为了正常的体验网站,请在浏览器设置里面开启Javascript功能!

c_erbB_2在大鼠卵巢中的表达及其在原始卵泡生长启动中的作用

2018-09-27 17页 doc 93KB 7阅读

用户头像

is_083599

暂无简介

举报
c_erbB_2在大鼠卵巢中的表达及其在原始卵泡生长启动中的作用c_erbB_2在大鼠卵巢中的表达及其在原始卵泡生长启动中的作用 生理学报 Acta Physiologica Sinica, October 25, 2009, 61 (5): c-erbB在大鼠卵巢中的表达及其在原始卵泡生长启动中的作用 2 *徐良全,许爱霞,黄 健,陈蔚云,郑月慧 南昌大学医学院生殖研究所,南昌 330006 摘 要:本文旨在研究原癌基因 c-erb B 在大鼠卵巢的表达,及其在原始卵泡启动过程中的作用。我们首先采用 RT-P CR 方 2 法证实大鼠卵巢中有 c- er b B 的表达,再体外...
c_erbB_2在大鼠卵巢中的表达及其在原始卵泡生长启动中的作用
c_erbB_2在大鼠卵巢中的表达及其在原始卵泡生长启动中的作用 生理学报 Acta Physiologica Sinica, October 25, 2009, 61 (5): c-erbB在大鼠卵巢中的表达及其在原始卵泡生长启动中的作用 2 *徐良全,许爱霞,黄 健,陈蔚云,郑月慧 南昌大学医学院生殖研究所,南昌 330006 摘 要:本文旨在研究原癌基因 c-erb B 在大鼠卵巢的表达,及其在原始卵泡启动过程中的作用。我们首先采用 RT-P CR 方 2 法证实大鼠卵巢中有 c- er b B 的表达,再体外合成其 RN A 小干扰片段(s m a ll in t e rf ere n ce R N A, siR N A ) ,并用脂质体 2 (Metafectene)介导转染体外培养的新生大鼠卵巢,在引发原癌基因 c-erbB 表达沉默或抑制的情况下,观察原始卵泡的生长 2 启动情况,以及表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)在此过程中的作用是否发生变化。结果显示:将 c-erbBsiRNA 2 转染原始卵泡后,c- er b B mR NA 水平明显下调( P<0 .0 5 ) ,三对 siR N A 抑制率分别为 49 .6 %、46 .7 %、82 .6 %,同时其蛋 2 白表达也明显下调(P<0 .0 1 )。通过 siR N A 抑制原癌基因 c-er b B 的表达,原始卵泡的启动、生长受到抑制;EGF 可以促进 2 原始卵泡的启动生长,但此作用可以被 c-er b B siR N A 阻断。以上结果提示,c-er b B 参与原始卵泡启动生长过程的调控, 2 2 并介导 EGF 促进原始卵泡启动生长的作用。 关键词:卵巢;原始卵泡;c-e r b B ;表皮生长因子;RNA 干扰 2 + 中图分类号:Q 4 92. 5 ;R3 39. 2 2 The expression of proto-oncogene c-erbBand its role in the initiation of primordial 2 follicle growth in rat ovary *XU Liang-Quan, XU Ai-Xia, HUANG Jian, CHEN Wei-Yun, ZHENG Yue-Hui Department of Physiology Reproduction, Nanchang University Med ical College, Nanchang 330006, China Abstract: Little is known about the factors that control the initiation of growth of primordial follicles. The objective of the present study was to investigate the effect of c-erbBon the onset of primordial follicle development, and whether c-erbBmediates the effect 2 2 of epidermal growth factor (EGF) in this process. We synthesized three pairs of siRNAs targeting the c-erbBmRNA and transferred 2 them into the newborn rat ovary cultured in vitro with Metafectene. After siRNAs transfection, the efficiency of siRNAs was tested by examining c-erbBmRNA and protein levels. The level of c-erbBmRNA was reduced by 49.6%, 46.7% and 82.6% respectively 2 2 after transfecting siRNA1, siRNA2 and siRNA3, and the level of ErbBprotein also reduced remarkably after siRNA3 transfection. 