【doc】淋巴性肿瘤细胞分化与抗原受体基因重排研究

【doc】淋巴性肿瘤细胞分化与抗原受体基因重排研究 淋巴性肿瘤细胞分化与抗原受体基因重排 研究 中华内科杂志1993年第32枯第l0期 7淋巴恶性肿瘤细胞分化与抗原 受体基因重排研究 三鱼张明聃-龟—兰宋素芹张洪清zR7;;D '.摘要采用单克隆抗体(McAbs)免接酶法和体外基因扩增聚合酶链反应(PCR)技 术研究42例淋巴恶性肿瘤细胞分化起源及免疫球蛋白重链(IgH)和T细胞受体 (TCR) 基因重排.结果表明23例起源B细胞不同分化阶段者中20侧发生IqH基因重 排,11 )TCR基因缺失;11倒起源T细胞不同分化阶段者均发生 例伴TCR基因重排和(或 TCR基因重排,仅1侧伴IqH基田重排;3例表达T,B双表型者发生IgH和TCR, 基因双重重排;5例无系限分化抗原表达者4例TCR基因重排,无JgH基因重排. 就细胞起源与基因重排相关性及其研究临床应用价值进行了讨论. 关键词鐾宣堕壁丛廛莲旦重鲎垦墨堕 ArUDYoNCELLULARDlnERENTIATIoNANDATIGERECEPT0RGENE REARRANGEMENTINLYMPH0lDMALIGNANCIESWangLu— qun.ZhangMing-gong.Zhu Ping,elatDepartmentofHematologyAfflictedHospi~tofShandongMedicalUniversityJin an. 250oI2 CellulardifferentiationoriginandgenotypeofIgHand1?generearrangementin42easesof lymphoidmalignancieswerestudiedbyusingimmunoenzymaticmethodwithmonoclonala ntibodies (McAbs)andpolymerasechainreactionfPCR1techniquerespectively.neresultssuggestedt hat amongthe23cases,inwhichmalignantcellsexpressedB— lineagecellsurfacemarkers,20showedlgH generearrangementandl】hadTCRgenerearrangementand/orTCRgenedeletion.Allthell CRseSexpressedT— lineagecelldifferentiationantigenswerefoundtohaveTCRandTCRgene rearrangementordeletionandonlyonehadIgHgenerearrangement.DoublerearrangementofIgH andTC凡 genesweredetectedinallthe3casesofTBdouble-phenotypeALLInthecases.inwhich malignantcellsdidnotexpressanylineagespecificantigens,4/5hadTCgenerearrangement,but allfailedinIgHgenerearrangement.Therelationofcellulardifferentiationoriginandrearran gementof antigenreceptorgeneswithclinica1manifestationswasalsodiscussed KeywordsPolymerasechainreactionGenerearrangementLymphoidmalignancies 淋巴恶性肿瘤以淋巴组织及其前体细胞的 肿瘤性增殖为特征,单纯形态学分析不能明确 增殖克隆的细胞起源.利用单克隆抗体 (McAbs)不仅能识别肿瘤克隆的细胞源性,而 且可进一步研究肿瘤细胞起源的不同分化阶 段.但少数缺乏分化抗原表达的肿瘤性增殖, 还不能确定其细胞源性及克隆性.我们采用聚 合酶链反应技术(PCR)检测淋巴细胞免疫球蛋 白重链(IgH)和T细胞受体【TC, 基因重 排,并结合McAbs细胞表面抗原分析,报告 42例不同类型淋巴恶性肿瘤细胞分化起源与 淋巴细胞抗原受体基因重排研究结果. tlJ东医科大学附属医院血液病研究室奉倮部分受 山东省科委资助邮政编码250012现在济南军区总医院 邮政编码25003I天津第二医学院邮政编码300203 ? 