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【doc】催产素对BALB/c小鼠胸腺细胞增殖的促进作用

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【doc】催产素对BALB/c小鼠胸腺细胞增殖的促进作用【doc】催产素对BALB/c小鼠胸腺细胞增殖的促进作用 催产素对BALB,c小鼠胸腺细胞增殖的促 进作用 ISSN1007.8738细胞与分子免疫掌盘盍i』II皿12QQ!Zil3l 文章编号:1007.8738(2001)02.131.02 催产素对BALB/c小鼠胸腺细胞增殖的促进作用 金亮,王百忍,段晓莉,鞠躬{第四军医大学神经科学研究所.陕西西安710032) 美键词:催产素;胸腺细胞;坩殖;神经免疫调节 中图分类号:11392文献标识码:A 摘要:目的研究催产紊(oxytociil-OT)对离体Ba...
【doc】催产素对BALB/c小鼠胸腺细胞增殖的促进作用
【doc】催产素对BALB/c小鼠胸腺细胞增殖的促进作用 催产素对BALB,c小鼠胸腺细胞增殖的促 进作用 ISSN1007.8738细胞与分子免疫掌盘盍i』II皿12QQ!Zil3l 文章编号:1007.8738(2001)02.131.02 催产素对BALB/c小鼠胸腺细胞增殖的促进作用 金亮,王百忍,段晓莉,鞠躬{第四军医大学神经科学研究所.陕西西安710032) 美键词:催产素;胸腺细胞;坩殖;神经免疫调节 中图分类号:11392文献标识码:A 摘要:目的研究催产紊(oxytociil-OT)对离体Balb/c 小鼠胸腺细胞增殖的影响.方法用’H-TdR掺人法.研究 在离体培养状态下不同浓度的0T对胸腺细胞增殖的影响. 结果在1×10g/1至1x10g/1的范围内0T可使胸腺 细胞增殖指数增加,在此范围之外对其增殖指数无明显影 响.结论在一定浓度范围内OT有促进胸腺细胞增殖的作 用. Theprem~liveeffectof埘岫Oil?leprolif- eralionoflhyimcrtesfromBalb/clvice. JIN‰WANGBM-mn,DUANXino?li口lju Gong InstituteofNeur~clenee,FourthMilitaryMedicalUniversity, Xi’aft710032,ShaanxiProvince,China K目?出:Oxytoein;thymocyte;proliferation;ReuFoimmu— noelodulation AlibiAhnTorevealtheeffectofoxytoeinORtheprolifer- ationof面viJ2othymoeyte0fBalb/cmou.M~thodsStudy theratesofdifferentconcentt’atlor~ofOTintheproliferationof thethymoeyteswiththe’H-TdRineo~orationmethod]P.~t.flts Oxy~oein.withtheconcentrationrangedfrom1x10g/Lto1× l0.g/Lw日abletoraisetheProliferativeIndex(PI)ofthe thymoeyteswhileotherconcentrationsofoxytothnhadnDsig- nillcameffectsORtheproliferation.Omdug~nOxytoclnisable topromotetheproliferation0fthymoeyteinvitrowithinace~ain raIeoneentratior~ 催产素(oxytocin,OT)是一种小肽分子,由9个 氨基酸构成,相对分子质量(肛)为1007,氨基酸序 收精日期:2000—08—23;俸回日期:2000—10—12 基盒项目:国家自然科学基金资助.No.32830170 作者简介垒竞(1973.),男,浙江湖州市人,硕士生 西安市长乐西蓐17号.Te1.{029)3374489 列为从羧基端至氨基端为Cys-Tyr.Ile.Gin.Asn.Cys. Pro.Leu.Gly,其中第1和第6位的半胱氨酸间形成 二硫键,使其分子呈环状结构.OT主要合成于哺 乳动物下丘脑的视上核,室旁核等核团的大细胞 神经元中,在背根神经节,交感神经椎旁节和生 殖系统的卵巢,睾丸等部位也有达.已知OT的 生理功能包括促妊娠期子宫收缩,促哺乳期乳腺 射乳,调节动物母性行为,社会行为及影响动物 的学习,记忆过程等. 近年来许多证据表明,OT还具有调节免疫功 能的作用.OT分子表达于胸腺上皮细胞表面, 和胸腺细胞表面的催产紊受体(oxytoemreceptor, OTR)结合,可诱导胸腺细胞的分化和成熟.