2 c-erbBsiRNA3 significantly inhibited the primordial follicle initiation and development; EGF augmented primordial follicles formation, 2 but the effect was abolished by c-erbBsiRNA3. All of these results suggest that c-erbBplays an important role in primordial follicle 2 2 development and folliculogenesis initiation, and mediates the effect of EGF on primordial follicle development. Key words: ovary; primordial follicle; c-erbB; epidermal growth factor; RNAi 2 表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)、碱性 原始卵泡的生长启动是指原始卵泡由静止状态向 生长状态的初级卵泡的转变,表现为颗粒细胞的大 成纤维生长因子( b a s ic fi b r ob la st g r owth fa ct or , [1-4]量增殖和分化。研究表明,启动原始卵泡生长的 bFGF)、角质化生长因子(keratinocyte growth factor, 动力来自卵巢本身,包括促进因子和抑制因子。相 KGF)、血小板源性生长因子(platelet derived growth 关的因子有:干细胞因子(st em cel l fact or, SCF)、 factor, PDGF)、白血病抑制因子(leukemia inhibitory Received 2009-01-06 Accepted 2009-09-07 This work was supported by the National Natural Science Foundation of China (No. 39260035). *Corresponding author. Tel: +86-; E-mail: yuehuizheng@163.com factor, LIF)、转化生长因子家族和胰岛素样生长因 单克隆抗体、购自德国 Biontex 公司;大鼠抗 ErbB 2 β-actin 抗体等购自美国 Santa Cruz 公司;HRP 标记 子家族、抗苗勒氏激素( a nt i- mul l er ia n h or mon e, [5-7] AMH)等。它们通过自分泌和旁分泌以及细胞之 羊抗鼠 IgG 二抗购自美国 Sigma 公司。 [8-10]1.1.3 主要仪器 CO 培养箱(日本三洋),电子 间的相互作用来调节原始卵泡的生长启动。 2 [3]EGF 是卵巢局部重要的调节因子,它能促进 天平(德国赛普利斯),体视显微镜(北京泰克),PCR [11]颗粒细胞增殖和分化。对大鼠原始卵泡在体内和 扩增仪( 杭州朗基) ,自动凝胶成像系统( Syngene) , [12] 体外的研究发现,EGF 能刺激原始卵泡的早期生4 孔培养板(美国 Nunc 公司),明胶海绵(美国 Sigma [12]长和类固醇分泌。柳海珍等以灵敏的增殖细胞核 公司) 。 抗原(proliferation cell nuclear antigen, PCNA)为追踪 1.2 方法 指标,研究 EG F 在新生大鼠卵泡生长启动中的作 1.2.1 卵巢获取与培养 用,发现 EGF 对颗粒细胞分化的影响远早于促卵泡 (1) Waymouth 培养液配置:Waymouth MB 752/1激素(follicle-stimulating hormone, FSH)。 培养液加入 0.23 mmol/L 丙酮酸钠、3 mg/mL 牛血 原癌基因是在正常情况下相对静止的一段碱基序清白蛋白 (bovine serum albumin, BSA)、100 IU/mL 列,它的表达与细胞生长、分化有关。大多数原 青霉素、10 0 I U / m L 链霉素,用 7. 6% N a H C O 3癌基因编码的蛋白质都是复杂的细胞信号转导网络中 调 pH 值至 7 . 2~7.4,无菌过滤后,加入 10 % 胎牛的成分,在信号转导途径中有着重要作用,其正常 血清(fetal bovine serum, FBS),4 ºC 保存备用。表达对于维持细胞的正常功能、调节细胞生长与增 (2 ) 卵巢的体外培养:4 孔培养板,每孔预先殖起重要作用。原癌基因 c-erbB又称 Her-2/Neu, 2 编码的185 kDa跨膜糖蛋白是具有酪氨酸激酶活性的 放置剪好的大小合适的明胶海绵,作为培养支架,受体。它位于人类染色体 17q2 1.1,其基因产物属 然后在每孔注入培养液 0.5 mL,孵育备用。取出 表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, 生 2 天 SD 雌性大白鼠用颈椎脱位法处死后,从背 EGFR) 家族,在细胞信号转导过程中起重要作用。