【doc】头颈肿瘤中肿瘤浸润淋巴细胞及其过继免疫疗法

【doc】头颈肿瘤中肿瘤浸润淋巴细胞及其过继免疫疗法 头颈肿瘤中肿瘤浸润淋巴细胞及其过继免 疫疗法 矗wJ『薪矮:椿咆龟天 26GimmEAetaJ.JExpMed,1983J157:丁IL28T8takeRJeta1.1ntJcncer,1989| 884,89743:508,566 27KumozawaHeta1.ActaOtolaryngo].29CorteslnaGe,a1.Cancer.1988J62: 1989;108:3l7,3242482,2485 '7002头颈肿瘤中肿瘤浸润淋巴细胞及其过继免疫疗法 北京市耳鼻咽喉科研究所 美垒综述韩德民审授 ~737.~/ [摘要]头颈肿瘤肿瘤镘搁淋巴细胞(tumorinfiltratiag1yraphoeyte,TIL)主要是T淋巴细胞.其厦 位TIL中cD鞍多,其次为CD,缺乏Lett.,cD细胞,呈现免疫抑制状态.TIL与IL-2在体外共局培养 可解除该抑制状态并使其产生肿瘤杀伤活住头颈肿瘤TIL中起杀恬肿瘤作用的成分主要为Lea-.亚群在体外 培养过程中TIL亚群比倒将发生改变,其变化与培养时间有一定关系.头颈肿瘤TILl19分离,培养,扩增优于杀 伤细胞(LAK)剪切届棍合酶消化与机械离心相结台是TIL分离较简便而成熟的方法.TIL~LAK相比其过继 免疫疗法具有高效,低毒的特,更适于临睐应用.头颈肿瘤中宅台TIL,其过继免疫治疗具有良好的应用前 景. 1983年基固重组自细胞介秦2(rIL一2)的 向世使肿瘤曲过继免疫疗法(adoptivelmmuno therapy,AIT)得到了很大发展.近年来, 用于临床试验并取得一定疗效的AIT中以IL一2/ LAKsq-~法最为引人注目,截止1990年4月该疗 法在垒世界至少治疗了30n0铡晚期恶性肿瘤病 人….绒LAK细胞之后,TIL做为一种新型的 效应细胞在AIT中的作用日益受到重视,动物实 验表ij}jj抗肿瘤作j订为LAK细孢n々5《,i?倍 L一2TIL疗法,IL一2LAK相比具有商效,低毒 的特点.颈肿瘤组织中有多照nILIL一2 /TII法?研究J临床应用做为头颈肿瘤 台治疗^-宦要一珂:有着极为广e《的前景.为此, 本文刊连年来头颈肿瘤TIL及其过继免疫疗法 的基础研究i临床应用现状存在问及令后 发展方向做一介绍,供同遣们参考. 【头颈肿瘤TIL的制备技术】人体柏 TJL大多取材{:自实体瘤的活检或手术切除标 本,小分来源于恶性胸腹牲渗液.头颈肿瘤 的TIL主要取材于实体瘤标本,肿瘤部位的活 拴或穿和抽取物及引流淋巴结.提取TIL的方法 很多—.目前多采用混合酶解聚与机械离 心相结合的三步法.?无菌条件下取手术 标本,剔除正常组织及坏死的癌组织,剪成2 — 3ram太小,尽量减少剪切挤压造成的细胞 损失}?组织置于含有0.01透明质酸酶, 0.1?型胶原酶,0.002DNA酶的RPMI 1640溶液中,在37?下连续搅拌2,4小时, 然后将细胞悬液用4层纱布过游再经过淋巴细 胞分离液分离,其上清主要为淋巴细胞,肿瘤 细胞和少量坏死的红细胞,?获得的肿瘤细胞 和淋巴纽f胞混台液经洗涤,放八10,12.5与 20^,22的双层Percoll梯度离心5O0转/分7 — 1Dj钟,即可得到高比例的TtL细胞悬液. 