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【doc】补肾药治疗骨关节病的实验研究

2017-11-24 7页 doc 21KB 6阅读

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【doc】补肾药治疗骨关节病的实验研究【doc】补肾药治疗骨关节病的实验研究 补肾药治疗骨关节病的实验研究 中国中医骨伤籽杂志1989年第5卷第3期 实验研究 [论着] 补.肾药治疗骨关节病的实验研究 中国中医研究院骨伤科研究所丁蛙华陈宝兴赵湘洪 ExperimentalStudiesonTreatmentof0steoarthritis ByDrynaria(RenalTnnicDrugs) DingJi?huaetal ChinaAcademy0rTraditionalChineseedicine S'~NOPSIS:Thepurpose...
【doc】补肾药治疗骨关节病的实验研究
【doc】补肾药治疗骨关节病的实验研究 补肾药治疗骨关节病的实验研究 中国中医骨伤籽杂志1989年第5卷第3期 实验研究 [论着] 补.肾药治疗骨关节病的实验研究 中国中医研究院骨伤科研究所丁蛙华陈宝兴赵湘洪 ExperimentalStudiesonTreatmentof0steoarthritis ByDrynaria(RenalTnnicDrugs) DingJi?huaetal ChinaAcademy0rTraditionalChineseedicine S'~NOPSIS:Thepurposeofthesestudiesistoobservetheeffectofrenaltonic medicationsfor0Bte0arthritiB.Therearetwostepsinourresearchwork:the firstisthepreexperiment,whichismakingaosteoarthritismodelofhip joint,fromnormalquadrupedratstobipeda】rats,thesecondstepistoobserve thepathologicchangesoftheexpermeuta]groups(feedingdryuaria)audcontrol groups(nodrugs),byusinglightmicroscope.scanningelectronmicroscopeand transmissionelectronmicroscope.Themorbidity.pathologicchangesandtime ofonsetoftheexperimentalgroupsarelower,milderandlaterthanthecontrol groupsrespectively. 内容提要;本实验的日的是观察补肾药对骨关节病的作用.实验分两十步骤: 第一步预实验是将正常四肢膳大鼠制成双后肢大鼠.致使其髋关节产生骨关节病; 第二步实验是在成功的动物模型上,将16OR双后肢大鼠,分为投补肾药的实验组 和 不投药的对照组.分别用光镜,透射电镜和扫描电镜来进行观察,发现补肾药骨碎 补可使实验动物骨关节病的发病率降低,发病时问推迟,发病程度轻,而对照组 的动物则发病率明显增高,发病时间早,发病程度严重. "肾主骨"为中医骨伤科重要的基本理 论,我们根据"髓者,肾精所生,精足则髓 足,蔼在骨内,髓足则骨强","肾通精髓, 故台骨也"这个指导思想,用朴肾药来治疗骨 关节病,观察用药前后骨关节病的病理变化. 实验分两个步骤第一步先制成患骨关 节病的动物模型;第二步用补肾药骨碎朴来 治疗,现察治疗后的病理变化. C.W.Goff等曾用双后肢的小白鼠 束进行骨科疾病的研究,他们主要是观察脊 柱的病理改变,而我们则是用双后肢大白鼠 来观察股骨头软骨面的退行性病理改变. 