盐酸左旋沙丁胺醇缓释片释放度测定方法的研究

盐酸左旋沙丁胺醇缓释片释放度测定方法的研究 盐酸左旋沙丁胺醇缓释片释放度测定方法 的研究 【摘要】  目的 研究自制盐酸左旋沙丁胺醇缓释片 的体外释放度。方法 采用《中国药典》附录XC第三法～pH 1.2的盐酸缓冲液和pH 6.8磷酸盐缓冲液为释放介质～转速 50 r〃min-1, 累计释药量检测方法为高效液相色谱法。结 果 平均回收率100.8%～RSD=0.32%～3批产品在2、4、8 h 的平均累积释药量分别为44.87%、67.57%和84.72%～药物 释放符合Weibull方程模型。结论 自制盐酸左旋沙丁胺醇 缓释片有较好的释药性能～本文建立的释放度测定方法可作 为该制剂的质控方法。 【关键词】  高效液相色谱法 盐酸左旋沙丁胺醇 缓 释片 释放度 Release of levalbuterol hydrochloride sustained released tablets in vitro Abstract:Objective  To study the in vitro dissolution rate of levalbuterol hydrochloride sustained released tablets. Methods  Following the CHP appendix XC(method three), the hydrochloric acid solution (pH=1.2) and PBS (pH=6.8) was taken as release medium. Rotation speed is 50 r/min and dissolution rate was determined by HPLC. Results Average recovery was 100.8%(RSD= 0.32%) . The average cumulative releases were 2 h (44.87%), 4 h(67.57%), 8 h (84.72%). The drug release profile in vitro was followed Weibull model equation. Conclusion The study indicates that the sustained released tablet had satisfactory sustained release characteristics. The method could be used for the quality control of levalbuterol hydrochloride sustained released tablets. Key words:  HPLC; levalbuterol hydrochloride; sustained released tablets 手性药物左旋沙丁胺醇,levalbuterol)是一种β2 肾上腺素受体激动剂～能刺激支气管平滑肌的β2肾上腺受 体～选择性松弛支气管平滑肌～具有支气管扩张作用～用于 治疗哮喘、喘息性支气管炎、肺气肿患者的支气管痉挛。作 为外消旋体沙丁胺醇的其中一个对映异构体～与消旋体比 较～左旋沙丁胺醇去除了产生不良作用的右旋体后～其副作 用减少～疗效也进一步提高,1,。目前～国外已有左旋沙丁胺醇喷雾剂上市～我国尚未有左旋沙丁胺醇制剂上市～但已有多家企业研究生产其原料药～并已完成临床试验。为对自制盐酸左旋沙丁胺醇缓释片进行质量控制～本文系统地考察了盐酸左旋沙丁胺醇缓释片体外释放的影响因素～并建立了该缓释片释放度的测定方法,该法专属性强、精密度高。 