[doc] 脆性X综合征产前诊断研究现况

[doc] 脆性X综合征产前诊断研究现况 脆性X综合征产前诊断研究现况 国外医学妇产科学分册2003年第30卷第1期 淋巴细胞,诱导FRAXA脆性位点表达,这需要稳 定,成熟的技术,耗时长,且产科标本有其自身的特 点:绒毛细胞分裂相少,染色体形态不佳,而羊水细 胞则因其主要来源于胎儿皮肤,消化道,泌尿道,呼 吸道等脱落细胞,有一部分已衰老或固缩,培养起来 较其他组织更困难.显然,细胞遗传学方法不适于 FXS的产前诊断.迄今,相对成熟的方法依赖于分子 生物学技术的应用. 1.PCR应用PCR方法可直接扩增(CGG)n序 列和CpG岛序列.前者根据扩增片段的长度判断正 常者和PM.同时,因FXS患者(CGG)n片段过长, 碱基序列富含胞嘧啶(C)与鸟嘌呤(G),易形成稳定 的”发卡”形二级结构,扩增困难,无扩增产物,故可 应用排除法作出诊断.后者根据扩增片段的有无来 判断结果:FM的CpG岛甲基化,阻碍限制性内切酶 的识别,不能被酶切开,可得到扩增;正常者和PM 的CpG岛无甲基化,可被酶切开,不能扩增.现多 应用前者,近年也有应用两者相结合的多重PCR增 强诊断准确性的报道. Apessos等【61用多态标记突变片段的侧翼序列, 再对已知标记行多重PCR扩增的方法对胚胎进行 植入前诊断(PGD),他们应用了11个多态标记,包 括6个(CA)n序列和5个单核苷酸多态序列,该法 准确可行,适于有FXS母儿传递风险的人群. 2.Southern印迹杂交法该法检测(CGG)n结 构扩增程磨和CpG甲基化状态.应用酶酶切(包 括一匹甲基化敏感性酶)基因组DNA后与特异探 杂交,分杂交后DNA片段大小,能了解(CGG)n 结构n与CpG岛甲基化程度,诊断带者及患者. 上方法有利.PCR法扩增(CGG)n结构 无法确切检出FM,扩增CpG岛序列只适用于男性 患者的诊断,但具有名,灵敏,费用低的优点,适合 大量病例的筛查,该法诊断的FM病例要进一步 .Southern印避结果较准确,但需菇素标记探 技木7.杂费时(鑫少2周),所需DNA样品量多 (细胞数?10一),费用餐,且在同位素镓染诱,不 易于基张广,更不鹤于群体筛查,此外还应婚酶 解果,酶解不时产生的杂交带可导爱碴诊 断.现在多将PCR与Southern印迨杂交法结合应用. PCR结果为FM者,用Southern印’,,杂交法作进 一 步诊断. 有学者利用酶解,后扩增,再杂交的补法将 PCR法与Southern印杂交结合起来.甲基化不敏 感EcoRI和甲基化敏感E砖酶解箍翻绒毛细胞 ? 5? 的DNA,琼脂糖凝胶电泳:正常人产生一条2.8kb的 EcoRI—EagI片段(来自正常非甲基化基因)和一条 5.2kb的EagI片段(来自正常甲基化基因);PM产生 3.0kb和3.4kb的两条EcoRI—EagI片段;FM因高度 甲基化未被EagI切开,只检出一条>6kb片段.而后 切下特异片段再行PCR扩增与Southern印迹杂交. 此法具有样本量少(细胞数?50ooo),周期短(5— 6d),灵敏性和特异性更高的特点,但费用昂贵. 3.免疫细胞化学方法根据FM细胞内FMRP 缺失的特点,运用特异性抗体测定FMRP含量,检 出FXS患者.现已就FMR1基因外显子12编码的多 肽抗原合成了特异性较强的单克隆抗体3F11,检测 羊水或绒毛标本(细胞数?loo),最早用于妊娠l0 周的绒毛检查;还可抽取脐血,多克隆兔抗FMRP 抗体(a734)为一抗,碱性磷酸酶标记的羊抗兔 FMRP抗体为二抗,检测淋巴细胞FMRP含量,适用 于妊娠16—33周,更适宜于绒毛和羊水检查失败 者I17I.未经培养的绒毛或羊水细胞也可用来作免疫 细胞化学检测,该法在取得标本当天即可得到结果, 具有省时,费用低的优点.但只能区别FM与正常 者,不能检出PM. 免疫细胞化学方法还能用于取材发根毛囊细胞 的FMRP检测B1,该法可大规模筛查男性FM.而且, 皮肤与脑组织均起源于外胚层(淋巴细胞起源于中 胚层),发根组织的x染色体失活形式更能反映神 经细胞的况,根据发根细胞的FMRP表达状 况,可能菇知性FM的发,有关研究正在进 行中.此慷非列性的诊断方法有广的前. 三,照理 前爱外报道FXS产前诊断确诊FM基因硅 者均妊娠,PM者可涵妊娠.{‘;nen等?用 ‘筛三窿方将63例PM者妊娠经过及结局与正 常妊娠者作对研究,发现PM者妊娠期出j发 生较多,但其妊娠经过和结局与正常组无』别,妊娠 期不需特.此外,有学者阗为果:互过程被 复,FMR1突变基因有表达正常FMRP的薷能,可 研制有关作用点的药物复该基因的岬能,DNA 牟甲基化和组,需高,t化药物的研究已取得进 鲎,为内菠带来锰. 上所,FXS发病的分子机理已较为清,然 而具有重要遗传学的础儿传递She~,.,ani发 生机制不分清锺.然对关因经 FMR1基因失活的相关铮物研究有一定嚆果,袒与 ‘ 应茜相一蕊占孽 一一三三;f—__一嶝占噶vt——暑宣C矗!