雷公藤红素的柱分离工艺研究 毕业论文

雷公藤红素的柱分离工艺研究 毕业论文 目录 中文摘要 ............................................................................................... 1 英文摘要 ............................................................................................... 2 第一章 绪论 .......................................................................................... 3 1.1雷公藤红素的理化性质及结构.......................................................................3 1.2 雷公藤红素的药理作用 ..................................................................................4 1.3 雷公藤红素研究进展......................................................................................4 1.4 论文研究的意义及目的 ..................................................................................5 第二章 雷公藤红素定性定量分析方法 ....................................................... 6 2.1 薄层色谱定性分析方法 ..................................................................................6 2.1.1 仪器与材料????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????6 2.1.2 对照品溶液的制备????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????6 2.1.3 供试品溶液的制备????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????6 2.2 高效液相色谱定量方法 ..................................................................................7 2.2.1 仪器与材料????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????7 2.2.2 HPLC色谱条件 .....................................................................................7 2.2.4 雷公藤红素对照品的紫外扫描图谱....................................................8 2.2.3 标准曲线的绘制 ..................................................................................8 2.3 样品中含量的计算方法 .........................................................................................9 第三章 南蛇藤中雷公藤红素的柱分离工艺考察 ........................................ 10 3.1 雷公藤红素超声波提取 ............................................................................... 10 3.2 甲醇超声波提取物浸膏预处理 ................................................................. 