材料与 用Wistar种大白鼠,在出生后1周内, 结扎其双前肢和尾部,以形成双后肢的大白 鼠动物标本.结扎了90只雄性太白鼠,成功 了60只,运用其中30只作为实验组,另用30 只正常四肢雄性大白鼠作为对照组.两组动 物在相同情况下喂养,于生后3及6个月, 先后两批分别将动物称重,用脱颈法处死, 取两侧股骨头标本,左侧供光镜(LM)及 透射电镜(TEM)观察,右倒完整的股骨 头作扫描电镜(SEM)观察. 供LM现察的组织块,在Bouin液内固 定后,用4%EDTA脱钙,75,190%乙醇 脱水,石腊包埋,作4,5毫微米,HE染 色.供TEM现察的组织块,用4%戊二醛 固定,5%硝酸脱钙,再用1%硪酸进行后 3 中国医骨伤科杂志1989年第5巷第3期 固定,用618环氧树脂包埋,然后用LKB切 片机做半超薄切片,Giemsa定位染色后,做 超薄切片(500A),用醋酸铀及枸缘酸铅双 染色,Hitachi--500TEM观察. 右侧股骨头标本先用生理盐水冲洗,再 用2.5%戊二醛固定两小时,用75,100%乙 醇来脱水,经临界点干燥,喷金后,用Hit? achi--520作SEM观察. 结果 一 LM观察所见正常对照组的关节 软骨,可清楚地见到层,移行层放射层, 钙化层及软骨下骨质,放射层及钙化层之间 可清楚地见到潮线.实验组的异常所见为: (1)关节软骨面表层变薄;(2)软骨下骨质 增厚;(3)软骨面原纤维变性及裂隙{(4) 潮线区水平裂隙(5)软骨基质内假性囊肿 形成;(6)软骨表层被纤维血管层覆盖及软 骨细胞聚集(见表1)o 二TEM观察所见对照组正常四肢 大白鼠股骨头的关节软骨面上,表层软骨细 胞为长梭形,与关节面平行,呈2—3层排 列,其表面有多数突起,细胞核占据细胞的 大部分,粗面内质网及线粒体为数不多,偶 尔可见到高尔基复合体.中层(移行层与放 射层)的软骨细胞渐呈圆形或椭圆形,其粗 面内质网较表层增多,其间可见到许多线粒 体和空泡.正常的关节软骨面在TEM观察 下并非完全光滑,成团的胶原纤维丝可以突 出表面,正常的表层软骨基质的纤维丝是分 层排列的,各层之间的纤维丝大致互呈直角. 中层的胶原纤维丝可为直,曲或螺旋形.深层 的胶原纤维有明显的周期带,且呈平行排列. 实验组的股骨头标本,可见到软骨细胞 明显的退行性改变,以及软骨基质的胶原纤 维发生紊乱,退行性改变先从细胞质萎缩开 始,继而粗面内质网扩大,细胞小器消失, 细胞内微丝增加,有时形成团状,这些微丝 有可能是软骨细胞退变过程中形成的纤维瘢 痕,细胞内可出现大量糖元,此外尚可见到 脂滴.退变再进一步发展时,细胞膜则破裂, 细胞离解为多数嗜硪酸的短柱体或颗粒,各 层的胶原纤维都呈紊乱状态,与正常的软骨 基质的情况呈鲜明的对比,放射层的胶原纤 维虽然仍保留其周期性,但其周径大小不一, 排列方向紊乱,有的可能已折断: 三,SEM观察所见关节软骨面在 SEM观察下变异很大,一个关节的不同部 位,或各个不同的关节皆有差异.为了易于 对照,我们的实验观察限于圆韧带750毫微米 的周围区,现将所观察到的病变分为四级: 第一级为正常的软骨面,有多数凹形陷窝和 突起;第二级变化为胶原纤维丝的暴露;第 三级变化是胶原纤维丝的丢失,以及关节表 面出现多数裂隙;第四级变化为胶原纤维完 全丢失,软骨细胞的隐窝完全暴露(见表2). 根据光镜,透射电镜及扫描电镜对实验 组及对照组的观察,说明双后肢大白鼠髋关 节的骨关节病的病理变化表现明显,动物模 型是成功的. 第二步用补肾药骨碎补来治疗患骨关节 病的动物模型,分别用LM,TEM,SEM 来观察实验组和对照组的病理变化. 