Glypican-3免疫组化在肝穿刺活检肝细胞癌诊断的价值

Glypican-3免疫组化在肝穿刺活检肝细胞癌诊断的价值 Glypican-3免疫组化在肝穿刺活检肝细胞 癌诊断的价值 二oo九年第三期莘夏臀蕖 着OriginaIArticIe GIypican一3免疫粗化在肝穿刺 活榆肝徊胞癌诊断的佰值 TheDiagnosticValueofGlypican一3Immun0hist0chemistryf0rHepatocellularCarcinomainLiVerNeedleBiopsy 蕖玉清文剑明黄香婷隙建勇章潆真冼麓芳 YEYuqjngWENJjanmjngHUANGXjangting CHENJianyOngWElJlezhenXlANLifang 澳朗镜湖臀院病理科 DepartmentOfPathOIOgy,KiangWuHOspitaI,Macau. 中固分颓虢:R735.9文献檩裁碣:A文章编虢:1818—0086(2009)03—221—05 摘要:目的磷脂酰肌醇蛋白聚糖一3(GPc3) 是一棰硫酸乙酰肝素蛋白聚糖,馑在肝细胞癌(hep— atocellularcarcinoma,Hcc)患者的血清中升高,而在 正常人和良性肝腻疾病患者升高.此文探封GPc3 免疫组化在肝穿刺活榆中断HCc的儇值.方法 采用免疫组化榆测41例Hcc,7例肝局窀结筒增生 或局窀肝细胞异型增生,4例肝硬化,4例病毒性肝 炎或未兄病燮肝组绒,4例赡管癌,21例耱移癌 GPc3(1G12克隆)表连,并毅性和性封照.结果 80.5%的Hcc(33,41例)GPC3呈性反虑.相反, 40例非HcC肝穿刺病例,包括肝局宦结箭增生或 局窀肝细胞异型增生,肝硬化,病毒性肝炎或未兄病 燮肝组绒,月詹管癌和鹑移癌cPC3均属险性.GPc3 免疫组化榆测在肝穿刺活榆Hcc断的敏感性和 特异性分别属80.5%和100%.结GPc3免疫组 化是肝穿刺活榆断HcC的良好指针,也是匾别其 它肝臆良性疾病和蒋移癌的鐾别断指针. 网键匍:肝穿刺活榆;GPc3;免疫组化;肝细胞癌 Abstract:ObjectiVeGlypican3(CPC3)isahepamn sulflatepmte0ycanwhichiselevatedinthese兀Jm 0fpatientswithhepatocellularcaI?in0ma(HCC),hut no,inhealthyblooddon0rs,0rpatjentswithbenign liverdisease.Thisstudyexpl0restheValue0fGPC3 expressi0nflnrdiagn0sis0fHCCinliverneedle hi0psybyimmun0hist0chemistry.MethOdsArchival materialinliverneedlebi0psiesfrom41patients withHCC,7f0caln0dularhyperplasia0rfncalliver celldysplasia,4cirrh0sis,4ViI_alhepatitis0runIe— markablelivertissue,4ch0langi0carcin0ma,21pa— tientswithmetastatictum0rs.werestudied.All slideswerestainedwithGPC3—1Gl2antibodywith appropriatepositiveandnegativecontmls.ResuIts IntheHCCgr0up,GPC3positiVestainingwas f0undin33/4l(80.5%)samples.Inc0ntrast,al140 non—HCCcases0fliverbi叩sies,includjngf0ca1 nodularhypeI-plasiaorfncallivercelldysplasia,cir— rhosis,ViraIhepatitisorunIemarkablelivertissue, cholan百0cainoma,andmetastatictumors,displayed negatiVestaining.Thesensitivityandspeci6city0f GPC3inHCCwere80.5%and100%respectively. COncIusiOnsGPC3immun0hist0chemistIyisa