教授教化片：若何用快速检测试纸条检测bt(cry1ab·1ac)转基因水稻[宝典]

教授教化片：若何用快速检测试纸条检测bt(cry1ab·1ac)转基因水稻[宝典] 教学片: 如何用快速检测试纸条检测Bt(Cry1Ab/1Ac)转基因水稻 视频地址: 基本常识 , 目前获得转基因生物安全证的两种转基因水稻(“华恢1号”和 “Bt汕优63”)都能够产生两种蛋白质Cry1Ac和Cry1Ab，在快 速检测过程中，样本中只要有两种中的任何一种蛋白质，试纸 条就会显示阳性。 , 此快速检测试纸条只能检测Cry1Ac和Cry1Ab两种蛋白质，即 使样本是其他的转基因品种，但是不能产生这两种蛋白质的话， 快速检测试纸条也没有作用。 , 所以，此试纸条不能检测转基因大豆，需要用专门的检测试纸条。 检测 1. 准备样本 2. 配制蛋白质提取液 3. 提取蛋白质 4. 快速检测 5. 结果 1.准备样品 , 将可疑的大米、稻种(去壳，约10-20粒)磨碎，尽量达到粉末 状。如果是水稻叶片(约3-4片)，需捣碎至泥浆状。 2.配制蛋白质提取液 , 将检测用的粉末和纯净水以1:10的比例(体积比)混合，充分 摇匀备用(约3分钟)。 , 容器可以选择10ml的塑料密封管。 , 配制完成后常温保存，当日配当日用。 3.提取蛋白质 , 将磨碎的样本和提取液以1:4的比例(体积比)混合，充分摇 匀(约1-2分钟)，混合均匀后静置备用。 , 容器可以选择1.5ml的塑料密封管。 4.快速检测 , 保持垂直方向将检测试纸条上标有“sample”的一端浸入样品提取 液中。试纸条浸入样品提取液的部分不要超过0.5cm。在整个 检测过 程中要保持试纸条始终浸在样品提取液中(3-5分钟即 可)。 5.结果分析 , 质控线一般会在3—5分钟内出现。最长的反应时间为20分钟， 在这段时间里最好将试纸条从样品提取液中取出。如果质控线 没有出现，那么本次检测失败。 , 测试线显现，说明样品为阳性。 , 测试线不显现，说明样品为阴性。 , 测试线的颜色变化与质控线的颜色变化一样，都是由红变紫。 , 检测试纸条需保存于4度低温条件，如在野外条件艰苦，尽量避 免暴露在高温下。 , 购买试纸 , 北京博欧实德生物技术有限公司 地址:北京朝阳区北苑路奥运媒体村天畅园1号楼C1-2006室[1 00107] , , 注:本片所述试纸仅能够检测含有Cry1Ab/1Ac转基因成分的转基因水稻，转基因大豆种子检测纸条须另外购买，详情可咨询北京博欧实德生物技术有限公司。 附:快速检测试纸条法在大豆转基因检测中的应用 来源:上海农业网 转基因食品的安全问题，特别是转基因食品对人及动物的健康，以及对生态环境的影响，一直是人们关注的焦点。2008年中国从美洲进口3000多万吨转基因大豆，出口欧美等国家40多万吨非转基因大豆，2009年一季度我国大豆的进出口量呈递增趋势，为加强大豆产品的食品安全管理，需要检验机构对其进行有效监控。 国内外转基因检测主要有三种方法，第一种是以核酸为基础的PCR检测方法，包括定性PCR、实时荧光定量PCR、PCR-ELISA半定量和基因芯片等方法;第二种是检测外源基因的达产物一蛋白质检测方法，分为试纸条、ELISA和蛋白芯片 三种方法;第三种是利用红外检测转基因产品化学及空间结构。以核酸为基础的PCR检测方法，是目前国内外检测生物技术产品最常用的方法，PCR方法具有准确、检测限低、适用范围广的特点，但需要的仪器设备昂贵，检测周期较长，因此需要一种快速检测方法来充实，满足大豆产品在种植、加工及贸易中的监控需要。