儿童型脊髓性肌萎缩症的基因诊断

儿童型脊髓性肌萎缩症的基因诊断 第..卷量期O浙F江I太ANG学UN学IVE报RSI(TY压,M学EI版CA2001JOURNALOFZHEJIANGUNIVERSITY(MEDIAL)SCIENCES )VOI30No4200l 儿童型脊髓性肌萎缩症的基因诊断 周柏林,余钟声,水泉祥,尚世强 (浙江大学医学院附属儿童医院,浙江杭州310003) 摘要:目的:建立儿童型脊髓性肌萎缩症(SMA)的特异性基目诊断.方法:应用聚合醇链反应一限 制性片段长度多态性(PCR—RFLP)技术,对l1例临床诊断为SMA的惠儿及21例正常儿童的运 动神经元存活(SMN)基目进行了拴测.结果:1l例SMA惠儿的SMN基因外显子7均有缺失.21 例正常时照儿童均无SMN基因外显子7缺失.结论:应用PCR—RFLP技术对儿童型SMA忠儿进 行基因诊断,具有高度敏感性和特异性,简便易行. 关键词:肌萎缩,脊髓性/诊断;基因缺失 中图分类号:R746.4文献标识码:A文章编号:1008—9292(2001)04—0158—03 GeneDiagnosisofSpinalMuscularAtrophyinChildren ZHOU13o—lin,YUZhong—sheng,SHUIQuan—xiang,etal(TheAffiliat edChildren’Hospital, CoHegeofMedicalSciences,ZhejiangUniversity,Hangzhou310003,China) Abstract:Objective:Toestablishagenediagnosisassayforspinalmuscularatrophy(SMA)in children.Methods:Analysisofthesurvivialmotorneuron(SMN)genein11SMApatientsandin 21normalcontrolswasperformedbyusingpolymerasechainreaction—restr ictionfragmentlength polymorphism(PCR—RFLP)method.Results:Deletionofexon7inSMNgenewasfoundinall 1lSMApatients,whilenosuchchangewasfoundinnorma1controls.Conclusion:Itissensitive, specificandsimplebyusingPCR—RFLPtodetectthedeletionofSMNgenef orthegenetic diagnosisofSMAinchildren. Keywords:Muscularatrophy,spinal/diag;Genedeletion 儿童型脊髓性肌萎缩症(sMA)是儿童常 见的常染色体隐性遗传病.由于脊髓前角细胞 变性导致进行性.对称性肌肉萎缩及无力.通常 依据病史,体征,肌电图,肌肉活检等综合分析 作出临床诊断.与SMA有极高相关性的运动 神经元存活(sMN)基因缺失的检测,奠定了本 病的基因诊断.多数实验室采用聚合酶链反应 一 单链构象多态性(PCR—SSCP)检测,我们建立 了错配聚合酶链反应(PCR)法,结合限制性片 段长度多态性(RFLP)技术,对我院依据临床 诊断的u倒SMA患儿作SMN基因缺失的研 究,现如下. 1资料与方法 1.1临床资料l1倒SMA患儿均来自我院 神经科门诊或住院病例.男8倒,女3例.发病 年龄51d,4岁.临床表现为进行性四肢肌力, 肌张力减低,腱反射减弱或消失,有不同程度的 肌萎缩,均以近端肌群为着;血清CPK正常;肌 电图示运动神经原性损害;肌肉活检示肌纤维 不同程度的萎缩.家族史符合常染色体隐性遗 传的特点.按起病年龄和病情进展情况.本病分 为三型.本组I型8例.于6个月内起病,吸吮 及吞咽功能减弱,哭声低.不会坐,于10~14月 龄死亡;?型1例.于13月龄发病,能坐,站立 片刻.不能走,3岁龄死亡;I型2倒,于2,4 收稿日期:2000—05—22謦国日期:2000-10一Z5 作者俺介t周柏#(1946一),男.副主任医师,主要从事小儿神 经内科工作. ——,, i 浙江大学(医学腹)第3O卷 感染,大多1,2岁内死亡,儿科临床所见大多 为此型病例,本组11例中8例属此型.l,?型 较为少见,此二型虽可存活较长,有的可活到成 年,也都终生致残.传统诊断依据临床表现易误 诊.本组3倒I型患儿在外曾长期误为脑瘫,因 此有必要建立基因诊断予以确诊,也为产前基 因诊断奠定基础,从而防止患儿的降生,这是防 治本病的关键. 