10 3.2.1 水-氯仿萃取实验 ............................................................................... 10 3.2.2 水-乙酸乙酯萃取实验....................................................................... 10 3.3柱分离梯度洗脱系统探索............................................................................ 11 3.3.1 硅胶吸附层析石油醚-乙酸乙酯洗脱系统考察 ............................... 11 3.3.2 硅胶吸附层析氯仿-甲醇洗脱系统考察 ........................................... 13 全文结论 ............................................................................................. 14 参考文献 ............................................................................................. 16 致谢 ................................................................................................... 17 1 中文摘要 本文确立了南蛇藤中雷公藤红素的薄层定性分析方法。层析条件为:硅胶GF，氯仿-甲醇(7:1)为展开剂。展槽中上行展开后在紫外检测器365nm和254nm254 下观测。 采用高效液相色谱进行定量分析。色谱柱为Kromasil C柱(200mm×4.6mm i.d.，18 5μm)，流动相为甲醇?1,醋酸(87?13，v/v)，等度洗脱，检测波长为425nm，流速1.0mL/min，柱温25?，r=0.9999，在1,50μg/mL范围内线性良好，方法学检测符合要求。 探索了南蛇藤药材中雷公藤红素的硅胶吸附柱层析工艺条件。对比甲醇-氯仿系统和石油醚-乙酸乙酯系统的洗脱结果，确定了以石油醚-乙酸乙酯为洗脱系统，洗脱顺序为1:0(2V)，5:1(2V)，1:1(10 V)。用薄层层析条件进行检测，000 判定含有雷公藤红素的流分。高效液相检测可以得到纯度90.6,的雷公藤红素。 关键词:南蛇藤;雷公藤红素;薄层层析;高效掖相色谱;吸附柱层析 1 ABSTRACT Thin-layer chromatography (TLC) of tripterine was studied. TLC condition was: silica gel GF as adsorbentchloroform:methanol (7:1) as developer. Tripterine 254, was developed upwards in the separation chamber and detected under 365nm and 254nm. The quantitative analysis of tripterine by HPLC was studied. An external standard method by HPLC with Zorbax C column as fixed phase and methano l-1% HAc 18 (87?13) as mobile phase was adopted. The detecion wavelength was 425 nm and the flow rate was 1.0 mL /min. The establishment of concentration and the peak area of the standard equation and samples of the formula, were the methods’ to establish Celastrus in tripterine. Silica gel adsorption chromatography of tripterine was studied.Eluant of silica gel adsorption column was petroleum ether-ethyl acetate. Elution gradient was 1:0(2V), 0 5:1(2V)，1:1(10 V). The purity of tripterine obtained was 90.6%. 