部无菌采集双侧卵巢,此时卵巢中含大量原始卵 EGFR 是受体型的酪氨酸激酶,生长因子与细胞表面 泡、少量裸卵,无生长卵泡,是研究原始卵泡启受体结合引起受体二聚化,激活其内源性酪氨酸激 动的理想模型。用不含血清的培养液洗去附着的血 液和组织液,在解剖显微镜下小心但快速剥离卵巢 酶,导致每个受体在特异性酪氨酸残基上的分子间 周围的脂肪组织,漂洗后用显微镊随机转入预孵育 磷酸化。后者催化多种底物酪氨酸残基磷酸化,从 的 4 孔培养板中,置于明胶海绵上,每孔放置 2~3 而启动、催化与细胞生长、增殖有关的生化过程。 个,卵巢依靠其表面张力,可以很好地和周围进行 原始卵泡的启动与卵巢局部产生的生长因子有 物质、气体交换。在 CO培养箱(37 ºC,5% CO) 2 2关,原癌基因有可能通过其正常表达( 如表达生长 中培养。隔天换一半培养液。 因子或是生长因子受体) 参与这一过程。本研究旨 1.2.2 RT-PCR 扩增目的基因及目的基因的测序 在探讨原癌基因 c-erbB在原始卵泡启动中的作用, 2 及其是否介导了原始卵泡启动生长的重要因子—— 取培养后的卵巢(约 12 个),加入 1 mL TRIzol,冰 EGF 在此过程中的作用。 上充分匀浆,采用 TRIzol 一步法提取总 RNA。取总 RNA 2 μg,按逆转录试剂盒使用说明操作,逆转录 成 cDNA。引物由上海生工生物工程有限公司合成。 1 材料与方法 c- er b B ( 扩增片段长度为 32 2 bp) 上游引物:5'- 2 1.1 材料 CAGTGTGTCAACTGCAGTCA-3',下游引物:5'- CAGGAGTGGGTGCAGTTGAT-3';β-actin (扩增片 1.1.1 动物 新生 2 日龄 Sprague-Dawley (SD)雌 段长度为 238 bp)上游引物:5'-TACAACCTCCTTG- 性大鼠,体重 7 g 左右,由南昌大学医学院动物科 CAGCTCC-3',下游引物:5'-GGATCTTCATGA- 学部提供。合格证号为 03 19 60 2 。 1.1.2 主要试剂 Waymouth MB 752/1 培养基购 GGTAAGTCAGTC-3'。PCR 条件:94 ºC 预变性 4 min 后,95 ºC 变性 15 s,55 ºC 退火 60 s,72 ºC 延伸自美国 Si g m a 公司;RT - P C R 相关试剂购自美国 2 min,共 35 个循环,末次循环后延伸 7 min 结束。 Invitrogen 公司;EASY siRNA 试剂盒购自上海吉凯 DNA 测序由上海生工生物工程有限公司完成。 基因化学技术有限公司;阳离子脂质体 Metafectene 生理学报 Acta Physiologica Sinica, October 25, 2009, 61 (5): 表 1. EASY-siRNA 试剂盒中的 siRNA 序列和无义序列 Table 1. Sequences of three pairs of siRNA and one pair of non-silencing RNA Sequence siRNA1 (Start2739) Sence, 5 ' ? 3 ', GAC AGAGUAC CAU GCAGAU tt Antisen ce, 5' ? 3 ', AUCU GCAU GGUACUC UGUC tt Sen ce, 5' ? 3 ', GAGU GCUGUGUGGAGCUAU tt siRNA2 (Start2823) Antisen ce, 5' ? 3 ', AUAGCUCC ACAC AUC ACUC tt Sence, 5' ? 3', CAGUACCU UCUACCGUUCAtt siRNA3 (Start3120) An tisence, 5 ' ? 3 ', U GAAC GGUAGAAGGU AC UGtt Sence, 5' ? 3', AUAUAAUU GUGGCCGU UGCtt An tisen ce, 5 ' ? 3 ', GC AAC GGC CAC AAU UAUAU tt Rat non-silencing RNA (negative control) 400),4 ºC 过夜。将辣根过氧化物酶(HRP)标记的 1.2. 3 RN A 干扰片段的构建、转染及筛选 山羊抗鼠 IgG 二抗(1?2 000)温育 1 h,DAB 显色, 1.2.3.1 RNA 干扰片段的构建 GeneChem EASY- siRNA 试剂盒是针对靶基因 c-erbB(NM_017003)由用凝胶图像分析系统对图像进行分析。 2 1.2.4 siRNA 对原始卵泡的生长启动的影响 上海吉凯基因化学技术有限公司化学合成的 siRNA 选取抑制效果最佳的那对 siRNA,按照上面所述的产品,包含三对靶序列和一对阴性对照序列(针对大 方法转染培养中的卵巢组织,实验分组为对照组、鼠普适型的 Non-silencing 序列),具体序列见表 1。 100 ng/mL EGF 处理组、100 ng/mL EGF+siRNA 1.2.3.2 siRNA 的转染 参照转染试剂Metafectene (100 nmol/L)处理组、siRNA (100 nmol/L)处理组。 