目前，快速检测试纸条法能较好地对大豆产品进行检测，且检测结果准确、速度快、成本低，适合快速检测的需要。 快速检测试纸条法应用了双抗体夹心法，首先将CP4 EPSPS蛋白特异的抗体，偶连于显色试剂，并参入试纸条。当试纸条被插入含有CP4 EPSPS蛋白的植物组织的小量萃取物时，偶连抗体与蛋白之间就发生了结合，与偶连于显色试剂上的某些但不是全部抗体形成夹心物。膜片含有两个捕获区，一个捕获区可捕获结合的CP4 EPSPS蛋白，另一个捕获区可捕获显色试剂。当夹心物和未反应的显色试剂被膜片上的特定区捕获时，这些捕获区就显现出红色。若膜片上仅存在一条红色对照线，便说明受检样品为阴性样品，若存在两条线，便说明受检样品为阳性样品。 文章采用快速检测试纸条法与PCR方法，分别检测阴性大豆、不同国家阳性大豆、不同转基因含量的阳性大豆，比较两种方法检测结果的一致性，并对快速检测试纸条检测限进行评定，分析快速检测试纸条在大豆转基因检测中应用的可能性。 1材料与方法1.1材料及试剂 东北大豆;美国进口大豆;巴西进口大豆;阿根 廷进口大豆;无水乙醇:分析纯，市售;快速检测试纸条:美国SDI公司;量筒:100 mL’分度值1mL;锥形瓶:250 mL;一次性样品管:1.5 mL;一次性移液吸管:0.5 mL; GB/T19495.4- 2004《转基因产品检测核酸定性PCR检测方法》中所用材料与试剂。 1.2仪器 S/A，感量0.01 g，瑞士;实验磨:备有筛孔天平:Mettler Toledo PB1502 - 孔径为2.0mm的筛网，上海嘉定;PCR仪:PCR System 9700，美国;电泳仪:A- gageln mini，美国;凝胶成像仪:Uvitec，美国。 1.3测定方法 1.3.1 PCR法按GB/T19495.4 - 2004执行。 1.3.2快速检测试纸条法 (1)用实验磨将样品粉碎至90%以上通过2.0 mm筛网，称取约30 9试样于250mL锥形瓶中，加水100 mL，剧烈震荡20s，静置20 s。 (2)用一次性移液吸管吸取提取液0.5mL于一次性样品管中。 (3)将一条转基因快速检测试纸条插入样品管提取液中，静置5 min。 (4)试纸条上结果窗上出现一条红线证明为阴性大豆，出现两条红线为阳性大豆。 2结果与讨论 2.1两种方法测定阴性大豆的结果比较 用PGR法及快速检测试纸条法对东北大豆进行转基因测试，结果见表1。 结果表明，两种方法对阴性大豆进行转基因检测，可以取得相同的结果。 2.2两种方法测定阳性大豆的结果比较 用PCR法及快速检测试纸条法对进口大豆进行转基因测试，结果见表2~表4。 结果表明，两种方法对美国、巴西、阿根廷大豆进行转基因检测，结果均为阳性，可以取得相同的结果。 2.3不同转基因含量大豆的结果比较 将进口阳性大豆与国产阴性大豆按不同质量比进行混合，用快速检测试纸条法测定转基因含量，结果见表5。 结果表明，不同转基因含量的阳性大豆，用快速检测试纸条法进行检测，可以取得阳性检测结果，方法判定准确。 2.4检测限的确定 取转基因大豆与非转基因大豆按质量百分比进行混合，确定其检出限，结果表明快速检测试纸条法检出限可以达到0.1%。 3结论 采用快速检测试纸条法测定大豆转基因含量，测定时间仅需10 min，测定结果准确，与传统PCR方法相比，缩短了工作时间，提高了工作效率，节约了检测成本，检测材料对环境没有污染，可以推广使用。 丁耀魁，沈娟，马黎黎 (中国华粮物流集团北良有限公司，辽宁大连 116001) 粮油食品科技2010.2 江洪涛采集审核;程彬彬编辑上传。 关键字: 转基因 快速检测