高效液相色谱法测定炙甘草和炙甘草汤中甘草次酸的含量

高效液相色谱法测定炙甘草和炙甘草汤中甘草次酸的含量 word格式论文 高效液相色谱法测定炙甘草和炙甘草汤 中甘草次酸的含量 作者,张淑萍,田嘉铭,白雪梅,李旺 【摘要】 目的利用高效液相色谱,HPLC,法测定炙甘草和炙甘草汤中甘草次酸的含量。 色谱柱为YWG-C18,250 mm×4.6 mm,10 μm),以乙腈-5%醋酸水,65?35)为流动相,检测波长为250 nm,流速为1.0 ml?min-1。结果甘草次酸对照品浓度在9.375,300 mg?ml-1范围内线性关系良好,回归方程,A=31.545C-82.030(n=6, r=0.999 1),炙甘草加样回收率为99.81%,炙甘草汤为100.28%。结论HPLC法准确可靠,可为控制炙甘草和炙甘草汤质量提供检测依据。 【关键词】 炙甘草,炙甘草汤,甘草次酸,高效液相色谱法 word格式论文 Abstract,ObjectiveTo determine the glycyrrhetinic contents in Zhi Gancao root and Zhi Gancao Decoction by HPLC. MethodsYWG-C18 column (250 mm×4.6 mm,10 μm) was used with Acetonitrile and 5% Acetic acid-water as mobile phase. The detection wavelength was 250 nm, and the flow rate was 1.0 ml?min-1. Results The linear relationship was good in the range of 9.375,300 mg?ml-1. The regression equation was:A=31.545C-82.030(n=6,r=0.999 1), the average recovery rate of Zhi Gancai and Zhi Gancao decoction were 99.81% and 100.28% respectively. Conclusion HPLC method is accurate and valuable for the quality control of Zhi Gancao and Zhi Gancao decoction. Key words,Zhi Gancao; Zhi Gancao decoction; Glycyrrhetinic acid; HPLC 炙甘草汤出自汉代张仲景的《伤寒论》,为 治疗 “心动悸、脉结代”的古代 名方,由炙甘草、生姜、桂枝、人参、生地黄、阿胶、麦门冬、麻子仁、大枣组 成。近年来,大量的实验 研究 证明,炙甘草汤确有抗心律失常的作用,对各种 心脏疾病所致的心律失常均有较好的疗效,且药理作用广泛而持久,极具开发价 word格式论文 值,1,。炙甘草为炙甘草汤的君药,甘草次酸为甘草提取物的有效成分之一。 目前 文献 报道多为测定甘草酸的含量,而测定甘草次酸的含量的方法少见报道,2,。为了探讨中药主要单体在中药配伍中的变化 规律 ,实验采用HPLC法对炙甘草和炙甘草汤中甘草次酸的含量进行了测定,为炙甘草汤的复方制剂研究提供一定的实验依据。 1 仪器与试药 1.1 仪器 高效液相色谱仪,HP1100,美国Agilent。包括在线脱气机,四元泵,柱温箱,紫外检测器,3D化学工作站,,A/D 电子 天平,1/10万,日本,,756紫外分光光度仪,上海分析仪器总厂,,超声波清洗器,KQ-500B,江苏省昆山市超声波仪器有限公司,。 1.2 试药 word格式论文 甘草次酸对照品, 中国 药品生物制品检定所,,甲醇,色谱纯,美国,,乙腈,色谱纯,天津科密欧,,蒸馏水为本室自制,其他试剂均为分析纯。方剂中九味中药均购自河北北方学院中医门诊部,并按照《中国药典》,XXXX年版,各单味药标准进行检定。 2 方法与结果 2.1 色谱条件色谱柱YWG-C18,250 mm×4.6 mm,10 μm),流动相为乙腈?5%的醋酸水=65?35,流速,1ml?min-1,检测波长,250 nm,柱温,25?,进样量,20 μl。 2.2 对照品溶液的制备精密秤取一定量的甘草次酸对照品,置5 ml容量瓶中,加流动相溶液稀释至刻度摇匀,配成1 mg/ml甘草次酸对照品溶液备用。 2.3 供试品溶液的制备样品?为炙甘草汤,按传统工艺煎煮两次,合并煎煮液浓缩成0.1 g/ml,含炙甘草,的溶液,样品?为炙甘草单味药材按上述 方法 制成0.5 g/ml,含炙甘草,的溶液。精密吸取样品?、?各2 ml,分别加入6 ml甲醇进行醇沉,离心5000 r/min 5 min,上清液过0.45 μm滤膜备用。 word格式论文 2.4 阴性对照实验按炙甘草汤处方比例制成缺炙甘草的阴性对照品,依照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。 2.5 线性关系观察精密吸取上述甘草次酸对照品溶液18.75,37.5,75,150,300,600 μl分别置2 ml容量瓶中,加流动相溶液稀释至刻度,摇匀,按“2.1”项分别进样20 μl进行测定。以甘草次酸含量,C,为纵坐标,峰面积,A,为横坐标,得线性回归方程,A=31.545C-82.030,r=0.999 1(n=6),结果明甘草次酸含量在9.375,300 mg?ml-1范围内,本法线性关系良好。 2.6 精密度实验精密吸取上述对照品溶液,按“2.1”项重复进样6次,峰面积的RSD为1.3%,表明本法精密度良好。 2.7 重复性考察取同一批药材样品,按样品制备方法平行制备5份,按“2.1”项进行测定。炙甘草中草次酸含量的RSD为1.98%,炙甘草汤中甘草次酸含量的RSD为2.03%,表明重现性良好。 word格式论文 2.8 回收率实验精密秤取己知含量的炙甘草和炙甘草汤方药材粉末适量,分别定量加入甘草次酸对照品,按照供试品溶液的制备方法操作,按“2.1”项进行测定,结果见表1。表1 加样回收率实验结果,略, 2.9 样品测定精密吸取供试品溶液稀释至合适浓度,按“2.1”项进行测定,代入回归方程, 计算 炙甘草和炙甘草中甘草次酸的含量,结果见表2,色谱图见图1。表2 炙甘草和炙甘草汤中甘草次酸的含量,略, 3 讨论 3.1 流动相的选择实验选用了不同的流动相比例,结果表明在现用流动相比例下甘草次酸出峰时间适中,分离度最好。 3.2 波长的选择用756MC分光光度仪对炙甘草和炙甘草汤进行全波长扫描,结果显示在250 nm处均有较高的吸收峰。 炙甘草汤中甘草次酸的含量高于炙甘草, 分析 其原因,可能是复方中的其 word格式论文 他成分对目标成分有增溶作用,或复方中的其它药材也含有目标成分,结果有待于进一步深入 研究 。 【 参考 文献 】 ,1,郭春雨,宋 威,刘 芳,等.炙甘草汤抗心律失常的活性成分及药理研究概况,J,.长春中医学院学报,XXXX年,董阿玲.国内对甘草化学成分的研究进展,J,.中草药,1999,30,4,,245.