说明书转染培养中的卵巢组织:把 3 μL 20 μmol/L 的 siRNA 双链与 50 μL 培养液混合,取 2 μL 脂质体 各组培养 8 d 后,取出培养后的卵巢行石蜡包埋, 在另一管中与 50 μL 培养液混合,在常温下温育 5 切片,HE 染色,显微镜下观察。选取一系列切 min,然后将稀释后的 siRNA 与稀释后的脂质体混 片截面径最大的部分读取卵泡总数,为避免重复计 合,轻轻颠倒混匀,不要震荡,混合后,在室温 数,有核的才计算在内,按照 O kt a y ( 1995) 分类 下温育20 min,以便形成siRNA 与脂质体Metafectene 标准,原始卵泡为卵母细胞周围部分或全部包裹着的转染复合物,把 siRNA 与脂质体的混合液加入培 一层扁平颗粒细胞;初级卵泡周围为一层柱状颗粒 养孔中,轻柔前后推摇以混匀液体,然后将培养板 送 入 培 养箱。 此 时 的 培养液 为无血 清培 养液, 细胞;次级卵泡周围为两层或以上柱状颗粒细胞,siRNA 用量为 60 pmol,转染终体积为 600 μL,转 计算出原始卵泡、初级卵泡及次级卵泡各期所占的染终浓度即为 100 nmol / L。12 h 后,把培养板中 百分比。 的卵巢转至含血清的新鲜培养液的另一培养板,继 1.2.5 统计分析 结果数据用 mean?SEM 表示。 续培养 24 h,收集标本检测干扰效应。实验分组为 组间比较采用单因素方差分析。用 SPSS12.0 软件 空白组、阴性对照组、si RN A 1 组、siR N A 2 组、 siRN A3 组。空白组为未转染的正常卵巢组织。 对所有的数据进行统计学处理,以 P<0.05 为差异 显著,P <0 .0 1 为差异极显著。 2 结果 1.2.3.3 siRNA 干扰效果检测 转染 siRNA 后, 2.1 c-erbB在大鼠原始卵泡的表达,以及 siRNA 2 ,用琼脂糖电泳检以前述 RT-PCR 方法扩增 c-erbB 2 对 c-erbBmRNA 表达的干扰效果 2 测表达结果,经凝胶成像分析系统进行扫描分析, 对各组 c-er b B mRN A 的相对含量进行统计分析。 2 日龄卵巢组织目的基因 c-erbB的 RT-PCR 结 2 2 Western blot 分析 ErbB蛋白表达。取培养后的卵巢 2 果显示,扩增出的 c-erbB目的片段为 322 bp,上 2 若干个,加入细胞裂解液提取总蛋白,BCA 试剂盒 海生工生物工程有限公司测序结果与GenBank报道测定蛋白量后,取 50 μg 加入 7.5% SDS- 聚丙烯酰 的一致,表明 c-er bB 在大鼠原始卵泡有表达。 2 胺凝胶中电泳进行分离后,转移至硝酸纤维素膜 各组 c-erbBmRNA 表达的 RT-PCR 电泳结果见 2 上,将膜浸入 5% 牛奶中封闭过夜,然后加入大鼠 抗 Er bB单克隆抗体(1 ?1 00 0) 、β -a ct in 抗体(1? 图 1 。从条带光密度值分析结果中可以看出,阴性2 对照组与空白对照组相比差异无显著性,siRNA1、 图 1. RT-PCR 检测转染 siRNA 后 c-erbBmRNA 的表达 2 Fig. 1. Expression of c-erbBmRNA in cultured ovaries after siRNAs transfection detected by RT-PCR. Lane 1, Control is the group 2 without transfection; Lane 2, Negative control is the group transfected with non-silencing RNA; Lane 3, siRNA1; Lane 4, siRNA2; Lane ***#5, siRNA3. mean?SEM, n=3. P<0.05, P<0.01 vs control, P<0.01 vs siRNA3. si RNA2 与空白对照组相比均具有统计学差异(P< 0. 05 ) ,抑制率分别为 49.6%、46.7%;siRNA3 与 空白对照组相比具有极显著性差异(P<0.01) ;抑制 率达到 82. 6%;在干扰组之间,si RN A3 组水平最 低,且与 siRNA1、siRNA2 组相比均有极显著性差 异( P <0 .01 ) 。因此,在后续实验中,我们选定 siRNA3 作为干扰片段。 2.2 siRNA3 转染卵巢后其 ErbB蛋白的表达 2 Western blot 法检测转染 siRNA3 后卵巢 ErbB蛋 2 白表达(图 2),对各组条带进行光密度测定及统计学 分析显示:siRNA3 组蛋白水平与对照组相比明显下 降,差异具有显著性(P<0.01) ;阴性对照组与对照 组相比无明显差异(P>0.05)。提示 siRNA3 可以通过 抑制 c-erbBmRNA 的表达从而抑制其蛋白的表达。 2 2.3 siRNA3 转染卵巢后其形态学观察结果 各处理组大鼠卵巢培养 8 d 后,切片并染色, 观察卵泡发育情况。 对照组 8 d 后大部分原始卵泡发育为初级卵泡, 而 siRNA 组初级卵泡和次级卵泡数明显减少(图 3)。 图 2. Western blot 检测转染 siRNA3 后 ErbB蛋白的表达 2 EGF 组与对照组相比,原始卵泡数减少,次级卵泡Fig. 