1  仪器与试药     ZRS 8G智能溶出试验仪(天津大学无线电精密仪器厂),美国戴安Ultimate3000高效液相色谱仪,日本岛津UV 1601型分光光度计,盐酸左旋沙丁胺醇对照品,苏州君宁新药开发中心有限公司提供～质量分数99.8%,,盐酸左旋沙丁胺醇缓释片,自制～批号070307、070312、070327～规格:4 mg/片,,甲醇～色谱纯,其他试剂均为纯。 2  方法与结果 2.1  检测波长的确定     精密称取盐酸左旋沙丁胺醇对照品适量～分别用pH 1.2盐酸缓冲液、pH 6.8的磷酸盐缓冲液溶解并稀释～制成 质量浓度约为20 μg/mL的溶液～在200，400 nm范围～分别以各溶剂为空白～进行紫外扫描～结果表明～均在276 nm处有最大吸收～故选择此波长为测定波长。 2.2  色谱条件的确定     以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂～磷酸盐缓冲液,取磷酸二氢钠9.77 g～加水溶解并稀释至1 000 mL～用磷酸调节pH值至3.10〒0.05, 甲醇,体积比85?15,为流动相～流速为1.0 mL/min,检测波长为276 nm～进样量为20 μL～理论塔板数按盐酸左旋沙丁胺醇峰计算不低于3 000。 2.3  专属性试验     盐酸左旋沙丁胺醇峰形对称、尖锐,且辅料均不干扰盐酸左旋沙丁胺醇的测定。结果见图1。 2.4  线性考察      精密称取盐酸左旋沙丁胺醇约10 mg臵25 mL容量瓶中～以pH1.2的盐酸溶液溶解并稀释至刻度～摇匀～作为贮 备液,0.4 mg/mL,～精密移取1 mL臵20 mL容量瓶中～以pH1.2的盐酸溶液稀释至刻度～配成20 μg/mL溶液作为对照液～滤过～取5、10、20、30、40 μL按“2.2”项下色谱条件测定～色谱图。以绝对进样量对峰面积回归～得回归方程。表明药物在0.1，0.8 μg的范围内线性关系良好。同法制备药物在pH6.8磷酸盐缓冲液中的曲线～结果如下:     A=0.1098C-0.0128,r=1.000  ,pH=1.2,     A=0.1181C-0.0309,r=0.9995 ,pH=6.8, A.阴性溶液(pH1.2盐酸溶液) ;B.盐酸左旋沙丁胺醇对照液(pH1.2的盐酸溶液); C.阴性溶液(pH6.8 磷酸盐缓冲液);D.盐酸左旋沙丁胺醇对照液(pH6.8 磷酸盐缓冲液) 图1  HPLC图,略, Fi 1g.1  HPLC  chromatograms 2.5  回收率试验     精密称取盐酸左旋沙丁胺醇对照品适量分别臵250 mL量瓶中～按处方量加入辅料～用pH 1.2的盐酸溶液溶解并稀释至刻度～滤过～取20 μL注入色谱仪～按“2.2”项下色谱条件测定～记录色谱图～另取“2.4”项下标准液,20 μg/mL,20 μL注入色谱仪～同法测定～记录色谱图～采用外标法计算浓度～以测得量对加入量计算回收率～同法测定盐酸左旋沙丁胺醇在pH6.8磷酸盐缓冲液中的回收率～见表1。 2.6  溶液稳定性     取质量浓度为20 μg/mL的盐酸左旋沙丁胺醇供试液～分别在0、2、4、6、8、12、24 h测定其峰面积,并计算其RSD=0.19%。结果表明盐酸左旋沙丁胺醇供试液在24 h内稳定。 2.7  释放度试验     参照中国药典2005版二部中硫酸沙丁胺醇缓释片项下关于释放度的测定～选择附录XC第三法即小杯浆法。取 本品～以盐酸溶液,9?1000,125 mL为介质～2 h后以磷酸盐缓冲液,pH6.8,代替盐酸溶液,9?1000,125 mL为释放介质～转速为50 r/min～依法操作～于第1、2、4、6、8、12 h分别取样5 mL并用0.45 μm微孔滤膜滤过～同时补充5 mL介质。取20 μL注入色谱仪～按“2.2”项下色谱条件测定～记录色谱图～另取“2.4”项下对照液,20 μg/mL,20 μL注入色谱仪～同法测定～记录色谱图～采用外标法计算累积释药量～将结果乘以0.8667～即得,2,。 