在TIL细胞的制备过程中应注意细菌和霉菌的 污染,手术取得的标本可先用含二性霉素,青 链霉素或庆犬露素的液体充分清洗之后再进行 分离,操作要严格无菌. 【新鲜分离的TIL的免疫学特性l 1.表型和功能活性.研究表明,绝大多数 TIL细胞为T淋巴细胞Robinowich发现TIL 中还有许多'-'qK样细jj包,但有人证实K样细胞的 数量正常而功能受损.Moy(1985)…和Whi— teside(1996,1988)"发现在新鲜的头颈肿 瘤TIL细胞制备液中CDs细胞明显多于CD细 跑,与其它肿瘤制备掖中CD'细胞多于CDe 国外医学耳鼻咽喉科学分册 细胞的情况有所不同,并且几乎不含NK细胞 (LeuI.,cD6).有人在这种不 同时认为有以下原因:?淋巴细胞的选择性浸 润可能是由TIL直接抗肿瘤表面的抗原决定簇 的特异性功能决定的;?肿瘤导致了一种或多 种已知的具有重要抗肿瘤细胞细胞毒性的效应 细胞亚群的缺失}?可能是分离过程中某些细 胞亚群丢失所致.人们在TIL细胞抗肿瘤活性的 研究中发现,从人体瘤组织中新鲜分离到的 TIL细胞对NK敏感和不敏感的靶细胞都不具有 杀伤作用,与自身末梢淋巴细胞(PBL)分离 的TIL中NK活性显着不同,提示新鲜TIL细 胞中处于墩活状态或已成熟的放应细胞很少或 效应细胞的功能受到了抑制:有关新鲜TIL细胞 呈现免疫抑;铷状态的机理尚不十分清楚.根据 已知的研究结果考虑可能与以下作用有芰:? 肿瘤实质中存在抑制细胞,可能是Ts细胞或巨 噬细胞,T!L细胞本身的存在也可能产生抑制 作用,?肿瘤细胞及其抑嗣因子的作用. 2.增殖强力和分泌细胞因子的能力. Miesther(1986)…发现新鲜分离到ft~3TlL 细胞在混合淋巴细胞培养中的反应性比PBL 低.曹雪淤(I98?,Ig0O)"""分刿对新 鲜分离到的TlI在丝裂原(Con,A)刺激下的 增殖反应引分泌IL2,IFN一,LT(Lymoph— toxin)的能力进行}驰桌,发现新鲜分离到 的TIL的增殖能力及分泌细胞因子的阮力部极 为低下,井通过实验证删r这种低F状态并非 实验操作所致而匙TIL奉身在肿瘤局潍的微环 境中形成的特性,推测可能与TIL细胞在肿瘤 局部受到肿瘤细胞分泌灼免疫抑制物质的作用 有关 【培养后昀TIL的免疫学特性】 1.表型露l功能活性的变化.实验表一刿新 鲜分离到曲处于免疫抑制状态的TIL细胞,其激 活,培养和扩增有赖于IL一2f参加….与IL一2 共同培养后的TIL细胞表型干?,功能活性均发生 很大变化,【_j前有关表型变化的研究结果报 道不一".Belidegrum研究r9侧肾癌 的TIL并在IL一2培养后的8—15天16,19天, 1993年17卷i期 30—35天分别对表型进行了分析,结果表明, 随着时间的延长,CD细胞比例逐渐增多,而 CD的比例逐渐减少,提示TIL细胞亚群比例 的变化可能与培养过程中抗肿瘤活性的变化有 关.Whiteside对头颈部鳞癌TIL细胞经IL 一 2诱导后的表型进行了研究,发现培养后的TIL 亚群中主要为CD,占50?12;其次为CD+, 占26?15.Heo的研究还表明头颈肿瘤 的TIL经IL一2诱导后Leu-g(NK细胞)明显增 多,并证明该细胞对NK敏感和非敏感的肿瘤 靶细胞都具有q~MHC(主要组织相容性复台体) 限制的细胞毒性,由此推测谈细胞是TIL在某 些情况下具有广谱抗肿瘤作用的原因之一.