此 外,OT还具有促进淋巴细胞葡萄糖代谢等作用. 我们以Balb/c小鼠胸腺细胞为模型,用H.TdR 掺人法研究了在离体培养状态下OT对胸腺细胞增 殖的影响及其量效关系,结果表明,在一定浓度 范围内OT有促胸腺细胞增殖的作用. 1材料和方法 I.I材料4wk龄Balb/c小鼠购自本校实验动物 中心;细胞培养用96孔板为Ntmc公司产品;无 血清培养液为Hyelone公司产品,RPMI1640培养 基为Gibco公司产品;OT是Sigma公司产品, H-TdR购自中科院上海原子能研究所. 1.2方法将4wk龄雌性Balb/c小鼠颈椎脱臼处 死,以无菌操作取出完整的胸腺.在无菌状态 下,用玻璃针芯轻研后.用RPMI1640不完全培 养液制成细胞悬液,离心(1000r/rain,10min). 弃上清,用无血清完全培养液(RPMI1640不完全 培养液稀释100倍)重悬,细胞密度为1.6×10 个/L.将细胞悬液加入96孔板中(150wL/孔), 置于37?,50mL/LCOz孵箱中孵育.48h后, 将OT用完全培养液稀释成10g/L至10g/L9 个浓度.取50稀释液加入各孔中,每个浓度 加入3个复孔,设只加50完全培养液作为阴 性对照.置于上述环境中孵育.继续培养12h后 将HTdR按O.5wCi的量加入各孔中,每孔50 “L.继续孵育6b后.用多头细胞收集仪收集孔内 ISSN1007—8738细胞与分子免疫学杂志 {JCeLlMolImmuno1)2001:17(2 样品于”9999”型玻璃纤维滤纸上,在红外烤箱中等物质对实验造成干扰;将小鼠胸腺细胞在无血 烤干后,用Beckman型液闪计数仪计数.清培养液中预培养48h.是为了细胞能适应此培 养环境. 2结果 在培养过程中,细胞生长状态良好.用液闪 计数仪计数10组不同浓度OT处理的细胞增殖水 平,并计算出OT浓度在1×10g/L至1×10g/L 时的均值相对于0g/L时的均值的增殖指数,绘 制OT浓度.增殖指数曲线图,见图1. 2?0 ,, E’. 蓄 呈1?2 当 董.一8 星Dl4 0 010’01O’01O’710’5.O’510’10o31O’210’ Concentrationofoxytocin(g/L) 围1~dblc小鼠胸腺细胞在不同OT浓度的增殖曲线 F1Prellf~’atlve删0f蜘硼帅0fB曲/c~iture m.0吐?d】VlII’IOIlS伽砒锄hl啦懈0f佩蛐 根据曲线图可看出,随着OT浓度的增加,胸 腺细胞增殖水平缓慢上升,在I×10g/L至1× 10g/L浓度区问迅速上升,并在浓度为1×10 g/L时达到峰值,并随后急剧下降,稳定在基线水 平. 3讨论 本实验中采用无血清培养液培养胸腺细胞, 目的是避免血清中可能存在的OT分子和其他激素 本实验结果表明.低浓度OT未见对胸腺细胞 的增殖有促进作用,而过高浓度的OT对胸腺细胞 的增殖可能又有抑制作用,只有在一个台适的浓 度范围内(1×10一1×10g/L)对胸腺细胞的增殖 有促进作用.此外,有文献报道).胸腺细胞中只 有前T细胞(Pie.Tcel1)膜表面有神经垂体激素受 体存在,包括OTR和v1型精氨酸加压素受体, 但前T细胞在胸腺中所占的比例有限,所以OT可 能只诱导前T细胞这一亚群的增殖. 以往的结果表明0,OT只表达在胸腺上皮细 胞胞膜外基质中,其与前T细胞膜表面的OTR受 体作用后,可诱导其分化,成熟.至今还未有关 于检测游离态的OT对离体培养的胸腺细胞增殖功 能影响的报道.在各类应激条件下”?.下丘脑 可分泌大量的OT,并可通过一定方式作用于包括 胸腺在内的中枢免疫器官和外周血中的免疫细 胞,调节它们的功能.我们采用常规的,H.TdR掺 人法,研究了不同浓度OT对胸腺细胞增殖功能的 影响.对进一步研究OT的神经免疫功能具有一定 的意义. 参考文献: [1]RobertFR.MartensH.c0n砌n.吐reeogmitionofhy. functionsdev~dopin$T~ells[JJ Dovlmmuaot.1992,2(2):131—140 【2JMar~msH.Koelm0,CharhtRC.Neamuhypo口lIysialpep- tidesstimulatethephosphorylalionofpre-Tedlfocaladhesionk/- nB[J】.Net,.weadocrlnolo~’,1998,67(4):282—289 【3JMm’tensH.Keeha0,Charl~RC,efPhospho州ationof Ieinsinducedinamu~nepro-T0eUlinehncerohypophysiMpep- tides[J~.Adr脚MedBiol,1998.449:247—249
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