2.8  释放均一性试验     取同批样品6片～按“释放度试验方法”项下方法进行释放度测定,见表2。 表1  盐酸左旋沙丁胺醇的回收率,略, 表2  释放度均一性的考察结果,略, Tab.2  The homogenicity of releasing result 2.9  样品释放度测定结果     按照上述方法～分别对3批样品进行释放度测定～测定结果见表3。 表3  样品测定结果,略, Tab.3  Releas of the sample 2.10  盐酸左旋沙丁胺醇缓释片释药模型的拟合     根据上述释放度测定的结果～分别用零级、一级、Higuchi、Weibull方程作曲线拟合～并按Peppas方程计算释放参数以判断其释药机理～结果见表4。 表4  拟合结果,略, Tab.4  Results of fitting test 由表4拟合结果可看出,Weibull分布拟合的相关系数最大～说明该方程能够很好地描述盐酸左旋沙丁胺醇缓释片的体外释药特征。另外～Peppas方程拟合的相关系数也较大～Peppas方程变换前的形式为Q=ktn～其中n为释放参数～是 该方程中表征释放机制的特征参数～它与药物的溶解性及制剂骨架的形状有关～对于圆柱形制剂～当n0.89时为骨架溶蚀,当0.45 3  讨论 3.1  体外释放度试验方法选择 3.1.1  按2005版《中国药典》凡例项下溶解度测定方法～测定了盐酸左旋沙丁胺醇25 ?时在不同pH值水溶液中的溶解度～结果表明盐酸左旋沙丁胺醇在不同pH值水溶液中的溶解度无显著性差异～本品在水中易溶。为模拟体内条件～前2 h以pH 1.2盐酸缓冲液为释放介质～2 h后以pH 6.8磷酸盐缓冲液为释放介质。分别考察了125 mL、250 mL介质用量～结果表明125 mL时～其主药释放浓度适中～便于检测～故选择介质用量为125 mL。 3.1.2  盐酸左旋沙丁胺醇缓释片～规格为4 mg/片(按左旋沙丁胺醇C13H21NO3计)～主药含量较低～采用《中国药典》2005版附录XC溶出度测定法第三法的装臵(小杯法)～可解决因主药浓度过低导致检测较难、测定误差大等问。 3.1.3  桨法中不同转速的比较:取同一批样品6片～按释放度试验方法用桨法分别以50、75、100 r/min进行释放度试验～结果3种转速下释放无明显差异～故选用最常用的转速50 r/min。 3.2  色谱条件选择     各国药典均未收载盐酸左旋沙丁胺醇缓释片～也无文献报道该片的释放度检测方法。而其消旋体沙丁胺醇～《中国药典》1995年版开始就已经收载了该药的原料药、片剂、胶囊剂及注射剂～是临床上治疗哮喘的一线药物。本文通过参考其消旋体沙丁胺醇有关文献,2-5,,比较各色谱条件～以磷酸盐缓冲液 甲醇,体积比85?15,为流动相,出峰时间适宜,且峰形对称、尖锐,辅料均不干扰盐酸左旋沙丁胺醇的测定。 3.3  本法特点     本实验建立了HPLC法测定盐酸左旋沙丁胺醇缓释片释放度～经方法学研究～该法测盐酸左旋沙丁胺醇的线性关系、回收率、稳定性良好～符合质量分析的要求～准确度高,重现性好,专属性强,简便快速～可有效测定盐酸左旋沙丁胺 醇缓释片的释放度～便于推广和使用。 【参考文献】   ,1, 罗景慧.左旋沙丁胺醇治疗哮喘较沙丁胺醇具有更高的治疗指数,J,.国外医药:合成药、生化药、制剂分删,1999(5):38. ,2, 国家药典委员会.中华人民共和国药典:2005版二部,S,.北京:化学工业出版社～2005:附录74. ,3, 陈睿妍.硫酸沙丁胺醇延迟释放片的制备及其体外释放度研究,J,. 中国药业, 2004～13(9):48-49. ,4, 左文坚,史欣. HPLC测定硫酸沙丁胺醇缓释片有关物质及含量,J,. 中国药学杂志,2002～37(7):535-537. ,5, 容永欢.高效液相色谱法测定复方吲哚美辛 栓中硫酸沙丁胺醇的含量,J,. 时珍国医国药,2005～16(1):15-16.