HPLC法测定乳癖消帖膏中丹皮酚的含量

HPLC法测定乳癖消帖膏中丹皮酚的含量 2008年3月第3期中国民族医药杂志61 HPLC法测定乳癖消帖膏中丹皮酚的含量 内蒙古通辽市传染病医院(028000)那顺白乙拉 吉林省通榆县中医院(137200)陈红梅 内蒙古民族大学附属医院(O28000)杨辉 摘要:用高效液枉色谱法测定乳癖消帖膏中丹皮酚的含量.试验表明,本法线性关 系良好(r=0.9998),平均回收率为: 96.26%.RSD:=).39%,方法简便,准确,稳定性,重现性较好. 关键词:HPIZ~法;乳癖消帖膏;丹皮酚;含量 中图分类号:R291.2文献标识码:B文章编号:1006—6810(2008)03—0061—02 乳癖消帖膏是由木香,牡丹皮,赤芍,夏枯草,三七等 15味中药组成的膏药制剂.具有软坚散结,清热解毒,活 血止痛之功能.用于乳癖气滞血瘀症,症见乳房结块,胀 痛,压痛,乳腺囊性增生病见上述证候者.本试验对乳癖消 中牡丹皮所含的有效成分丹皮酚进行含量测定方法学考 察.得到较满意的准确度和精密度试验结果,说明本试验方 法是可行的,可作为乳癖消帖膏的质量控制方法. 1仪器和试剂 11仪器:岛津LC一10A型高效液相色谱仪(日本),SPD — VP紫外检测器,CLASS—VP色谱工作站,TP一300超声波 清洗机.色谱柱:shim—packVP—ODSC18柱(150×4.6mm. 粒度5pra).样品由内蒙古通辽市科尔沁药业提供. 1.2试剂与试药:甲醇(色谱纯,天津天大化学试剂厂);水 为重蒸馏水.其它试剂均为分析纯. 1.3对照品:丹皮酚(由中国药品生物制品检定所提供.供 含量测定用,编号:cr70f;一9r7o4);样品:由内蒙古通辽市科 尔沁药业提供.生产批号为20051118;20050315;20050708. 2色谱条件 流动相:甲醇一水(48:52);以十八烷基硅烷键合硅胶 为填充剂;流速1.Oml/min;柱温30?;检测波长为274nm; 进样量:lOp]. 3实验方法与结果 3.1对照品溶液的制备:精密称取丹皮酚对照品17.16rag. 置100ml容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得 (每lml含丹皮酚171.6). 3.2供试品溶液的制备:取本品4片,置具塞锥形瓶中,精 密加入甲醇50ml,称定重量,超声处理30分钟,冷却,再称 定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液 lOml,置25IIll量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0. 45pm)滤过,即得. 3.3线性关系的考察:分别精密量取对照品溶液0.25,1, 2,3,5,lOml,置25IIll量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇 匀.分别精密量取lOp]注入液相色谱仪,谱图及峰面 积值,以进样量(w:)为纵坐标,以峰面积值(A)为横坐 标,绘制曲线,回归方程为W=1.88287e一005X+0. 392254(r=0.9998),结果表明丹皮酚在进样量为1.716 68.64范围内呈良好的线性关系. 3.4精密度试验:精密量取丹皮酚对照品溶液(0. 020592m~)lOp],连续进样5次,测定丹皮酚峰面积值,结 果峰面积平均值1087441,RSD为0.87%. 3.5稳定性试验:取同一供试品溶液,每隔一定时间.0,2, 4,6,8小时,精密量取lOp]注入色谱仪,记录峰面积值.结 果平均峰面积1253697,RSD为1.2%,表明供试品溶液在8 小时内稳定性良好. 3.6重现性实验:取同一批号样品5份,每份4片,按照供 试品溶液制备项下方法操作并注入液相色谱仪,测定每份 含量,结果RSD为0.57%,表明本试验重现性良好.结果见 表1. 表1重量现性试验结果 3.7加样回收率试验:取已知含量(0.741mg/片)的样品 (批号:20050303)/5份,每份2片,分别精密加入对照品溶 液(0.1716mg/m1)lOml,按供试品溶液制备项下方法操作并 测定每份台量,计算回收率,结果平均回收率为96.26%. RSD为1.39%,结果见表2. 3.8样品分析:按上述色谱条件,取3批样品(批号分别为 20051118;20050315;20050708),照供试品溶液的制备方法, 各进样lOp],每批试样平行检Ijl:!f3次,以外标法计算含量. 该条件下丹皮酚的保留时间为10.9min.供试品含量测定 62中国民族医药杂志2008年3月第3期 结果见表3. 表2加样回收试验结果 3.9阴性对照试验:取按处方量并以相同工艺制备的阴性 l 量 对照品(缺牡丹皮),操作同样品分析项下方法,测得结果 为:阴性对照品色谱图中在与丹皮酚对照品色谱相对应的 保留时间处无色谱峰出现,表明其它组分对乳癣消帖膏中 丹皮酚的测定无干扰,对照品,样品和阴性样品色谱峰见图 1,2,3. 表3样品中丹皮酚的含量(n=3) 4讨论 4.1系统适用性试验:理论塔板数:N>4000;拖尾因子:T =1.04.检测过程中系统稳定. 4.2样品测定试验RSD<3.3.乳癖消帖膏中丹皮酚的含 量太低,影响检测的灵敏度,使得RSD值偏高. 4.3分析其原因,考虑本品是膏药剂,投料是牡丹皮药材 的75%乙醇提取物,并与其特殊复杂的辅料组成以及特殊 生产工艺有关,比如涂膏时需加热至80,85~C停留一定时 至 问,随着溶媒汽油的挥发,丹皮酚等挥发性成分必有损失. ,灵敏,准确,专属性强,故认为可作控制乳 4.4本法简便 癖消帖膏的检测方法. 参考文献 [1]中国药典[s].2005年版一部,187. [2]卫生部药品标准[M].中药成方制剂,1996.246. 2{X}7年7月27日收稿