valuablediagn0sticmarkerfl0rhepat0ce儿ularcarci— nomain1iverneedlehi0psy.Thus,thediagn0stic utilityofGPC3inliverneedlebi0psyaidsindis— tinction0fHCCf_r0mmetastatictum0rsandbenign liverlesi0ns. KeywOrds:LiVerneedlehi0psy;Glypican一3;Im— munohistochemistry;hepat0cellularcarcin0ma 一 22l一 荤夏臀蕖二oo九年第三期 肝细胞癌(hepat0celllllarcarcinoma,Hcc)是人 颊常兄的恶性膜瘤,我囡是HCC高强的园家,每年 超遇10葛人死于HCC[1].隐床上,Hcc的断有 于血清AFP榆测,影像挚榆查或肝穿刺病理活榆, 後者是最可靠的断方法.然而,肝穿刺活榆的组缄 少,加上Hcc的分化程度不一和形悲各异,镜下有 睛很鞋舆肝臆其它占位性病燮如肝硬化,局窀性结 箭性增生(f0caln0dularhyperplasia,FNH)和局窀性 肝细胞异型增生(f0ca1liverceUdysplasia,LcD),赡 管癌以及柬源于其它器官的肝耱移癌珏别.在病理 上,封疑禺Hcc的穿刺活榆,可以造行AFP,Hep— Patl,cD34等免疫组化染色协助衿断.然而,AFP的 性率约在30%,HepPat1馑能税明是肝细胞源性, 而cD34榆测肝寅血管也祗能提供Hcc诊断参考, 欠缺特异性.因此,在肝穿刺活榆,急需一桓特异性 的檩志物用于Hcc断.最近,研究霰现磷脂酰肌 醇蛋白聚糖一3(glypican一3,GPc3)免疫组化榆测是 HcC的特异性檩物f2,3】.本文用GPc3免疫组化 榆测肝穿刺活榆檩本,探封GPC3在HCc病理断 的意羲. 1材料舆方法 1.1病例收集:收集澳镜湖臀院病理科和中山大孥 附属第一臀院病理科2006,2008年的肝穿刺檩本 共8l例,患者年龄40,69威,平均40崴,男4l例, 固l肝 女40例.所獾得的肝穿刺组臧行福雨属林固定,石 蟾包埋,切片和HE染色.徭病理轸断磋定4l例 HCC,7例局宦性结筋性增生(FNH)或局窀性肝细胞 异型增生(LcD),4例肝硬化,4例肝炎或未兄病燮 的肝组绒,4例赡管癌,21例肝蒋移癌,後者包括有 鼻咽癌,结踢,胃癌,胰腺癌,乳腺癌,卵巢浆液性囊 腺癌和柬源不明的腺癌. 1.2免疫组化:免疫组化采用HRP多聚髓弑剖盒 (Cat.N0.87—8963,SuperPicTureTMpolymerdetec— ti0nkit.ZymedLah0rat0ries,CA,USA).人Clypi— can一3抗髓工作液(GPC3,clonelG12)膳自美圆 BioM0saics公司(Cat.N0.B0134R).每例肝穿刺组 绒切取4fm厚切片,抗原经EDTApH8.0高壑锅煮 沸修後虞理,然後连行GPc3免疫组化染色遇程.最 後DAB颢色,蘸木精後染和中性树腾封固.GPC3免 疫反虑结果分属陲性和性(固1),完全没有颞色 属陲性,胞耍中有稀疏棕褐色颗粒状反虑禺l+,胞 贸中有鞍密集的颗粒状反虑,伴有部分胞膜反虑餍 2+,而胞耍和包膜有强烈反虑焉3+.另外,作局辅助 断,每例根掾需要连行HepPat—l,cD34,cK7, CK19,CK20,CEA,ER,PR等免疫组化染色和嗜银 绒维组化染色,作焉膪管癌或肝耱移癌断的依掳. 1.3统孥分析:采用sPss10.O软件封癌组缄分化 程度舆GPc3的免疫反鹰程度连行统擘x.榆簸. 八(;l,('1免疫化,没】譬f-包娲f…));n胞髓r{?彳J稀疏栋弼包牝状J乏艘玛(1(,()): (胞r1虫j{,?0瞒包肌三,伴仃膏分胞腆腹臆玛嬲'2r(2()fJ一);j)舱嚣包J摸j曲删的 稍包f蝎3?) 固A.GPc3免疫组化完全没有颞色局隆l生(10?D×);B.胞管中有稀疏棕褐色颗粒状反虑焉 防陛+(1o0×);c.胞管中有强弱不一的棕褐色颗粒状反鹰,伴有部分胞膜反臆属踢性2+ (200×);D胞蜇和包膜有强烈的棕褐色反鹰属防胜3+(20O×). 一 222— 二oo九年第三期莘夏臀蔡 固2肝穿刺活榆中等分化HCC的GPc3免疫组化反虑 固A属中等分化Hcc,癌细胞呈多眉肝细胞索状排列,其同可兄搪张的血寅檬结槽(HE,200×);圆B届同一 病例的GPC3免疫组化反虑,癌细胞胞和包膜呈强性反虑(200×). 