00 Keywords: Celastrus; tripterine; Thin Layer Chromatography; High Performance Liquid Chromatography ; adsorption column chromatography 2 第一章 绪论 从中药特别是有毒中药中寻找抗肿瘤有效成分具有广阔的前景。南蛇藤系卫矛科南蛇腾属植物，分布广泛，药性辛温、其全草均可入药，有清热、祛风、除湿、活血、解毒、消肿等功效，常用于治疗风湿性关节炎、腰腿痛、筋骨痛、牙痛、闭经、痢疾跌打损伤、肠风痔漏、毒蛇咬伤等症。现代药理证实南蛇藤具有 [1]强大的抗炎镇痛和抗菌、抗病毒作用，更重要的是一些初步的实验证实其中的三萜类成分雷公藤红素具有较强的抗肿瘤活性，且抗肿瘤机理不同于现有抗肿瘤化疗药物，是通过抑制泛素-蛋白酶通道来阻止肿瘤的生长，是继紫杉醇之后又 [2]一高效低毒的抗肿瘤植物药。 但在现阶段，获得雷公藤红素的主要方法是从卫矛属植物药材中提取纯化。其提取物的成分复杂，除了目标成分外，还含有大量的其他成分。而用于药剂研究及医药生产的原料药需要高纯度的化合物。为了获得纯度高的组分，就需要对提取物进行进一步的分离纯化。 1.1雷公藤红素的理化性质及结构 雷公藤红素又名南蛇藤素、南蛇藤醇(Celastrol)，属于三萜类化合物，性质稳定，是南蛇藤及雷公藤药材中的主要有效成分之一。雷公藤红素主要存在于根皮中，去皮的饮片中雷公藤红素含量很低。 结构式如下图1-1: 图1-1 雷公藤红素结构式 3 Fig.1-1 Structural formula of tripterine 其在甲醇中溶解(室温)和易溶解(加热)。溶解度大小顺序为:甲醇>95%乙 [3]醇>无水乙醇>水>丙酮>乙酸乙酯>石油醚，石油醚:乙醚(1:2)，氯仿。最大吸收波长:λ = 425nm max 1.2 雷公藤红素的药理作用 目前雷公藤红素的药理研究比较多，其主要药理作用有抗炎、抗氧化作用，抗菌、抗病毒作用，抗生育活性，调节自身免疫及抗肿瘤活性。 [4]张丽娟等报道了南蛇藤素对肿瘤血管抑制作用。通过建立动物肿瘤模型，对南蛇藤素予以实验治疗，结合免疫组化，检测其抑制肿瘤率和肿瘤内血管密度，以及瘤体VEGF和bFGF的达的改变。实验研究发现南蛇藤素具有明显抑制S180肉瘤作用，降低VEGF、bFGF的表达可能是其抑制肿瘤血管形成的机制之一。 中国科学院武汉植物园的袁晓副研究员与美国韦恩大学研究人员合作，利用无毛裸鼠为实验动物，研究证实雷公藤中含量较高的一种单体成分――雷公藤红素具有抗肿瘤作用，且抗肿瘤机理不同于现有抗肿瘤化疗药物。据美国三位诺贝尔医学/ 生理学奖获得者共同提出的新理论，泛素-蛋白酶是细胞内蛋白质降解的重要通道，它在肿瘤生长与转移中起着关键性作用。据细胞分子学理论，调节细胞生长、信号转移、基因转录和凋亡等均由蛋白酶负责降解。故抑制泛素-蛋白酶通道即可阻止肿瘤的生长。根据上述新理论，美国一些制药公司率先开发出 [5,6,7]“蛋白酶抑制剂”类全新抗癌药物，而且在临床使用后疗效良好。 1.3 雷公藤红素研究进展 [8]1936年赵承暇等首次发现雷公腾红素，1998年WeiHe等报道了雷公藤红素类似物的合成工艺，而成熟的雷公藤红素合成工艺仍没有报道。目前获得雷公藤红素的主要方法是从卫矛属植物药材中提取纯化。 [9]袁晓等报道了从毛枝南蛇藤根皮中提取雷公藤红素的工艺。将南蛇藤根皮用丙酮冷浸，回收溶剂，所得的浸膏用氯仿回流提取，将所得的氯仿提取液再进 [10]行下一步的纯化。苗抗立对雷公藤根皮中三萜类化合物的研究中采用丙酮浸提、多次层析得到了雷公藤红素单体。 4 [11]夏焱等研究了从雷公藤中提取雷公藤红素的工艺。雷公藤药材粉末，用10倍量的甲醇索氏提取。提取液浓缩后加入3倍量的硅藻土拌样，烘干后，用氯仿超声提取3次，滤液合并。硅胶干法装柱，少许氯仿溶解样品，上样。用氯仿洗脱除杂后，用氯仿:甲醇(95:5)洗脱，流分合并浓缩，得雷公藤红素。 [12]Shihua W等考察了逆流色谱(Counter-current Chromatography, CCC)分离纯化工艺。将雷公藤的提取物上硅胶柱，石油醚-乙酸乙酯洗脱，流分再经逆流色谱进一步纯化得雷公藤红素纯品。 