【doc】天津地区鸡肾型IBV的分离鉴定

【doc】天津地区鸡肾型IBV的分离鉴定 天津地区鸡肾型IBV的分离鉴定 中国畜禽传染病1995年第4期(总第83期) BUDR所抑制,证实其核酸型为DNA.两分离 毒株均能抵抗2O乙醚4?24小时,5氯 仿4?l0分钟,0.5胰蛋白酶37?l小时和 pH3.037.C2小时的处理,也能抵抗56?3O 分钟,80?l0分钟的处理,8O?30分钟病毒 失去活力. 表2分离毒株理化特性试验结果 (单位TCID5./m1) 4.病毒形态观察:病毒培养液在电镜下 可见散在的病毒颗,粒,h-CPV和N—CPV形态 基本一致,均为圆形,无囊膜,有子粒,有经约 25nm.以高免血清与病毒悬液作用后.进行 免疫电镜观察,可见聚集成团的病毒颗粒. 5.交互H1结果:表3结果表明,抗 血清(抗A—CPV);徊本地株抗血清均能抑制 f一 , h-CPV对猪红细胞的凝集. 表3交互HI试验结果 小结和讨论 1.本试验通过对分离毒株的形态特征, 培养特性,理化特性鉴定及HA和HI试验结 果表明.从进境犬中所分离出的病毒为CPV. 2.从香港进境犬中分离出的病毒与本地 发病犬中分离出的病毒比较,其形态,理化特 性,细胞感染试验结果基本一致,血凝特性略 有差异,但阳性血清之间能相互抑制.说明具 有共同的抗原性,.两者之间的细微差异有待 进一步探讨. 3.国内夏咸柱等都成功地用猫肾细胞 (F81)分离出CPV,我们用猫胚细胞初次分 离此病毒获得成功,说明猫胚细胞可用于 CPV的分离. 4.从血痢和垂死犬肠系膜淋巴结,心肌 中未分离出CPV,而从垂死犬肝和感染初期 犬粪中分离出CPV,这为掌握病毒在机体内 的分布和消长提供了参考 筮 (天津市禽病中心) , 有交叉反应性. 摘要 用鸡胚传代方法从天津地区分离到一株主要引起雏鸡 肾脏病变的病毒.经电镜观察到典型的病毒颗粒,接伸鸡胚 引起特征性病变}感染不同日龄雏鸡产生与临床剖检一致 的大体及组织学变化,韧步鉴定为肾型传染性支气管炎病 毒,命名为TK8.以l0日龄鸡旺测定其半数感染量为l0 EIDTKB无血凝性,但以处理后的M?l毒株作为凝集抗 原,可对感染TKe的鸡群进行抗体监测,与M41病毒 8坫,』'?多 s, 鸡传染性支气管炎病毒(IBV)可引起鸡 的一种主要表现为肾脏病变的疾病,拒雏鸡 中造成极为严重的损失,近年来,天津地区此 类疾病经常发生.本文对分离自天津地区某 鸡场的一株肾型IBV作了初步鉴定.并对其 致病特性及血清学特性进行了重点研究,提 岛定鉴 刍漓分 ? =' w=:j 肾 . 鸡 体区 此h地 觏律 师天天 雕 蒙 承 丈 # 出了切实可行的血清学检测方法. 材料和方法 一 ,1BV毒株:M4-株,标准毒株.哈兽研 禽病室赠. 二,血清:SPF阴性血清及M.-单因子 阳性血清,哈兽研禽病室惠赠. 三,病毒分离:取天津地区某鸡场疑似 m病鸡的肾脏研磨,加PBS(pH7.2)制成1t l0悬液,离心取上清,分别经0.45,0.22m 滤膜过滤除菌,经尿囊腔接种10日龄鸡胚, 收取30,4O小时鸡胚尿囊液,作为分离毒, 命名为TKe.同时,以0.1ml/胚病毒液,盲传 数代,观察胚体病变状况. 四,TK6EID50的测定:将盲传至第5代的 病毒液,用PBS(pH7.2)稀释,按lO倍比稀 释至10;将48枚10日龄SPF鸡胚分为8 组.一组对照,试验组接种0.1ml/胚,于接种 后第6天检查胚体,计算EID~o.. 五,雏鸡感染试验 1.1日龄鸡12只,等分为两组,试验组 经滴鼻,点眼及口腔接种0.5ml/只,第5代 鸡胚尿囊液. 2.1月龄鸡18只,等分为两组,试验组 经滴鼻,点眼及口腔接种lml/只第5代鸡胚 尿囊液. 六,TK6血凝研究 1.以Clerstridlumperfringe培养液处理浓 缩后的分离毒,用HA方法检测其血凝性.同 时以标准毒Mn株经同样处理后作为对照. 2.TKe感染鸡后,每周由翅静脉采血一 次,分离血清,以HI试验检测受感染鸡的循 环抗体,并以SPF阴性及阳性血清作对照, 从而确定检测方法. 七,电镜及病理组织学检查 1.由电镜直接观察感染TK6的鸡胚尿囊 液. 2.分别采取试验组与对照组鸡的肾脏, 进行病理组织学检查. 中国畜禽传染病1995年第4期(总第83期) 结果 一 ,病毒的分离鉴定 1.