国外研究表明,SMA与SMN基因及神经 原性细胞凋亡抑制蛋白(NAIP)基因缺失有关. 其中sUN基因被认为是主要的功能基因拷 贝,位于端粒端,是SMA的决定基因{SMN 位于着丝端,无功能.SMN基因外显子7和8, 或仅外显子7拷贝纯合子缺失,SMAI型为 95,98,SMAl型为95,SMA?型为 8O,90,这表明检测SMN基因外显子7 的缺失即可检出大部分SMA患者].本组 l1例均有外显子7的缺失.NAIP基因位于 SMN基因的远端,不是SMA的决定基因,该 基因的缺失表明SMA基因定位区域内(5q12一 q14)缺失范围大,临床表型重;仅为单独的 SMN基因缺失,则示SMA基因定位区域内 (5q12一q14)缺失范围小,临床表型轻[2l”. 由于SMN与SMN仅只有5个硷基的 差别,对SMN进行检测时,需要排除sMN一 的干扰,我们应用错配PCR—RFLP技术检测 SMA患儿,引物中(SMN外显子7与SMN 的硷基差异邻近处)含有一个错配碱基,结果在 SMN”的PCR扩增产物上形成了DraI酶切位 点,使得检测结果较前几年采用的PCR—SSCP 技术更易辨别]. 我们应用错配PCR—RFLP技术,检测l1 例依据临床表现及非特异性实验检查诊断的 SMA患儿,均有SMN外显子7的缺失;而21 名正常儿童均无此缺失,提示该技术对本病的 诊断具有较高的特异性及敏感性,此方法简便, 实验结果容易判断,具有临床实际应用意义. 参考文献 [17昊璃萍,胡亚美,江载芳,主编诸福棠实.I~3L科学[M]. 第6版,北京:人民卫生出版杜,1996.1885—1887 [2]姜梅.小儿脊?性肌萎缩的分子遗传学研究进展[J]. 国外医学(JL科学舟册),1999,26(2);fi0—81 [3]VanderSteegeG,Grootseho[tenPM,VanderValiesP, etalPCR—hasedDNAtesttoconfirmclinicaldiagnosis ofautosomalrecessivespinalmuscularatrophy[J] Lancet,1995,345(8955)I985-986. [4]Lefeh~eS,BurgleL,ReboulletS,alldentificarion andcharacterigationaspinalmuscularatrophy determininggene[J].ll,1995,80(1)I155165 [5]RodriguesNR,CampbellL,OwenN,etal_pretl diagnosisofspinalmuscuiaratrophybygenedeletion analysis[J].Lancet,1995345(8986)I1049 [6]RoyN,Mahad?MS,MeleanM,eta1.Theenefor .eurona[individualswithspinalul?atrophy口]. Ceil,l995,80(1)l167—178. [7]李宁,沈定国进行性脊?性肌萎缩症的基因诊断研 究中华}.经科杂志,1998,81(6);345—347 [8]麻宏伟,王阳t宓真,等.脊?性肌萎缩意儿的NA1P 基因分析.中华医学遗传学杂志,1999,16(2)97.98. [9]BurieP,BurglenL,Clermont0teta1.Largescale deletio~ofthe5q13regionaspecifictowerding - Hoffmanndisease.JMedGenet,1996,33(4)281— 283. [责任编辑严少洁] (上接第152页) 参考文献 [1]EliasD,DebaeneBtDamEaE,eta1.TFeatm?tf peritonealearcinomatosishyintraperitoaealehemo— hyperthermiaIreliableandunreliableconcepts[J]. 1994{41(5):807—213 [2]高枫t陈利生t唐宗江,等.木中腹腔内沮热灌注化疗 联合治疗中晚期大脑癌[J].中华实验外科杂志,1995,12 (3)t151—188. [3]AIhe~sDS,YongL,MasonN,eta1.In~’trOeval?tin ofanticaacerdrugsagainstovarianc~ce$at conceatrationachievah[ehyintraperitonea[ admjnIstratI.n[J].SeminOneol,1985,18(3suppl4): 80—42. [4]孙念培,蔡志民,张超.进晨期大脑癌术后早期窿腔茬 洗化疗[J].中华肿瘤杂志,1998,20(3):204—205. [责任编辑黄晓花]