1.4 论文研究的意义及目的 据文献报道，雷公藤红素的抑瘤作用为65,,93,，超过美国科学家在20 世纪70 年代初发现了来自太平洋紫杉树皮中的紫杉醇。在雷公藤红素单独服用及与其它化疗药配伍使用中，尚未见不良反应的报道。据业内人士预测:雷公藤红素一旦获准上市，它将成为继紫杉醇之后又一个高效低毒的抗肿瘤植物药[13,14 ,15]。随着雷公藤红素抗癌机理被证明，雷公藤红素作为蛋白酶体抑制剂成为抗癌新药的热点，该化合物也将备受关注，具有广阔的市场前景。而雷公藤红素的相关报道中提取纯化工艺报道甚少，因此探究雷公藤红素提取纯化优化工艺既成了一种必要，更有助于推动雷公藤红素研究的进展，为其进入临床应用提供可能。 目前对雷公藤红素的报道主要集中在中药雷公藤的研究上，本文选择了卫矛属的另一种药材南蛇藤作为研究对象。对其甲醇超声波提取物浸膏中雷公藤红素的薄层色谱条件及硅胶柱吸附层析进行了探索，以期能提出、其分离纯化的可行性工艺，为雷公藤红素的进一步研究和生产提供参考依据。 5 第二章 雷公藤红素定性定量分析方法 2.1 薄层色谱(Thin Layer Chromatography, TLC)定性分析方法 2.1.1 仪器与材料 仪器:ZF-2型三用紫外仪 上海安亭电子仪器厂 药品试剂:薄层层析用硅胶GF 青岛海洋化工有限公254 司 氯仿，甲醇(分析纯) 山东禹王实业有限公司 对照品:雷公藤红素 (?98%) 中国生物制品检定所 样品:南蛇藤提取物及硅胶柱上洗脱下的流分 2.1.2 对照品溶液的制备 取雷公藤红素对照品适量，乙酸乙酯溶解，备用。 2.1.3 供试品溶液的制备 取南蛇藤提取物浸膏适量，乙酸乙酯溶解，备用。 硅胶柱层析洗脱的流分备用。 2.1.4 TLC条件 薄层板:薄层层析用硅胶GF254 展开系统:氯仿:甲醇,7:1 展开方式:展开槽中加入适量的展开剂，平衡10min后上行展开 检 测:当雷公藤红素点样量大时，薄层板在日光下观测有黄色条带;在 6 紫外检测器365nm和254nm下观测为暗色斑点，同时也可以观察到其它杂质成分的荧光点和暗点。 2.2 高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)定量方法 2.2.1 仪器与材料 仪器:L-2130型高效液相色谱仪 日本日立公司 L-2400型紫外检测器 日本日立公司 N-3000色谱工作站 浙江大学智能信息研究所 TU-1810型紫外可见分光光度 北京普析通用仪器公司 ALC-210.4型电子天平(0.1mg) Acculab Ohaus AR2130型电子天平(1mg) KQ3200E型超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司 试剂:甲醇(色谱纯) 山东禹王实业有限公司 对照品:雷公藤红素 (?98%) 中国生物制品检定所 [16] 2.2.2 HPLC色谱条件 色谱柱:Kromasil C柱 (200mm×4.6mm i.d , 5μm) 18 流动相:甲醇:1%醋酸(v/v),87:13 检测波长:425nm 流速:1.0mL/min 柱温:25? 2.2.3 雷公藤红素对照品的紫外扫描图谱 称取雷公藤红素对照品适量，甲醇溶解，在200,600nm波长范围内扫描， 7 见下图2-1。雷公藤红素在425nm附近有最大吸收峰，故选择425nm为检测波长。 图2-1 雷公藤红素紫外,可见光扫描 Fig.2 UV spectrum of tripterine 2.2.4 标准曲线的绘制 精密称取雷公藤红素对照品5.0mg，甲醇溶解，定量转移至100mL容量瓶中并定容，摇匀，备用，作为初始溶液。 表2-1 雷公藤红素标准品浓度,峰面积数据 Tab.2-1 Data of standard curve of Tripterine 浓度(μg/mL) 1 2 5 10 20 25 50 26953 44456 134728 316948 649101 825692 1650310 峰面积 26079 44967 139399 313676 648984 821935 1645210 26366 45163 135565 313812 645513 822312 1632760 平均 26466 44862 136564 314812 647866 823313 1642760 分别精密量取配制的对照品初始溶液0.5、1mL至25mL容量瓶中并定容，分别精密量取1、2、4、5mL至10mL容量瓶中并定容，摇匀。