2 . Expression of ErbBin cu ltu red ovaries after siRN A3 2 **transfection detected by Western blot. mean?SEM, n=3. P<0.01 vs control. 生理学报 Acta Physiologica Sinica, October 25, 2009, 61 (5): 图 3. EGF 和 siRNA 对原始卵泡生长启动的影响 Fig. 3. The initiation of primordial follicles growth after transfection of siRNA and EGF treatment. A: Ovaries were treated for 8 d with: nothing (a), 100 nmol/L siRNA targeted c-erbB(b), 100 ng/mL EGF (c), 100 nmol/L siRNA+100 ng/mL EGF (d), respectively. Ovarian 2 sections were stained with hematoxylin and eosin to show follicles at different developmental stages. Each microscopic picture was taken from a typical experiment that was repeated at least three times. Scale bar, 25 μm. B: Number of follicles was counted in serial cross- sections at the widest portion of the ovary. Percentages of the number of each category over the total number were plotted. Statistical analysis was performed using ANOVA followed by the Student-New-man-Keuls test. Bars with different letters label values that are significantly different (P<0.05). Data are presented as mean?SEM. 数明显增多,说明 EGF 可以促进原始卵泡的启动生 内因存在抑制性因子,原始卵泡启动受到抑制,体长,对早期卵泡的生长有促进作用;而在 EG F 作 外情况下,抑制作用被解除或是促进因子占优势,用的同时,加入 siRNA 则 EGF 促原始卵泡启动的作 原始卵泡得以自发启动生长。现有的研究表明原始用明显受抑制,原始卵泡的生长情况接近未加 EGF 卵泡的启动与卵巢本身通过自分泌或旁分泌产生的 的对照组 。 生长因子有关。 为探讨c-erbB在原始卵泡生长启动这一重要的 2 雌性生殖生理中的作用,我们的实验分为两步:首 3 讨论 [13,14]卵巢器官的体外培养方法是研究原始卵泡生 先是证实在新生大鼠的卵巢有 c-erbB 表达,取 2 日 2 长启动的很好模型。与在体情况完全不一样,体外 龄新生大鼠卵巢,体外培养后,我们收集培养后的 培养卵巢器官情况下,原始卵泡可以自发地启动向 卵巢,用 TR I z o l 试剂提取总 RN A 并逆转录成 初级卵泡转变,这种现象表明启动原始卵泡发育的 cDNA,用 NM_017003 (c-erbB)为模板,以 Primer 2动力来自卵巢本身(包括促进因子和抑制因子)。体 5.0 设计引物扩增了 cDNA,其大小与理论值相符 Endocrinol 2005; 234: 1-10. 合。为了进一步确定该产物是来自于 c-erbB基因, 2 N ilsson E E , Skin ner MK. Kit ligand an d basic fibroblast 2 本实验对扩增产物进行序列测定,并用 DNAstar 软 growth factor interactions in the induction of ovarian primor- 件分析,该序列与 GenBank c-erbB序列完全一致。 2 dial to primary follicle transition. Mol Cell Endocrinol 2004; 该结果确认在大鼠卵巢中有 c-erbB表达。 2 214(1-2): 19-25. siRNA 抑制基因表达的报道多见于培养细胞上,3 Kezele P, N ilsson EE, Skinner MK. Keratinocyte grow th [15]2006年Wang等在研究仓鼠生长分化因子-9 (growth factor acts as a mesenchymal factor that prom otes ovarian differentiation factor-9, GDF-9)基因在原始卵泡发育中 primordial to primary follicle transition. Biol Reprod 2005; 73: 的作用中,首次用 GDF-9 siRNA 通过阳离子脂质体 967-973. 