【doc】应用单克隆抗体一胶乳试剂检查肠毒性大肠埃希氏菌...
应用单克隆抗体一胶乳试剂检查肠毒性大
肠埃希氏菌...
国外兽医学一畜寓传染病第ia眷第2:~1990年5月 应用单克隆抗体一胶乳试剂检查肠毒性 大肠埃希氏菌的纤毛粘着素
C.J.Thorns等
确诊由肠毒性大肠埃希氏菌(ETEC) 所致的新生畜腹泻的最常用
是鉴定分离 菌
面是否存在特定的纤毛粘着素.粘着豢 在非BTEc菌摊极少见,它有助于细菌在小 肠微绒毛上粘附和增殖,从而引起腹泻.从 幼畜分离的ETEC发现带有4种主要的纤毛 粘着素,如K9D(F5),F4l,K8B(F4).和
987P(F).最近已研制出应用以单克隆抗体 为基础l的免疫试验检查固体培养基(Morris 等,1985|T}~orrts等,1987和i98g),粪便 或小肠切片(Marsha][等,1986~Raybould等, 19;87jThorns等,1989)中ETEC上的纤毛 粘潜素.一种更为简单快速但同样特异并能 适用于检查所有粘着素的技术为实验室和临 床应用提供了方便.抗体与胶乳微粒结合形 j爨稳定的凝集试剂,已成功地用于硷查许多 生物的抗原和抗体(Heehemy等,1984). 文报道了应用单克隆抗体一胶乳试剂检查 E'.eoll培养物的K.目,K8.,987P和F.纤 毛粘着素的结果.
本试验所检查的E.eoli菌株代表了执馈
………—…,
豁血清到接种后大约3周出现最高SLPS-|反 应,然后类似于接种s.的牛的效价降低. 以后获得的血清在竞争ELISA咔I对PS抗原 出现短暂的阳性反应,而在间接ELISA则 无.感染l0或IO.个牛种布氏杆菌2308的6 头牛中,5头于接种后3周有较强的SLPS反 应,试验期抗铱效价是高的1头牛的血清 效价类似于上述低剂量的牛.直接I:LISA和 竞争ELISA检测与SLPS反应比较.对PS反 应直到6周呈阳性并在试验期一直保持Iff{ 牛,羔羊和仔猪分离的主要血清型,带有1 种或多种已知的纤毛粘着素.
按
方法,用单克隆抗体包被浓度为 1o~wtv直径为8m的红色胶乳微粒(K., 和987P单克隆抗体)或蓝色胶乳带粒?(K.. 和F'1单克隆抗体)(Heehemy等,1984).用 标准小鼠血清代替单克隆抗体制备红色和蓝 色的对照胶乳试剂.在白瓷板或白色塑料卡 片上将等量试验胶乳和细菌悬液混合,轻轻 摇动2分钟,观察肉眼可见的凝集现象.用对 照胶乳代替试验胶乳检查茵液的自凝反应. 为测试胶乳试剂的性能,用对照抗原制品代 替试验菌.将所有试剂保存在4,22稻37? 下,定期通过连续稀释的对照抗原及E.col1 参考菌株试验,检查其稳定性.
本实验鉴定了全部菌株的K.,K. F粘着素与常规的血清分型法结果一致. 另外血清型为0I.J:K29的1株和0j0i:K1?
987P的2株可凝集Fl胶乳试荆产生987P 3株与987P胶乳不发生反应,其中2株与 F,试剂反应阳性.所检查的菌株与对照胶 ………"-?一..??lH_-?_H-?? 性
从5头接种肠耶森氏菌O:9的牛得郅的 资料类似于接种s.的牛.经两种试验所测, 垒部牛血清对SLPS有强反应,而对PS没有 可酗抗体.
(图5幅,参考文献17篇,从珞)
Am.J.Vet.Res.,1989,50(1):5,8
(英文)
,徐建艾译张元凯校
乳都不发生自凝,在37?保存6周,各种试 剂的稳定性和特异性均无变化.
应用玻片凝集试验以单因子兔抗血清或 单克隆抗体捡查ETEC的K和K.,证明其 敏感特异(Mozris等,1985}Thorns等, 1987)?但用其检查987P和F.1牯着素剐较不 满意?部分原因是制备单因子抗血清或产生 凝集反应的单克隆抗体困难.和巳建立的方 珐相比,应用胶乳试剂可检出所有已知菌栋 的K.-,xs.和F.纤毛牯着素.懿而,没有想 到有3株能产生Ft,虽然它们均为能表达这 种纤毛的最常见血清型0-(Thorns等, l船8).腔乳凝集试验比直接凝集试验技术 敏感(Hecb.emy等,'1984),因此,也许这些 菌株就可表达F?t粘着素.与987P胶乳试剂
不发生反应的2株似乎捏可能表达F.,而
另外1栋(0?:K口s987P)与任何胶乳试剂
均不反应.需要进,步
,以确定这些菌
株是否产生987P.
所有胶乳试剂于37?帚存8周,4?保
存2O周仍然稳定.因此看来,这种试剂适于
没有低温运输或保存条件的地区.
(参考文献13H,从略)
Vet.Rec.,1989,125(4):91~92(1英文)
丁洪明译王志晃校
(本刊删)
扫描免疫印迹的简便方法
J.W.Palfreyman等
Seshi(1986)在一篇介绍细胞印连技术的论文中报道 技术应用甩莉用凫瘫过氧化物酶检测系葡拇免疫印避方法中 硝酸纤维膜用=甲荤处理后可以变得透明.我们梧此 并报告了一种对用硝酸纤维虞进行简便,快速的扫描 检埘方莹.
抗原用sDs—PAGE分离.然后转移到硝酸纤维艇上用台有5簿小牛血清的PBs封
闭非特异性组台位点.井甩
第一抗血清(用a1ween妁PBs作500倍稀释)适当感作后,再用有棘根过氧化物蘸
标记的第=抗津f用o蟛
Tween的PBs作追0B倍稀释)感作.结台的抗体通过加^过氧化物酶的底物——=
氟基联苯氟显色.待显色完奄且
膜彻席干燥盾.浸八二甲苹中.使之透明,然后印迹在二甲苹饱和状态
下.~LKB22e2Ultrosca卫激光密糜计
扫描,通过计苒蜂疑积划,可知抗隳的浓度.
纤维膜有变干燥亡勺只要硝酸纤维膜用二甲荤饱和.它就保持透明状态.童然硝酸趋势.但其透明性通译幄以维
持完成3,4拔扫描的时间.干燥的纤维膜侥复至u原来的不透职壮志时.印迹带的密度段有明显的变化.反复提泡
=甲苯的旰雉壤千燥后,峰的强度有一定影响.并且背景颜色加深. 这些试验结果表明.硝酸纤维膜用二甲苯处理靖.用过氧化物酶连接的探针卫二氟基联苯产生的免疫印述?谭
过扫描鼹容易被捡出过氧化物酶底物的替代物一氯化蔡酚.白于无致盛性已广泛采用但由于此底物产生的
斑点在二甲苯中不稳定.因而在本诖中未采甩.币过此方法适用于西氮喹产生的免
-四氮唑可以使辣 疫印述.据报
根过氧化物酶检融系统的敏感性增加3倍.印迹扫描的有效时间可通过采用1癯体石蜡来增加硝酸昨雒膜的透昵窿?
并延长其持犊时间.另外.使用二甲苯处理晌硝酸纤维膜能很快嵌复它原来的不透明性,种子保存和记录结果替?
(参考文献5篇,从略)
J.Immu~.Meth.,1988,109(2):199(英文)
刘一平节译傅启秀校