将配制的这些不同浓度梯度的溶液及初始溶液过0.45μm微孔滤膜。分别20μL进样，HPLC分析得相应 8 的峰面积，以峰面积(A)对质量浓度(C)进行线性回归，得雷公藤红素的线性回归方程:A=33274C,17614，r=0.9999，雷公藤红素对照品溶液浓度在1,50μg/mL范围内线性关系良好。浓度和峰面积数据见表1，标准曲线见图2-2。 1.80E+06y = 33274x - 1761421.60E+06R = 0.9998 1.40E+06 1.20E+06 1.00E+06A8.00E+05 6.00E+05 4.00E+05 2.00E+05 0.00E+00 0102030405060C(μg/mL) 图2-2 雷公藤红素标准曲线 Fig.2-2 Standard curve of tripterine 2.3 样品中含量的计算方法 雷公藤红素的量稀释倍数×浸膏中雷公藤红素的含量,，100% 浸膏的量 9 第三章 南蛇藤中雷公藤红素的柱分离工艺考察 通过各种提取技术所得到的中药提取物中的成分比较复杂，需要进一步的处理才可以得到纯度较高的化合物。本章考察了南社藤超声波提取物浸膏的预处理工艺，并探索了雷公藤红素柱层析分离条件，以期能得到雷公藤红素简便可行的的分离纯化工艺。 3.1 雷公藤红素超声波提取 用1:10倍量的甲醇溶剂，在超声功率400W，单次辐射时间8s(间歇时间5s)，超声总时间40min的条件下得甲醇超声波提取物浸膏。 3.2 甲醇超声波提取物浸膏预处理 由于南蛇藤药材甲醇超声波提取物浸膏中会含有大量极性大物质，而雷公藤红素为中等极性物质，因此可以以水为萃取剂，通过两相萃取除去极性大的组分如糖类、蛋白及鞣质等，将样品进行初步纯化、富集。 3.2.1 水-氯仿萃取实验 取甲醇超声波提取物浸膏适量，加入10倍量的蒸馏水(调节至合适的pH)，再加入等量氯仿，氯仿层乳化现象严重。 3.2.2 水-乙酸乙酯萃取实验 取甲醇超声波提取物所得浸膏适量，加入10倍量的蒸馏水(调节至合适的pH)，再加入等量的乙酸乙酯，震荡，摇匀，静置2h，取出乙酸乙酯层。再向水相补入等量乙酸乙酯，重复上面的操作5次，将5次所得的乙酸乙酯层合并定容。精密量取适量进行分析，表4-1为预处理工艺前后浸膏中雷公藤红素总量和雷公藤红素含量变化数据。 表3-1 预处理前后浸膏中雷公藤红素总量和含量数据 Tab.3-1 Data of total amount and contents of tripterine in extractum and pretreatment extractum 10 样品说明 雷公藤红素总量(mg) 雷公藤红素含量(%) 提取物浓缩所得浸膏 13.6487 0.568 经预处理后浸膏 13.1692 2.14 小结:从上表3-1可以看出，甲醇超声波提取物浸膏经过水-乙酸乙酯两相少量多次处理，目标成分得到富集，浸膏中雷公藤红素的含量提高了近3倍，雷公藤红素的回收率为96%左右，而且浸膏粘度降低，有利于柱层析工艺的进行。从而选择水-乙酸乙酯两相萃取进行样品的预处理。 3.3柱分离梯度洗脱系统探索 雷公藤红素在结构上有羧基基团，故选用硅胶作为吸附剂，薄层检测条件为依据，以此检测定性鉴定不同洗脱系统冲柱子时所得到的流分中雷公藤红素和其它成分。参照薄层色谱条件，乙酸乙酯对雷公藤红素的洗脱力较大，故而柱层析除了探索薄层优化色谱条件氯仿-甲醇系统，也探索了石油醚-乙酸乙酯系统。 3.3.1 硅胶吸附层析石油醚-乙酸乙酯洗脱系统考察 1)装柱 称取15g硅胶(200-300目)，加入干硅胶体积一倍的石油醚，用玻璃棒充分搅拌调成糊浆状，沿层析柱内壁，徐徐灌入柱中，同时打开下端活塞，让洗脱液石油醚缓缓滴出，并注意在灌浆过程中不能干柱，柱面上保持一定的液面高度，用吸耳球均匀施力敲打柱子让硅胶自由沉降而均匀填实。过夜平衡，待柱子高度 [17]稳定后，测定柱子的保留体积V=27ml。 0 2)上样 雷公藤红素在石油醚中的溶解度较小，故采用干法上样。称取0.3g硅胶(200-300目)，将预处理后的样品溶于乙酸乙酯，与硅胶拌样，在红外灯下挥发掉溶剂，调节柱的液面至硅胶上层大约1cm左右，将拌样轻轻地添加到硅胶柱的上部。在柱子顶部放入少许棉花，防止洗脱剂在加入柱子内部时将硅胶顶部冲起[171。 3)柱层析洗脱预实验 11 采用石油醚-乙酸乙酯系统系统，分别各以1:0;10:1;8:1;6:1;3:1;1:1; 1:2;1:4两个柱体积进行洗脱，从而逐步调节石油醚和乙酸乙酯的比例来调节洗脱剂的洗脱能力。 