巳’’鬟豫【’-鼻—n; ? 6? 法,所以FXS产前诊断应引起产科工作者的重视. 分子生物学方法不失为一条有效途径,其中PCR和 Southern印迹杂交技术较为成熟,应用广泛. 参考文献 1MineurYS,SluyterF,deWS,eta1.Behavioraland neuroanatomicalcharacterizationoftheFmrlknockout mouse.Hippocampus.2002.12(1):39—46 2ODonnellWT.WarrenST.Adecadeofmolecularstudiesof fragilexsyndrome.AnnuRevNeurosci.2002,25:315—318 3ChurchillJD.Beckel—MitchenerA,WeilerIJ,eta1.E行ects ofFragileXsyndromeandanFMR1knockoutmousemodel onforebrainneuronalcellbiology.MicroscResrech,2002, 57f31:156-158 4WillemsenR,BontekoeCJ,SeveriinenLA,eta1.Timingof theabsenceofFMR1expressioninfuUmutationchorionic villi.HumGenet,2o02,l10(6):601-605 5HoogeveenAT,WillensenR,OostraBA.FragileX syndrome.theFragileXrelatedprotein,andanimalmodels. 155 MicroscResTech,2002,57f3):148— 6KennesonA,WarrenST.ThefemaleandthefragileX reviewed.SeminReprodMed,2001,19(21:159—165 7ShermanSL.PremutureovarianfailureinthefragileX syndrome.AmJMedGenet,20oo,97f3):189—194 8SullivanAK.CrawfordDC,ScottEH,eta1.Paternally transmittedFMR1allelesarelessstablethanmaternally transmittedallelesinthecommonandintermediatesize range.AmJHumGenet,2002,70f6):1532—1544 9PessoR,BerkenstadiM,CuckleH,eta1.Screeningfor fragileXsyndromeinwomenofreproductiveage.Prenat Diagn.20oo,20f8):611—614 10KallinenJ.HeinonenS,MannermaaA,eta1.Prenatal diagnosisoffragileXsyndromeandtheriskofexpansionof 国外医学妇产科学分册2003年第3O卷第l期 apremutation.ClinGenet,20oo,58(2):ll1一l15 l1PembreyME.BarnicoatAJ,CarmichaelB,eta1.An assessmentofscreeningstrategiesforfragileXsyndromein UK.HealthTechnolAssess,2001,5f7):1-95 12SalatU.BardoniB,WohrleD,eta1.IncreaseofFMRP expansionraisedlevelofFMR1mRNA,andclonalselection inproliferatingcellswithunmethylatedfragileXrepeat expansions:acluetothesexbiasinthetransmissionoffuU mutations?JMedGenet,20oo,37(11):842—850 13PatsalisPC.SismaniC,HettingerJA,eta1.Molecular sereeningoffragileX(FRAXA)andFRAXEmental retardationsyndromesintheHellicpopulationofGreeceand Cyprus:incidence,geneticvariation,andstability.AmJMed Genet,1999,84f3):184-190 14Ashley—KochAE,RobinsonH,G1icksmanAE,eta1. 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