表181例肝穿刺活检各獯病燮GPC3免疫组化反臆 表2可兄,cPC一3的免疫反虑舆HCc组绒分化程度阴(p>0.05).但在8例呈隆l生反虑的Hcc中,4例分 化程度扇高分化,2例届中分化,1例属低分化,1例焉未分化癌,提示GPc一3蛋白除性表连的Hcc主要禺高 分化(4/4例,5O%).另一方面,GPC一3防『生的病例大多敷属中分化癌(25/33例,75.8%),高分化(6/33例)和低 分化(2/33例)分别占18.2%和6.0%. 在一些高分化Hcc的病例中,有睛癌窀很小,颞微镜下舆艟瘤旁肝组绒不易匾别,但虑用GPc一3免疫组化染 色,能很好地颞示癌组绒窀的存在和筢圉(固3). 表241例HCCGPC3免疫组化反庶舆癌组绒分化的阴系 统孥榆验,c2=l1.18,p>0.05 固3肝穿刺活榆高分化HCC的GPC3免疫组化反虑 国A属肝穿刺组绒,固上方有小部分组绒属高分化Hcc,但在形憋上不易舆其下的 癌旁肝组绒匾别(HE, 200×).国B禺同一部位的GPc3免疫组化反虑,癌细胞胞和包膜呈强性反虑,明颞 突出了癌组缄的位置 和箍圉(200×). 一 223— 苹夏臀蕖二oo九年第三期 2结果 cPc3免疫组化馑在Hcc呈性反臆(国2). 41例Hcc中,33例呈不同程度性(80.5%),8例 呈隆I生(19.5%).其馀40例非Hcc病例,包括l5例 肝脏病燮,如肝炎,肝硬化,FNH,FLcD,GPC一3均属 除性(1()(】%).4例瞻管癌,2l例肝蒋移癌包括鹑移 性鼻咽癌,结踢,胃癌,胰腺癌,乳腺癌,卵巢浆液性 囊腺癌和一些来源尚不清楚的腺癌,GPc3全部属陲 性(兑表1). 3封 磷脂酰肌醇蛋白聚糖一3(glvan一3,GPC3)是 硫酸肝素蛋白多糖家族,共有6倜家族成具 (GPcl,GPc6).GPG3基位于xq26.1,基因座物是 一 獯细胞结合蛋白,通遇糖基一磷脂酰肌糖(gJyco syl—ph0sphati(1vlin0sit01)锚定在细胞表面.GP3在细 胞增生中有负筋作.}_}j和撙凋亡作用.因此 GPc3在斡多总性膻瘤包括瞻管癌,同皮瘤,卯巢癌, 乳腺癌表连下调【5—8】.然而,在肝腋,GPC3的表连 方式舆AFP相同,祗存胚胎肝组绒中大量表连,m 生後不再具有活性.在HCC,GPC3的表连重新激 活.因此,GPc3也是一往胚胎癌基冈(on(?0tal geI1e).GPG3通遇激活典wnf通路,促遘wIlts及 其信虢通路的相互作用而刺激髓内和髓外的HcC 细胞生长ll0】.目前已测到GPG3基因和蛋白祗在HCc 患者血清…l和癌细胞中表连,在细针穿刺Hcc细胞 孥断的敏感度和特异性分别连90%和l0(】%而 在肝硬化,肝囊腌,慢性脆管炎和正常肝属隆j生,l. l大J此GPc3被届是Hcc的分子棵物和潜在的 生物治瘵靶黠. 此文研究疆琨,在肝占位性病燮的穿刺活榆中, 鑫管不是全部的HCc的(C3蛋白都届踢性,但 GPc3祗在HcC呈I生反虑,而在肝贼其它病燮包 括癌旁肝组娥,肝硬化,FNH,FLcD,赡管癌以及常 兄耱移癌如鼻咽癌,结赐,胃癌,胰腺癌,乳腺癌,卵 巢浆液性囊腺癌和来源尚不清楚的腺癌均属陲性. 最令人典蕾的是,一些高分化Hcc穿刺活榆组绒, 镜下辫以舆其旁的肝组撼相匾别,但在GPC3免疫 组化染色中,能清楚地颗示癌组皴的存在和箍圈.本 组榆测结果颞示,在肝穿刺活榆组绒中,GPc3免疫 组化榆测可作属Hcc的螨助断,其敏感度和特异 性分别连80.5%和100%.因此,GPc3也是肝细胞癌 一 224一 和肝耱移癌良好的鉴别指针,即使後者在形憋上舆 HCC相似. 不幸的是,并不是所有的Hcc的GPC3免疫组 化都禺性.也斡一些高分化的肝癌细胞GPC3基 因尚未被激活,又或肝未分化的肝癌细胞GPC3表 逵重新丧失.本组中唯一1例镜下表现届肉瘤檬的 肝未分化癌,GPc3表连隆陡,暗示GPc3表逵再次 丧失的可能,运一假设有待更多的病例榆测寅. 目前,GPc3基因在Hcc被重新激活的原因尚不清 楚,有必要逵行基因的功能和控研究,也有于 封人颧其它癌症逛行大规模的榆测.如果碓定cPC3 祗在HCc表连,那幺GPc3不但可作属HCc断的 特异性指针,遮可以作属Hcc的特异性生物治瘵靶 黠 参考文献: [1JDesmetVJ,R0saiJ.Tum0rsandtum0rIikec0ndi一 【i0ns/,RosaiJlJ】.SuI售i(1alPatho10gy.M0shy,2o04:994. 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