样品经硅胶吸附柱层析分离时，其色带明显，柱分离色带示意图如下图3-1， 图4-1 石油醚-乙酸乙酯洗脱示意图 Fig.3-1 Schematic diagram of elution process by petroleum ether-ethyl acetate gradient 参照薄层色谱定性分析条件进行检测，在洗脱剂比例为1:4时检测到雷公藤红素，说明当洗脱剂极性小于洗脱剂比例1:4的极性时，雷公藤红素即在柱子内随流动相移动，通过掖相检测，基本确定雷公藤红素所在色带。后续实验以雷公藤红素色带的移动作为观测，调整洗脱剂的配比和各梯度时洗脱量。经过多次预实验探索，在洗脱剂比例为5:1时，雷公藤红素所在的色带开始随着柱子方向移动，但移动缓慢，当调节洗脱剂比例在5:1和1:1之间时，洗脱剂对雷公藤红素的洗脱能力变化不大，雷公藤红素色带移动速度缓慢。洗脱剂比例大于1:2时，溶剂的洗脱能力太大，使得雷公藤红素色带与后边的色带重合，分离效果不好，而带入杂质。 4)柱层析洗脱预实验小结 经过预实验研究，确定了南蛇藤药材中雷公藤红素柱分离洗脱梯度如下表3-2。以此洗脱梯度重复硅胶吸附柱层析实验，其实验结果稳定，具有重现性。 表3-2 石油醚-乙酸乙酯洗脱系统柱分离结果 Tab.3-2 Result of column chromatography eluted by petroleum ether-ethyl acetate gradient 流份 洗脱系统 说明 12 1# ～全部合并 石油醚 洗脱2V0 2# 洗脱2V～溶剂的最前沿有黄色色带 石油醚:乙酸乙酯=5:1 0 淡黄色色带 石油醚:乙酸乙酯=1:1 3#,6# 深红色色带 …… 7#,40# 淡黄色色带 石油醚:乙酸乙酯=1:2 41#,76# 黄绿色色带 …… 77#,90# 深褐色色带 …… 91#,103# 5)实验 根据表4-2安排实验，用试管收集流分(10ml/管)，将流分间隔点样，以氯仿:甲醇=7:1在层析槽中上行展开，薄层板在365nm和274nm紫外灯下观测，合并含有雷公藤红素的流分。雷公藤红素集中的流分为6#,50#，其中10#在红素前端有荧光物质。 将6#,14#,15#,30#和31#-50#分别合并，减压蒸馏,回收溶剂，浓缩成浸膏，通过HPLC测浸膏中雷公藤红素含量分为6.0%，90.7%与46.6%。 3.3.2 硅胶吸附层析氯仿-甲醇洗脱系统考察 (1)装柱 方法同石油醚-乙酸乙酯系统湿法装柱 1)装柱 方法同石油醚-乙酸乙酯系统湿法装柱。 2)上样 [13]由于雷公藤红素在氯仿中有较大的溶解度，故采用湿法上样。将预处理后的浸膏样品用少许氯仿溶解。先将柱子内的洗脱剂冲至与硅胶柱顶部相切的位置，用胶头滴管将氯仿溶解的样品直接加到柱子顶端，待样品溶液液面与柱子顶部再次相切的时候，加入少许的氯仿冲洗柱子内壁，待所有的样品全部转移吸附到硅胶柱子上时，开始洗脱。在硅胶柱的顶端放入少许的棉花，防止硅胶柱顶被溶液冲起。 3)洗脱 表3-2 氯仿-甲醇洗脱系统柱分离结果 Tab.3-2 Result of column chromatography eluted by chloroform-methanol gradient 13 流份 洗脱系统 说明 氯仿 溶剂前沿为黄色色带 1#,4# 氯仿:甲醇=100:1 褐色色带 5#,15# …… 硅胶柱氯仿-甲醇系统洗脱，色带现象如示意图4-5，原图如附录4. 图3-2 氯仿-甲醇洗脱示意图 Fig.3-2 Schematic diagram of elution process by chloroform-methanol gradient 4)小结 如图3-2，2为雷公藤红素色带。与图3-1比较，本图的色带2为混合色带，说明雷公藤红素未能分开。说明氯仿-甲醇系统分离度较差，故确定石油醚-乙酸乙酯系统为南蛇藤药材提取物浸膏的洗脱系统。 14 全文结论 1.确定了雷公藤红素薄层检测定性分析方法，即以薄层层析用硅胶GF作254为吸附剂，氯仿-甲醇(7:1)系统为展开剂，在展开槽中上行展开，在紫外灯254nm和365nm下检测雷公藤红素斑点。 2.确定了南蛇藤药材中雷公藤红素的HPLC含量测定方法:色谱柱为Kromasil C18柱(200mm×4.6mm i.d.，5μm)，流动相为甲醇?1,醋酸(87?13，v/v)，等度洗脱，检测波长为425nm，流速1.0mL/min，柱温25?。在此条件下，得到雷公藤红素的峰面积(A)和相应浓度(C)的线性方程A=33274C,17614,r=0.9999，在1,50μg/mL范围内线性良好，方法学检测符合要求。 