经 IL2诱导后的TIL对自身肿瘤细胞表现出明显 的杀伤活性.TIL的体内外抗肿瘤作用均显着 地强于LAK细胞..,井对LAK细胞治疗无效 的晚期肿瘤仍有一定的治疗效果.目前对TIL细 胞的抗肿瘤作用机理尚不十分清楚.Stotter等 (1989)证明TIL与LAK细胞杀伤肿瘤细 胞的机理是有区圳的.至于T1L的抗肿瘤作用 为何强于LAK细胞且具有一定的靶细胞特异 性,可能与以下因素有关":?TIL细胞能 较多地凝集于肿瘤部位.If~fLAK细胞无此能力; ?可能:rTIL在肿瘤的局鄢成被肿瘤抗城特 异致敏的C有;?可能与在TII培莽的最 剃阶段杂存于TIL细胞巷帆cl|的白体肿瘤细胞 的继续"体外救敏"有关. '2.增赡及分泌细胞因子能力的变化.研 究培养后TIL}增疽及分泌胞因子的能,发 现在含有5O0,1000ufml的1L一2培养基中,TIL 细胞可显着增殖.经过币断换液补充新 的IL一2TIL细胞可长期传代培养,所扩增的细 胞为T细胞.此时的TIL细胞在PHA或Con—A刺 激下增殖反应强烈.经500uml的IL一2培养7天 后,TIL~,IL2,IFN—Y,LT的能力也显着 增加.有人汪明TIL的培养和扩增均优于LAK 细胞.虽然在培养初期TIL的生长;速度迟 于LAK细胞,但TIL在培养的后期阶段生长速 度和扩增数量均高于LAK细胞,与L^K细胞相 比TIL经培养更易达到治疗所需的效应细胞数 量?. ITIL过继免疫疗法的临床应用】继Rose— aberg(1986)首次将激活后的TIL用于荷 瘤小鼠的AIT治疗并取得明显效果以来,不少人 在临床进行了有意义的研究,一致认为,与 LAK细胞相比TIL更适合于肿瘤的过继免疫疗 法,其理由主要有以下几点.?TIL的抗肿瘤 作用强于LAK细胞并有一定的靶细胞特异性, 而且对LAK细胞治疗无效的晚期肿瘤也有一定 的疗撤,?TIL做过继免疫治疗时仅需较少量 的IL一2,减少了LAK细胞需用大量IL一2所带来 的严重副作用和经济负担}?环磷酰胺(Cy), 放疗以及淋巴因子的应用可以显着增强TIL细 胞的抗肿瘤教果,而对LAK细胞确无此作用} @TII细胞来源广泛制备技术成熟,简单}? rIL细胞经IL一2培养后的生长扩增能力强于 LAK,同LAK细胞比较易达到治疗所需的效应 细胞数量.Kradia(1987)首次单独 应用自体TIL细胞治疗7例晚期转移性肺腺癌 患者,5例肺部转移瘤灶体积明显缩小.因为 是单独应用TIL,所以无一一例患者的瘤体缩小 50以上.1988年Rosenberg等人应用IL 2/TILfCy疗法治疗了2O侧转移性黑色素瘤患 者,发现以往未经IL2治疗的15例患者中有9 例患者多部位如肺,肝,脾,淋巴结,骨,皮 下等处的肿瘤部分消退(有效率60),另外 5例曾接受过IL一2治疗,无效的患者中有2例 患者的肿瘤郫分缩小(有效率40).