介导转染培养中卵巢器官,用带有荧光标记的 4 Nilsson EE, Detzel C, Skinner MK. Platelet-derived growth siGLO (一种非靶向对照siRNA)观察转染效应,发现 factor modulates the primordial to primary follicle transition. 卵巢中 90% 以上的细胞都显示荧光。转染 GDF-9 Reproduction 2006; 131: 1007-1015. siRNA 后,成功地抑制了 GD F- 9 基因的表达。 5 Knight PG, Gliste C. TGF-β superfamily members and ova- 为进一步了解原癌基因c-erbB在原始卵泡启动 2 rian follicle development. Reproduction 2006; 132: 191-206. 中的作用,接下来本实验针对原癌基因c-erbB体外 2 6 Kezele PR, Nils son EE, Skinner MK. Insulin but not insulin- 合成其 siRNA,在脂质体的介导下,转染培养中的 like growth factor-1 promotes the primordial to primary fol- 卵巢器官。在引发基因 c-er bB沉默的情况下,我 2 licle transiton. Mol Cell Endocrinol 2002; 192(1-2): 37-43. 们观察到对照组体外培养8 d后大部分原始卵泡发育 7 Kevenaar ME, Meerasahib MF, Kramer P, van de Lang-Born 为初级卵泡,而 siRNA 组初级卵泡和次级卵泡数明 显减少( P <0 .05 ) ;EGF 是卵巢局部重要的调节因 BM, de Jong FH , Groom e NP, T hem men AP, V isser J A. 子,其与细胞膜上的 EG FR 结合,激活 PK C ,在 Serum anti-mullerian hormone levels reflect the size of the 2+ 细胞内信使 IP3 或 Ca等的参与下,作用于与细胞 primordial follicle pool in mice. Endocrinology 2006; 147: 生长增殖有关的蛋白质或因子,调控细胞核内基因 3228-3234. [16]的转录。研究证实 EGF 在新生大鼠卵巢原始卵泡 Matzuk MM, Burns KH, Viveiros MM, Eppig JJ. Intercel- 8 生长起始过程中有重要作用,它能促进颗粒细胞增 lular communication in the mammalian ovary: oocytes carry 殖分化,刺激原始卵泡的早期生长和类固醇分泌。 the conversation. Science 2002; 296: 2178-2180. 本实验 EG F 培养组与对照组相比,原始卵泡数减 Brankin V, Mitchell MR, Webb B, Hunter MG. Paracrine 9 少,次级卵泡数明显增多(P<0.05) ;说明 EGF 可以 effects of oocyte secreted factors and stem cell factor on 促进原始卵泡的启动生长,且对早期卵泡的生长有促 porcine granulosa and theca cells in vitro. Reprod Biol Endocrinol 进作用;这与文献报道的一致。有趣的是,c-erbB2 2003; 1: 55. siRNA 可以阻断 EGF 的这种促进作用,表明原癌基 10 Thomas FH, Vanderhyden BC. Oocyte-granulosa cell inter- 因c-erbB通过表达参与了EGF或其它生长因子对原 2actions during mouse follicular development: regulation of kit 始卵泡启动生长的信号传递过程。 ligand expression and its role in oocyte growth. Reprod Biol 原始卵泡的启动受到诸多自分泌和旁分泌因子 Endocrinol 2006; 4: 19. 以及内分泌因子的调控,它们组成庞大的网络,通 11 Wang HB (王海滨), Li ML, Xia GL, Lu ZX, Guo Y, Xie HR.过细胞之间的相互作用方式共同调节原始卵泡的生 Effects of epidermal grow th factor on the follicle develop- 长,但是其确切的机制不是很清楚。这里面包含许 [17-20]ment an d steroidogenesis of m ouse fetal ovary in vitro. J 多基因的表达,它们的表达呈现时间、空间特 C h in a Agric U n iv (中国农业大学学报) 2001; 6(1): 126 异性,RNAi 技术为探明这些基因的功能,以及进 (Chinese, English abstract). 