3.建立了雷公藤红素的乙酸乙酯-水萃取除杂工艺。以10倍量的蒸馏水(调节pH)溶解雷公藤红素提取物浸膏，以乙酸乙酯为萃取剂，采用少量多次的原则， 次，除去了浸膏中极性大的物质，使浸膏粘度明显以与水等量的乙酸乙酯萃取5 降低。 4.优化了雷公藤红素的柱层析纯化工艺条件。以石油醚-乙酸乙酯洗脱系统为洗脱剂，洗脱顺序为1:0(2V)，5:1(2V)，1:1(10 V)。合并目标流分6#,14#，000 经减压浓缩，真空干燥至恒重， HPLC测定，浸膏中雷公藤红素的含量为90.7%。 15 参考文献 [1]南蛇藤提取物抗肿瘤作用的实验研究 张舰 学士论文 无锡市医药科技情报部) [2] 开发雷公藤单体成分新药市场前景广阔徐铮奎( [3] 张立平,靳风柱.雷公藤红素提取工艺的研究[J].中华医学全科杂志,2004.3(2):63-64 [4] 张丽娟,朱润庆,费雁,等.南蛇藤素对肿瘤血管的抑制作用[J].肿瘤防治研究,2005. 32(11):719-720 [5] Anthony C.Allison, Ramon Cacabelos, Valter R.M. et al. Celastrol, a potent antioxidant and anti-inflammatory drug, as a possible treatment for Alzheimer’s disease. Prog. Neuro-Psychop-harmacol. & Biol. psychiat, 2001.25:1341-1357 [6]王明安,李增民,陈馥衡.南蛇藤根皮化学成分的研究[J].北京农业大学学 报,1994.20(4):438 [7] Huanjie Yang, Di Chen, Qiuzhi Cindy Cui, Xiao Yuan,et al. Celastrol, a Triterpene Extracted from the Chinese "Thunder of God Vine," Is a Potent Proteasome Inhibitor and Suppresses Human Prostate Cancer Growth in Nude Mice. Cancer Res,2006.66: 4758-4765. [8]Wei He, Fu-Chih Huang, Ashvin Gavai,etal.Novel cytokine release inhibitors. part ?: Truncated analogs of celastrol[J].Bioorganic &medicinal Chemistry Letters,1998.8:3659-3664 [9]袁晓,卢大炎,王国亮,等.毛枝南蛇藤根皮中南蛇藤素得分离鉴定及含量测定.武汉植物 学研究,1992.20(4) [10]苗抗立,张晓康,董颖.雷公藤根皮三萜成分研究[J].天然产物研究与开 发,1999.12(4):1-7 [11]夏焱,王文燕,张彦文,等.HPLC法测定雷公藤及其片剂中雷公藤红素[J].中草药, 2005.36(8):1154-1156 [12]Shihua Wu, Cuirong Sun, Kuiwu Wang,et.al. Preparative isolation and purification of celastrol from Celastrus orbiculatus Thunb. By a new counter-current chromatography method with an upright coil planet centrifuge. Journal of Chromatography A,2004.1028:171-174 [13] “雷公藤”红素抗癌研究受关注[N].中国西部科技,2006.12:12 [14] 武汉科学家首次发现雷公藤有望成为抗癌新药[N].中国制药息,2006.22(9):15 [15]中药雷公藤红素抗癌机理被证实[N].天然产物分离,2006.4(3):18-19 16 [16] HPLC 法测定雷公藤及其片剂中雷公藤红素夏 焱1, 王文燕2, 张彦文3, 贺江萍1, 高文远1, 段宏泉3a(11 天津大学药学院, 天津 300027; 21 天津药物研究院, 天津 300193; 31 天津医科大学药学院, 天津 300070) [17]中华人民共和国药典[S].北京:化学工业出版社，附录28 17 18