到目前 为止,大量临床应用结果表明,将TIL分离后与 IL一2共同培养2—8周,使其细胞总数达到5 x10./mI以上,在TIL杀伤活性最高,肿瘤细 胞完垒消失且无任何污染的情况下给晚期肿瘤 患者回输是安全和可行的国外已开始将TIL 的过继免疫疗法用于临床.国内棘震逸等 (1990)首次报告应用TIL治:疗了3例肺癌患 者,取得_r肯定的治疗效果.应用话检瘤 组织分离得到的TIL与IL一2联台应用回输给一 例晚期局部广泛浸润的鼻腔黑色素瘤患者也取 得了肿瘤明显缩小的近期疗效. 关于IL-2/TIL治疗中的不良反应,报道中 一 R一 均提示其副作用程度明显轻于IL一2]LAK疗法. 除个别患者在TIL回输之后出现短时间(1— 2小时)的寒战,发热(38?)以外,无一例 患者出现低血压,贫血,肺水肿等严重的并发 症.表明IL-2/TIL疗法具有高效,低毒的特 点.为预防发热可以在回输前口服消炎痛,对 于寒战病人可采用保暖,注射非那根或杜冷丁 治疗. 随着对TIL细胞研究的不断深人,其制备技 术已日趋完善,人们已能从多种瘤体组织中分 离,提取TIL并进行培养,扩增.头颈肿瘤中 浸润有犬量的淋巴细胞,TIL细胞的过继免疫疗 法在头颈部恶性肿瘤的治疗中有着广阔的应用 前景.由于头颈肿瘤多部位表浅可借助辅助手 段用肉眼看到,敞作者认为头颈部肿瘤的过继 免疫疗法应以局部应用为主.局部应用的优点 在于:?抗肿瘤细胞的有效成分浓度高,抗肿 瘤作用更强;?几乎不会产生垒身性的副作 用}不必担心因TIL制剂中含有活的肿瘤细 胞发生血行转移,使用更加安垒.IL一2]TIL疗 法局部应用的方法包括?瘤体或瘤周注射J ?肿瘤引流淋巴结,淋巴管内注射,?利用肿 瘤供应动脉行区域性过继免疫治疗.在局部应 用的同时应强调与放疗,化疗和细胞因子相结 台的缭合治疗. TIL细胞的研究在临床上取得了一系列成 果,但总的说来对于TIL的研究才刚剐开始, 尚处于研究的初期阶段,许多问题有待于进一 :TIL杀伤肿瘤细胞的机制,TIL 步探讨,例如 中有效杀伤细胞亚群的提纯,新鲜TIL免疫抑 制的机理,TIL,IL一2,Cy联合应用的最适剂 量及应用选径和方法等. 近年来,人们在淋巴因子转基因治疗肿瘤 的研究中发现,TIL可能是运载目的基因最理 想的细胞.如果目的基因在TIL细胞中能 够得到稳定表达,那么,TIL参与的淋巴因子 转基因疗法将成为更为安垒有效的方法. 参考文献 1~eertaonPFetal?UqeskrLaegerJ1990I 国外医学耳鼻咽喉科学分册 -7—7f白讴锅蓑惦妒/蜀 ..003喉神经内分泌肿瘤 第军医大学附属长征医院尹.『一 (摘要]本文复习近年来有关喉神经内分泌肿瘤的文献,对其分类,临床,病理,诊断 和治疗进行了综 述,供临床医师参考. Gould…首次将神经内分泌肿瘤概念应用 于喉部以来,有关喉神经内分泌瘤的报道近400 例,并仍有增加趋势.由于此肿瘤临床变化 大,类似其它癌肿,并且有的类型侵袭性大, 易于广泛转移,因而对临床医师来说熟悉此瘤 的分类,诊断对患者的预后有重要影响.现将 1993年l7卷1期 有关文献综述如下. 【命名及分类l神经内分泌系统包括中枢 和外周神经系统广泛的多种神经细胞,在正常 豚鼠,兔等动物及人类喉粘膜上发现有神经内 分泌细胞,并可以用嗜银染色,免疫组化,电 镜等检测出这类细胞….近年来WHO将喉 一 7一