实验组及对照组股骨头标本的光镜所见 E:实验蛆【l5)N:对组(I5 4 材料与方法 一 ,药物本实验所用骨碎补为水龙科, 中华槲蕨属的炮炙品成人用量为0.3g/kg, 大鼠用药量为成人量25,15O倍,汁算出75g /kg,log/kg,2~/kg50g/kg等四个梯度差 的剂量组,骨碎补单味药水煎剂胃灌饲给药 二,动物模型按前法将160只Wistar 雄性大白鼠制成双后肢动物模型. 三,实验步骤将160只双后肢大鼠随机 分成80只给药实验组,80只给水对照组.生 后3个月开始给药,在给药后1个月,2个 月,3个月,先后分3批处死实验组和对照 组的大鼠,每批4O只,实验组和对照组各 20只.又将给药组20只大鼠分成四组,每组 5只,按不同药量灌饲.为了检验药物的可 2扫描电镜所见 动物年龄(月) 电镜所见级别36 ENEN E最后聩鼠N:正常四肫 3生存期4个月(投药1个月) 组别正常发病合计发病率:. 注.x=3.84P'"0 4生存期5个月(投药2个月? 中国中医骨伤科杂志1989年第5卷第3船 重复性,另设给药二个月的重复组,其中实 验和对照组亦各为20只.同时,另取l6只正 5生存期6个月(投药3个月) :X=653P<005 6生存期5个月(重复组J 总发病率 组别lE常发病合计发病率(%) 两{ _l盥 台f 3l8O船.8 658081.3 96l6o 给药组不同月份发病的程度 5 中国中医骨伤科杂志1989年第5卷第3捌 常四肢大鼠,作正常对照. 结果 一 ,LM观察所见:分为四级. 一 级:软骨膜平整无损裂,软骨层厚度 正常,软骨细胞数及各层排列无明显异常, 潮线在放射层和骨化层之问. 二级:软骨膜表面不平整,呈毛刺状, 细胞肿胀,细胞数相对减少,有新生血管进 入第三层细胞区,潮线多位于此处. 三级:软骨表面有裂隙,浅表有破损, 软骨层变薄,细胞排列紊乱,基质内有囊性 变区,软骨下成骨上移,而进入移行层和放 射层之问,潮线亦上移至此处,并有新生血 管出现,软骨下骨髓腔扩大. 四级:软骨表面糜烂,表层裂隙裂至潮 线,细胞明显肿胀,核溶解,细胞数明显减 少,软骨层变薄,基质内形成较多的囊肿, 潮线上移至表层及移行层之间,软骨下骨髓 腔扩大,偶见显微骨折. 现将投药1,2,3个月的实验组和对 照组的光镜观察所见的数据,分别列表加以 对照比较: 从表3至表7可清楚地看到,给药组的 发病率明显地较对照组为低,统计学处理有 非常明显的差异,说明骨碎补有减低动物 模型发病率的作用.现将给药组和对照组 中发病的程度加以分析.可看出餐碎补又有 减轻动物模型发病程度的作用.见表8和 表9. 9两组光镜观察的发病程度 6 二,TEM观察所见各对照组的病变 均较给药组的为重,细胞退变明显,各层细胞 均可见程度不等地扩大的粗面内质网,但数 量明显减少,线粒体肿胀,高尔基复合体白 溶,而溶酶体相对增多,胶原纤维排列紊乱, 大量成团韵纤维丝侵入细胞内,软骨囊内亦 见有胶原纤维长入. 三,SEM观察所见各对照组病变多 分布于II/?/?级内,表面损伤较重,少 数标本可见股骨头软骨全部消失,仅剩少量 骨基质. 各给药组病变多分布于I,II级,而珊, ?级较少见.损伤较轻,胶原纤维清晰成网, 层次较清. 讨论 一 ,第一步骤预实验表现动物模型制造 成功,后双肢大鼠髋关节的骨关节病表现典 型,经统计学处理,动物的病理模型是成 功的. 二,第二步骤的实验,从LM,TEM, SEM的观察所见,发现各对照组比给药组 的病变出现得早,出现得多,出现得重. 三,不同剂量对发病率影响不大,经统 计学处理无明显差异. 四,生存5个月(即投药2个月)重复 实验成功,说明骨碎补治疗具有可重复性. 五,用补肾药而取得骨关节病的治疗效 果,"肾主骨理论的正确性及该理论 具有切实的物质基础.
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