薄层扫描法测定首清颗粒中黄芪甲苷的含量

薄层扫描法测定首清颗粒中黄芪甲苷的含量 论文范文 题目:薄层扫描法测定首清颗粒中黄芪甲苷 的含量 编辑:司马小 作者:侯凤飞,张海鸣,曹杰,沈圣民,杜树山 【摘要】 目的 建立首清颗粒中黄芪甲苷含量的测定方法。方法 采用 薄层扫描法,硅胶G薄层预制板,氯仿-甲醇-水(13?6?2)10 ?以下放 置过夜的下层溶液为展开剂,测定波长530 nm,参比波长700 nm。结果 黄芪甲苷点样量在0.22，0.73 μg之间与吸收度积分值呈良好的线性 关系,平均回收率为97.72%,RSD,0.69%。结论 该法便捷、灵敏、准确, 可作为首清颗粒的质量控制方法。 【关键词】 首清颗粒,黄芪甲苷,薄层扫描法,含量测定 Abstract:Objective To estalish an accurate method for determining the content of astragaloside ? in Shouqing Granula. Method TLC scanner was selected to detect astragaloside ? with silica gela thin layer. The sample was separated by using chloroform-methanol-water (13?6?2) below 10 ? overnight with the under layer solution, λs,530 nm, λR,700 nm. Results The linear ranges of astragaloside ? was 0.22，0.73 μg, the average recovery was 97.72%, RSD=0.69%. Conclusion The method was simple and accurate, and can be used for the quality control of Shouqing Granula. Key words:Shouqing Granula,astragaloside ?,TLCS,content determination 首清颗粒具有补气养血、散风止痛之功效,可用于反复发作性紧张型头 痛,症见头痛隐隐、反复发作、遇劳加重、头晕、头脑昏沉、记忆力减 退、神疲、乏力、短气、心悸者。本试验采用薄层扫描法(TLCS),以黄 芪中有效成分黄芪甲苷为指标,进行质量控制研究。 1 仪器与试药 瑞士卡玛公司扫描仪:CAMAG TLC SCANNER 3,半自动点样器:CAMAG LINOMAT 5,数码照相机:CAMAG REPROSTAR 3,KQ-250DB型超声波清 洗器,昆山市超声清洗仪器厂。 首清颗粒(北京师范大学教育部资源药物研究中心提供,批号 20040301、20040302、20040303)。黄芪甲苷对照品由中国药品生物制 品检定所提供(批号0781-200109,供含量测定用)。硅胶G薄层预制板 (青岛海洋化工厂分厂),厚度0.20，0.25 mm。所用试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 薄层扫描条件 硅胶G薄层预制板,展开剂为氯仿-甲醇-水(13?6?2)10 ?以下放置过夜的下层溶液,上行展开,展距9.5 cm,显色剂为10%硫酸乙醇溶 液,105 ?加热至斑点显色清晰,测定参数:λS,530 nm,λR,700 nm。 2.2 供试品溶液的制备 取本品,研细,取约2.0 g,精密称定,置100 mL具塞锥形瓶中,分别加入甲醇100 mL、氨液1 mL,超声30 min(功率250 W,频率40 kHz),放冷,滤过,用甲醇30 mL洗涤残渣,合并甲醇液,回收至干,加水50 mL溶解,用水饱和的正丁醇萃取3次(40、30、30 mL),合并正丁醇液,用氨液洗涤3次(40、30、30 mL),弃去氨液,合并正丁醇层回收至干,用甲醇定容至10 mL,即得。 2.3 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品3.34 mg至10 mL量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,做为储备液。