【word】 不同精液稀释粉与保存温度对猪精液的保存效果

【word】 不同精液稀释粉与保存温度对猪精液的保存效果 不同精液稀释粉与保存温度对猪精液的保 存效果 ? 52?《上海畜牧兽医通讯》2009年第2期 不同精液稀释粉与保存温度对猪精液的保存效果 俞湘麟吴昊晏曹建国孙东东 (1上海市动物疫病预防控制中心201103 韩盛利张佩华吴金林朱永军 2上海市农业科学院畜牧兽医研究所201106) 稀释精液的保存时间依稀释液及保存环境的不同而有 很大差别,能够保证其活率在0.7的时限一般为5d【1.精 子活力在0.5级以上才可用于人工授精【2-47,也有认为需达 到0.6级以上】.目前规模化猪场在实施人工授精技术时 大多采用商品化的营养稀释粉,但由于供应渠道众多,采购 时往往忽视商品的技术参数,把短效当成长效使用,或配制 不精确,放置时间过长,这样就得不到应有的效果.本试验 探讨不同的精液营养稀释粉在不同的保存温度下对猪精液 保存效果的观察. 1材料与方法 1.1精液采集与测试时间 6头种公猪精液取自上海市3个种猪场,公猪耳号分别 是:长白猪4009,杜洛克猪ll7—2,130—1,391,700,1406. 检测由专职人员负责.测试时间自2006年11月13日 至12月813止. 1.2精液营养稀释粉 1.2.1精液稀释粉:采用不同时效的4种精液稀释粉,市售 的长效,中效,短效和自配稀释粉.自配稀释粉为:葡萄糖 27.5柠檬酸三钠6.9g,碳酸氢钠1.0g,乙二胺四乙酸二 钠2.35g,柠檬酸2.9g,三羟基氨基甲烷5.65g. 1.2.2稀释液配制:市售稀释液配制按照产品使用进行. 自配稀释粉溶于1000ml蒸馏水中,自配好的稀释液使用前 加入庆大霉素注射液tOml/2支. 1.3主要仪器 显微恒温板,恒温冰箱,意大利产MediChimica精液密 度测定仪,精密分析天平及其它试验常规仪器. 1.4试验设计 按常规采精法采集6头公猪的合格精液,用MediChimi— ca精液密度测定仪检测原精精子数,分别按每1O0ml含40 亿有效精子数进行稀释,每头公猪精液取4份,计24份.稀 释时严格控制稀释液温度和原精温度相一致,缓慢加入,稀 释过程在15rain内完成.精液稀释完成后,标记,密封并用 毛巾裹上一同置于17?恒温冰箱内带回. 4份稀释精液分别保存于12,17,20,25?恒温冰箱内, 观察0,7d的精子活力和精子学形态的保存效果,每天上, 下午观察2次,每种营养稀释液重复6次. 1.5精液品质检查 1.5.1精子活力:检查时将稀释精液预热至37?,取10, 100HI置干净的载玻片上,用22mrfl盖玻片盖上,在400倍 显微镜下观察10个不同视野,分别记录精子活动状况.采 用1O级制评力法估测视野中直线运动的精子占总精子的百 分率,例有70%的精子呈前进运动,则活力为0.7,以此类推. 1.5.2精子活率:用10mI试管取伊红染液(1%浓度)lmI, 加入精液0.2ml,置37?水浴锅中恒温浸染20min,取1滴 伊红染后的精液,再滴加1滴5%苯胺黑或苯胺蓝混匀染色 后抹片.用显微镜在400倍下观察,死精子染为红色,活精 子不着色.每个抹片观察200个以上精子,得到活率,以 “%”示. 2结果 利用Micr0S.ftexcel2000软件对不同稀释液处理的精液 在不同保存温度下的保存时间,保存时间I}缶界点精子活力和 存活率进行数据统计. 2.1精子活力 4种不同营养稀释液稀释的精液,分别保存于12,17,20, 25?恒温冰箱内,观察0,7d的精子活力,其结果如表1. 表1不同稀释精液在不同保存温度下的精子活力比较(单位:?,级) 2.2精子活率 4种不同营养稀释液稀释的精液,保存予l7?恒温冰箱 内.染色镜检0,7d的精子形态,其结果如表2. 表2不同稀释液对稀释精液保存的精子活率比较 3小结与讨论 3.1适宜的保存温度 猪精液对温度较为敏感,温度较高时(25?),可能增强 了精子的运动量,消耗能量大,加剧精子衰老过程,存活时间 相对短些;温度较低时(12?)保存效果也很差,据报道猪精 子对低温很敏感,只能耐受15?以上的温度,这涉及膜对温 度的敏感性.本次测试结果表明以l7?恒温保存为最适宜, 与报道相符.但短效稀释粉和白配的稀释粉稀释的精液也 可适当降低保存温度,有待进一步研讨. 3.2适宜的保存时间 目前普遍认为精子活力在O.5级以上,也有认为需达到 0.6级,精子活率0.7以上才能保证输精质量,所以在此以活 力0.5级,活率0.7时的保存时间为参照,比较不同稀释粉 对精液的保存效果. 