感染鸡胚的病变:TKe毒株经尿囊腔 接种10日龄鸡胚至第3代,鸡胚出现充血及 胚体小于正常对照;至第4,5代,感染胚显着 变小,大多呈卷曲状或僵化胚,充血出血,部 分胚肾可见到明显的尿酸盐沉积.TKe致鸡 胚病变的ELDso为10'. 2.雏鸡感染试验 (1)501日龄鸡于感染后30小时呈明 显的精神沉郁,呼吸道症状不明显.至第5 天,死亡达33;第12天,发病率达48以 上,死亡达66. (2)1月龄鸡于感染后5天呈现精神沉 郁,部分病鸡有呼吸困难症状.至感染后二 周,发病率达55,死亡率为33. (3)所有的病,死鸡,均表现为肾脏肿大, 肾小管扩张,肾及输尿管充满尿酸盐,呈花斑 样外观.部分病鸡气管内有少量粘液.少数 病鸡在心包及腹腔其他脏器表面覆有一层尿 酸盐样沉积.对照组及未发病鸡,外观无任何 病变. (4)病理组织学观察显示,肾小管间,血 管和肾小体周围有淋巴细胞,巨噬细胞及少 量浆细胞浸润,部分肾小管的上皮细胞核增 多,少量肾上皮细胞肿大,变性.呈轻度急性 间质性肾炎病变.肾小管内未见有尿酸盐沉 积.对照组肾脏无可见病变. 3.电镜观察;在感染TK6鸡胚尿囊液中, 有近似圆形的病毒颗粒,直径约100, 120nm,表面有特征性的棒状纤突,排列均 匀. 二,TKe分离株血凝性及抗体检测 1.经处理后的TKe分离株无血凝性,即 HA试验阴性,而以同样处理的M-株,HA效 价可达2?. 2.用HI试验对人工感染TKe的鸡,以处 理后的Mn为抗原,进行抗体检测,可在感染 中国畜禽传染病1995年第4期(总第83期) 后第2周起,检测到逐渐上升的抗体效价,感 染后第4周,HI效价可达2一. 小结和讨论 1.根据TKs分离株的电镜观察结果,致 鸡胚病变特征,对不同日龄雏鸡进行感染试 验所表现的临床症状,大体解剖及病理组织 学变化,初步鉴定该分离株为鸡肾型IBV.其 理化特性,血清学类型等,尚待进一步研究. 2.TKs分离株无血凝性,但其所产生的 抗体能与M-株制备的HA抗原发生凝集抑 制反应(HI),推测该病毒株与Mn株的凝集 抗体具有交叉反应性,因而可用HI试验进行 『-片福牛存L{F霰 抗体监测. 3.不同日龄的鸡对TKo的敏感性不同, 雏鸡日龄越小,易感性越高;日龄增大,易感 性也逐渐降低.这与临床上该病多发生于2 , 4周龄雏鸡相一致. 哈瞢研禽病室给予燕情帮助,天津禽瘸中心瘸毒室,病 理室部分同志予以大力支持,天津禽瘸中心高级鲁医师张 森璃,田仁位对提出修改意见,特此致谢l 主要参考文献 1.B.W.卡尔尼克t禽病学,第9版.407~418. 2.支町毅?第六届全国禽病会议论文集,360. 祆试 牛流行热不同佐剂疫苗的比较试验 白文塑张自严隽端林秀英刘晓滨_——.,?———一..一一 '中国农科院哈尔滨瞢医研究所 . 77 53谚I. ;, 摘要材料和方法 , 用福氏完全佐剂,白油司盘佐荆和QuilA佐荆配制的一,疫苗 亚单至苎翌!兰墨矍.'l,亚单位疫苗:按文献?叙述的方法配Qui~A佐荆配制的疫苗 在增强免疫效果和降低接种反应上….'.一. 均觋显优于其它两种佐剂配制的疫苗..利. 当今在医学和动物医学疫苗的研制过程 中,佐剂的研究和应用已成为人们关注的一 个实际问题.特别是近年来由于使用生物合 成的,重组的及其他现代技术制备的纯化亚 单位疫苗或合成疫苗免疫原性弱[I,需要佐 剂的帮助来克服这类疫苗免疫原性弱的弊 端.佐剂用在传统的疫苗上,也可诱导高水平 的体液免疫和细胞免疫,产生强而持久的免 疫反应,从而达到提高疫苗功效的目的. 我们在研制牛流行热亚单位疫苗和灭活 疫苗时,曾用福氏完全佐剂,白油司盘佐剂和 QuilA佐剂配制的疫苗进行了比较试验.现 将结果如下. 2,灭活疫苗.按文献嗍的方法制备. 二,佐剂 l,福氏完全佐剂.将羊毛脂与石蜡油按 3.5比例配制,然后使其含20ms/ml卡介 苗,经l5磅40分钟高压灭菌后,置4"C保存 备用. 2,白油司盘佐剂.将l0号白油,.司盘一 85,吐温一85按90.7.3的比例配制后,经 l5磅20分钟灭菌,置4?冰箱保存备用. 3,QuilA佐剂.系由皂树皮提取的一种 糖苷.在通风厨内配制,无菌取QuilA粉末, 用PBS配成含lms/ml的OuiiA溶液,经过沪 除菌后置4?冰箱保存备用,配苗时与等量 疫苗抗原混合制备. 三,攻击用强毒株.系牛流行热北京株血