精密吸取储备液2 mL至10 mL量瓶中,加甲醇稀释并定容至刻度,摇匀,即得。 2.4 阴性供试品溶液的制备 按成品制剂方法制得缺黄芪药材的阴性样品制剂。取阴性样品制剂,研细,取约2.0 g,精密称定,按供试品溶液的制备方法制得阴性供试品溶液。 2.5 阴性干扰试验 精密吸取对照品溶液(0.0668 mg/mL)5、11 μL,供试品与阴性液各20 μL,交叉点样于同一硅胶G薄层预制板上,按前述色谱条件展开,晾干,显色测定。结果见图1。在与对照品色谱相应位置处,供试品具有相同位置的色谱峰,阴性供试品溶液在此峰位无吸收。 2.6 线性关系的考察 分别精密吸取黄芪甲苷对照品溶液(0.066 8 mg/mL)3、5、7、9、11 μL,分别点样于同一硅胶G薄层预制板上,按前述色谱条件测定。以峰面积为纵坐标、进样量为横坐标做回归计算,结果明,黄芪甲苷进样量在0.20，0.73 μg范围内线性关系良好,其线性回归方程为:Y,1 970.583 83，247.955 00X,r,0.999 3。 2.7 精密度试验 2.7.1 同板精密度试验考察 精密吸取供试品溶液7 μL,在同一硅胶G薄层预制板上,重复点样6次,按前述色谱条件测定,结果RSD,1.07%。 2.7.2 异板精密度试验考察 精密吸取供试品溶液20 μL,对照品溶液(0.066 8 mg/mL)3、11 μL,交叉点样于6块硅胶G薄层板上,按前述色谱条件测定,结果RSD,1.10%。 2.8 稳定性试验 取同一供试品溶液(批号20040301),按0、2、4、6、8 h时间间隔,分别测定峰面积,试验结果表明,供试品溶液制备后8 h内测定,含量无明显变化,RSD,1.61%,表明在此时间内供试品化学性质稳定。 2.9 重复性试验 精密称取首清颗粒细粉6份,按“2.2”项下方法制成供试品溶液,精密吸取供试品溶液20 μL与对照溶液(0.066 8 mg/mL)3、11 μL,交叉点样于同一硅胶G薄层预制板上,按前述色谱条件测定测定黄芪甲苷的含量,计算,结果RSD,3.30%。 2.10 加样回收率试验 精密称取已知准确含量的样品(批号20040301,含量0.014 5%)0.55 g, 加入浓度为0.066 8 mg/mL对照品溶液1 mL,按“2.2”项下方法制成供试品溶液,精密吸取供试品溶液20 μL与对照溶液(0.066 8 mg/mL)3、11 μL,交叉点样于同一硅胶G薄层预制板上。结果见表1。表1 回收率试验测定结果,略, 2.11 样品测定 取首清颗粒粉末约2.0 g,精密称定,按“2.2”项下方法制成供试品溶液。精密吸取供试品溶液20 μL与对照溶液(0.066 8 mg/mL)3、11 μL,交叉点样于同一硅胶G薄层预制板上。测定结果见表2。表2 首清颗粒含量测定结果(略) 3批产品黄芪甲苷含量平均值为1.13 mg/袋,按80%限度规定,暂定为首清颗粒中含黄芪甲苷不少于0.90 mg/袋。 3 讨论 在供试品溶液制备条件选择上,本试验对超声提取时间进行了试验,10、20、30、40 min做为样品制备的方法,结果表明,样品用甲醇为溶剂,提取时间为30 min,提取比较完全。 黄芪为本品方中的主要药材,黄芪甲苷是该药的主要有效成分,故以黄芪甲苷为指标进行含量测定,控制成品的质量。通过本次试验证明,TLCS法测定本品中黄芪甲苷含量精密度高,稳定性、重复性好,回收率高,阴性对照试验表明,制剂中其他成分对黄芪甲苷的测定无干扰,方法可行。 在优选工艺时,黄芪甲苷的测量方法采用TLCS法,样品制备采用甲醇超声、正丁醇萃取、氨液洗,目的是使黄芪中皂苷含有酯键类成分水解生成黄芪甲苷,通过上述处理,黄芪甲苷没有干扰,色谱斑点清晰,色谱分离度,重复性和可鉴别性得到了提高。 【参考文献】 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2005.249. 王 凡,魏国玲.TLCS法测定扶正解毒胶囊黄芪甲苷的含量[J].陕西中医,2006,27(4):483,485. 方 云,吴新安,赵 刚,等.TLC法测定柴黄胃宁颗粒中黄芪甲苷的含量[J].安徽医药,2006,10(6):432,433. 宋吉莲,张冬梅,刘 兵.薄层扫描法测定复方抗甲片中黄芪甲苷的含量[J].中成药,2005,27(1):101,103.