细细细细细等多蛋白激的底物构,其胞区的细细细EDIYVNY细细细细细基序可以作非受体型蛋白酪氨酸激的底物,在其氨基端有细细细细细细细细细细细2细细细细细个荷的 氨基酸残基,细2细细细细个残基与其基端的3个残基构成了SH2分子的位点,提示细细细细细细细PTA1细细细细细细细细可能参与胞的信号〔5〕。血小板细细细细细细细细细细细细细粒的放被与蛋白激C，PKC细,的活化有,Leo-A1 McAb细细细细细细细细细细细细能持性血小板聚集,且 一程不细细细细细细细细细细细细细细细 依于血小板粒的放。 　　当Leo-A1 McAb细合PTA1细细细分子后引起了分子 的酪氨酸磷酸化,抑制蛋白磷酸化的激抑制能抑细细细细细细制血小板的聚集,酪氨酸磷酸化被公细细细细细细细细细细是信号中的主要生化事件〔7〕。由于PTA1细细细分子的胞区不 含任何激活性及可能的构域,因此细细细细细细细细细细细细细PTA1细细可能通此 SH2细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细 位点与胞内的其它信号分子生相互作用。 　　4.PTA1细细 与疾病的系 　　已得的细细细细细细细细细细据示,PTA1细细细细与免疫相性疾病 有着密切的系,细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细些疾病主要包括自身免疫性疾病、病毒 感染性疾病、瘤及细细细细细细细细细细移植排斥反。PTA1在移植物抗宿主病、细细细细细细细细细细合征出血、尖湿疣患者PBMC细细细细细细,及胃癌浸淋巴胞、细细本氏甲状腺炎浸T细细细细细细细细细细细胞中有高水平的表达。由于PTA1分子表达于活化T细胞,因此PTA1细细细可能参与了些疾 病的免疫细细细细细细细细细细答或免疫病理程〔9,10 〕。 　　Tabata细细细细细细细细细细细细细细细等,湿性炎及系性 斑狼患细细细细细细细细细细细者的外周血及液T细胞PTA1细细的表达水平明增高。在上述患者中存在着全身或局部T细细细胞的活化,可能与上述疾病的细细细细细细细病机理有〔11〕。在肌炎患者中,PTA1表达水平比正常照细细细细细细细增高,并且PTA1的表达水平与疾病的活 细细细性相〔12细细细细细〕。在出血患者中,CD25及PTA1的表达均升高,在急性期明高于细细细细细细细细细细细细康期,提示出血患者于高水平的胞免疫细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细细状,有利于机体清除病原体〔13细细细细细细细细细细细细细〕。在心及等器官移植患者中,PTA1以及其它的T 细细细细细胞活化，如IL-2R细细细细细细,均高于正常照,但在心 细移植患者中,PTA1细细细细细细的表达水平与病情未明的系 〔14 〕。 　　PTA1细分子是具有重要功能的新分子,有PTA1细细的一 步研究尚有大量的工作要做。PTA1及PTA1L细细细细细细的胞分布、 功能、PTA1/PTA1L细细细细细细细细的相互作用及其介的信号程、 PTA1细细细与疾病的系及PTA1L细细细细细细细基因克隆是本步今后一 研究的主要内容。   　　参考文献 　　1　Burns GF, Triglia T, Werkmeister-JA, et al. TLiSA1, a human T lineage-specific activation antigen involved in the differentiation of cytotoxic T lymphocytes and anomalous killer cells from their precursors. J Exp Med,1985,1611063-1078. ? 　　2　Chen LK, Bensussan A, Burns GF, et al. Tourvieille-B; SAllospecific proliferative human T-cell clones acquire the cytotoxic effector f unction after three months in culture, in IL-2 conditioned medium. Hum Immunol,1986,1730-36. ? 　　3　Jin B, Scott JL, Vadas MA, et al. TGF beta down- regulates TLiSA1 expression and inhibits the differentiation of precursor lymphocytes into CTL and LAK cells. Immunology,1989,66570-576. ? 　　4　Scott JL, Dunn SM, Jin B, et al. Characterization of a novel membrane glycoprotein involved in platelet activation. J Biol Chem,1989,26413475-13482. ? 　　5　Sherrington PD, Scott JL, Jin BQ, et al. TLiSA(PTA1) activation antigen implicated in T cell differentiation and platelet activation is a member of the regulation of expression. J Biol Chem,1997,27221735-21744. ? 　　6　Shibuya A, Campbell D, Hunnum C, et al. DNAM- 1, a novel adhesion molecule involved in the cytolytic function of T lymphocytes. Immunity, 1998,4573-581. ? 　　7　Zuzel M, Walton S, Burns GF, et al. A monoclonal antibody to a 67kD cell membrane glycoprotein directly induces persistent platelet aggregation independently of granule secretion. Brit J Haematol,1991,79466-473. ?　　8细细细细　田方,金伯泉,姜,等.细细细细细一新的免疫球蛋白超家族成细PTA1细细细细细细细细细的胞分布及表达研究.细胞与分子免疫学,1996,1253-57. ? 　　9细细细细细细细细细细细细　　黄,金伯泉,汪美先,等.HFRS患者PBMC 和异型淋巴细细细细细细细细细细细细细胞多活化抗原表达的研究.细细上海免疫学志, 1991,1194 -97. ? 　　10细细细细细细细细细细细　王,胡文,王泊云,等.自身免疫性甲状腺病 浸细T细细细细细胞活化与泡胞DR抗原表达.细细细细中医学 志,1992,2777-80. ? 　　11　Tabata H, Hara M, Kitani A, et al. Hirose-T expression of TLiSA1 on T cells from patients with rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus. Clin Immunol Immunopathol,1989,52366-375. ? 　　12　Miller FW, Love LA, Barbieri SA, et al. Lymphocyte activation markers in idiopathic myositis: changes with disease activity and differences among clinical and autoantibody subgroups. Clin Exp Immunol, 1990 ,81373-379. ? 　　13　Huang C, Jin B, Wang M, et a l. Hemorrhagic fever with renal syndrome: relationship between pathogenesis and cellular immunity. J Infect Dis,1994,169868-870. ? 　　14　Loertscher R, Forbes RD, Halabi G, et al. Expression of early and late activation markers on peripheral blood T lymphocytes does not reliably reflect immune events in transplanted hearts. Clin Transplant,1994,8230-238.