一步了解原始卵泡启动机制提供了一个新方法。 Liu HZ, Xu FH, Liu YX. Effects of epidermal growth factor 12 on initiation of primordial follicle growth of newborn mouse. Sci China C Life Sci 2000; 30(5): 535-543. Eppig JJ, O’Brien MJ. Development in vitro of mou se oo- 13 cytes from primordial follicles. Biol Reprod l996; 54(1): l97- 207. Jin X, Han CS, Zhang XS, Yuan JX, Hu ZY, Liu YX. Signal 14 参考文献transduction of stem cell factor in primordial follicles develop- ment promotion. Mol Cell Endocrinol 2005; 229(1-2): 3-10. 1 Hoyer PE, Byskov AG, Mollgard K. Stem cell factor and c- 15 Wang C, Roy SK. Expression of growth differentiation factor Kit in human primordial germ cells and fetal ovaries. Mol Cell 生理学报 Acta Physiologica Sinica, October 25, 2009, 61 (5): 9 in the oocytes is essential for the development of primordial Endocrinology 2005; 146: 941-949. follicles in the hamster ovary. Endocrinology 2006; 147(4): 18 Zheng P, Dean J. Oocyte-specific genes affect folliculogenesis, fertilization, an d early development. Semin R eprod Med 1725-1734. 16 Zheng YH (郑月慧), Zheng LP, Li F, Wu L, Dai YC. c-erbB 22007; 25: 243-251. and c-myb induce oocyte maturation via activation of mitogen- Paradis F, Vigneault C, Robert C, Sirard MA. RNA interfer- 19 activated protein kinase an d m aturation prom otin g factor. ence as a tool to study gene function in bovine oocytes. Mol Acta Physiol Sin (生理学报) 2008; 60(1): 97-104 (Chinese, Reprod Dev 2005; 70: 111-121. English abstract). Tang F, Kaneda M, O'Carroll D, Hajkova P, Barton SC, Sun 20 17 Thomas FH, Ethier JF, Shimasaki S, Vanderhyden BC. Fol- YA, Lee C, Tarakhovsky A, Lao K, Surani MA. Maternal licle stimulating hormone regulates oocyte growth by modu- microRNAs are essential for mouse zygotic developmen t. lation of expression of oocyte and granu losa cell factors. Genes Dev 2007; 21: 644-648.
/
本文档为【c_erbB_2在大鼠卵巢中的表达及其在原始卵泡生长启动中的作用】,请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑, 图片更改请在作品中右键图片并更换,文字修改请直接点击文字进行修改,也可以新增和删除文档中的内容。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生,若发现您的权利被侵害,请联系客服邮件isharekefu@iask.cn,我们尽快处理。 本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用。 网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。

历史搜索

    清空历史搜索