测试表明精液保存时间与产品特性相吻合,精子活力 《上海畜牧兽医通讯》2009年第2期?53? 猪口蹄疫.型合成肽疫苗免疫效果试验 张明(江苏省昆山市畜牧兽医站215300) 目前防制口蹄疫是采用常规灭活疫苗进行免疫预防,但 灭活苗免疫后常出现食欲减退,体温升高等不良反应.免疫 效价持续时间不长.我们对猪口蹄疫0型合成肽疫苗从其 免疫原性,安全性,抗体持续性进行了试验和I临床应用,结果 较满意. 1材料与方法 1.1材料 1.1.1试验动物:选择昆山市种猪场梅山猪中相同待生产 日期,生产性能相近的6头母猪,对其生产的仔猪按其免疫 程序进行初免,二免,对每头仔猪唯一编号.并在有关乡镇 选择了若干具有不同免疫背景的猪场进行了合成肽免疫与 监测. 1.1.2试验疫苗:某生物科技股份有限公司生产的猪O型 口蹄疫灭活浓缩苗,批号为08020l5J;上海某有限公司生产 的猪合成肽.型口蹄疫苗,批号为20080201. l.1.3试剂:O型口蹄疫液相阻断ELISA试剂盒,口蹄疫 阴,阳性血清(北京世纪元亨动物防疫技术有限公司生产); 口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体ELISA试剂盒(上海优耐特 生物医药有限公司生产). 1.2方法 1.2.1分组:在种猪场试验的每头母猪所生的仔猪归为一 组,一共6组.A,B,C三组为合成肽疫苗免疫组,D,E,F三 组为浓缩灭活苗免疫组 1.2.2免疫时间和剂量:口蹄疫40日龄首免,90日龄二次 免疫;采用厂家推荐剂量由场兽医实施免疫,其他疫苗按常 规免疫程序进行. 1.2.3检测方法按试剂盒说明书进行(过程略). 表1VP1结构蛋白抗体ELISA检测抗体水平的消长规律 注:本次试验阳性的OD值判定界为>024. 2结果 2.1用猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体ELISA试剂对 A,B,C三组免疫后的血清进行检测,从表1可以看出,合成 肽疫苗首免后3周平均抗体水平较高,抗体平均合格率达 80%以上,二免2周后抗体一直维持在较高水平,且合格率 达100%. 2.2用液相阻断ELISA试剂对浓缩灭活疫苗免疫后的血 清进行检测,由表2可以看出,首免3周抗体水平仍不高且 抗体合格率较低,二免2周后抗体水平升高,但抗体合格率 并不是很理想. 表2液相阻断ELISA检测抗体的消长规律 注:抗体效价?128,判为阳性. 2.3不同乡镇猪场的试验结果参考如表3 表3不同乡镇送检的猪.型口蹄疫血清检测结果 3小结 合成肽组在同等条件下的免疫合格率明显高于浓缩灭 活苗组.经乡镇送检的血清样品检测结果合成肽疫苗效价 也高于浓缩灭活苗,且养殖户普遍反应合成肽疫苗注射后不 良反应明显减少.从检测方法及成本等多方面情况看,合成 肽的检测试剂盒比浓缩苗的液相阻断试剂盒操作更方便,快 捷和高效,成本也低于后者,值得推广应用. 驴驴鲫蚋曲驴曲曲i蚋驴曲弛驰 0.5级时,长效稀释粉稀释的精液在17,2O?时可保存5.09 , 5.36d,中效稀释粉稀释的精液在l2,l7?时可保存3.O8 , 4.12d,短效稀释粉稀释的精液在12,l7?时可保存3.11 , 3.12d,自配稀释粉稀释的精液在12,17’C时同样可保存 3.10,3.18d(表3). 表3保持精子活力0.5级时的保存天数 但稀释后的精液,精子活率衰弱很快.在17?保存条件 下精子活率0.7时,长效稀释粉稀释的精液可保存3.07d, 中效稀释粉稀释的精液保存3.0d,短效稀释粉稀释的精液 保存2.09d,自配稀释粉稀释的精液保存2.07d(表4). 表4精子活率0.7耐的保存天数 参考文献 (1]施学仕.猪人工授精新技术简述.猪业科学,2007,(5):43 [2]吕学斌,龚建军,应三成,等公猪精液长效稀释液配方研究.西南 农业,2000,(z1) (3]鲜红,郑鸿培猪精液常温保存稀释液配方筛选试验.畜禽业. 2004,(1):56,57 [4]何兰花.周美华,陆少华,等.猪精液常温保存的试验黑龙江动物 繁殖,2005,(4):8,9 [5]张菊仙.猪人II:授精的实验室操作规程.云南农业,2007,(6):21 [6]蔡臣广,罗旭芳.李明军.等.不同精子密度对母猪繁殖性能的影 响.养猪,2003,(5):7,8