674- 材料与方法 一 , 标本来源42例淋巴恶性肿瘤经形态学,细 胞化学和组织病理学确诊:包括急性淋巴细胞自血病 (ALL)31例,慢性淋巴细胞白血病(CLL)5例,非何 杰金淋巴瘤(NHL)6侧:标本取白静脉血,骨髓或活 检淋巴结.除l例为复发者外,标本均来自韧发者. 年龄4,62步,男24例,女18例. 中华内科杂志1993年第32卷第】o期 二,细胞分离采用淋巴细胞分离液(比重 1.077g/L)】常规分离肝素抗凝静脉血,骨髓或淋巴 结单细胞悬液,收集单个棱细胞. 三,McAbs检测采用碱性磷酸酶一抗碱性磷酸. 酶桥联免疫酶标技术(APAAP".所选系列McAbs 反应特性及来源见表1APAAP试剂盒由军事医学 科学院基础所提供着染细胞>20%为阳性标记: 表1McAbs反应特性及来源 CD反应特性柬CD反应特性来源 CD胸腺皮质细胞lCDl4单棱.AML{M5)2 CD全部T细胞恶变T细胞lCD垒部B细胞,非T—ALL2 CD成熟T细胞T—CLL_ATL】CD垒部B细胞.B-CLL,非T-ALL2 CD4TH.ATLT-CLLlCD,束成熟粒^ML2 CD垒部T细胞B亚群,T-CLL.ATL】CD于细胞.不成熟T细胞2 CD,生部T细胞T-ALL丁一cLLlHIM粒,单接AML2 CDTs1HIM牲单桉AML2 CD.郎分B细胞血小板咀桉.牲!c早B细胞,B-CLL】 CD1n成熟B细胞C—ALL:Smlg成熟B细胞.B—CLL1 CD靶单接,AML2HLA—DRB细胞,擞活T细胞.干细胞2 军事学科学院基础所2中国学科学院血液}究所 四,PCR检测常规酚抽提法提取染色体基因组 DNA.寡核苷醴引物为识别和扩增lgH第三互补决 定区(CDR—lid基因(DH,JH)和TC凡{V,?, TCR(v,)基因重排的RNA片段,其核苷酸序列 及合战见文献}.PCR基因扩增按Saiki的原理 进行95?预变性10分钟,加TaqDNA聚合酶 l5位,继之93?变性1分钟,55?退火1分钟, 72C延伸2分钟,循环30周期.取扩增反应液l2"l 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳,EB染色紫外分析仪观察照 像分析结l氍 .结果 42例淋巴恶性肿瘤的细胞起源,免疫学 分型和基因重排结果如表2所示. 其中23例表达B细胞分化抗原者分别起 源于B祖细胞(HLA—DR),前前B细胞 (HLA—DR,CDT~/一,cDi),前B细胞 fHLA—DR,cD一,CD;,cD一, CD一,cy+)和成熟B细胞(Sralg一).2o例 (87%)发生IgH基因克隆性重排,呈现约 110bp(1O0,120bp)扩增带:9例(39%)伴发 TCR基因克隆性重排,3例(13%)伴TCR 基因缺失l1例表达T细胞分化抗原者分别 起源于早期胸腺细胞(cD,CD7,cD;, cD;),中期胸腺细胞(cD和成熟胸腺细 胞(cDi,cD:/cD;).9例(81_8%)发生 表242例淋巴恶性肿瘤细胞起源与基因重排 包括缺失缺乏明确系碾分化抗原表达白 巾毕内科杂志1993年第j2卷第【0期 TC基因克隆性重排,扩增带约190bp;5 例(455%1发生TCR基因重排或缺失;重排 基因扩增带>580bp.仅1例T_NHL伴发 IgH基因克隆性重排3例同时表达TB细 胞分化抗原的双标记ALL,均检测到lgH和 TCR,基因克隆性双重重排.5例缺乏明确系 限分化抗原表达者中,3例仅表达CD3+8,2例 对所用McAbs均无反应,其中4例检测到 TC1L.基因克隆性重排或TCR基因缺失,但 均未发现IgH基因重排. 讨论 遗血祖细胞或淋巴前体细胞在向B或T 细胞定向分化时,分别发生了I2或TCR基 因的有序重排,不同细胞克隆及分化阶段具有 特异的重排类型井伴有细胞分化抗原的系列表 达.本研究表明,起源于B细胞不同分化阶 段的淋巴恶性肿瘤,均存在IgH基因的克隆 性重排.但由于重排类型的多样性和复杂性, 受引物选择的限制,PCR方法尚不能检测出 所有B细胞起源的克隆性增殖IgH基因重 排.TCR基因重排具有一定顺序性,2例表 达cD和cD;的早期T淋巴细胞恶性肿 瘤,出现TC和TCR,基因克隆性重排;3 例表达CD;,CD5或CD;分化抗原者检钡4到 TCR,基因克隆性重排;而起源于晚期T细胞 表达cDj,cD:或cD者,除可见TC基 因克隆性重排外,尚伴有TCR基因缺失,间 接反映了TCR基因重排由此可见,在T 细胞起源的淋巴恶性肿瘤中,TCR基因最早 发生重排,其次是1?R,晚期出现TCR基 因重排.此研究结果证明,I2和TCR基因重 排与细胞起源及其分化阶段具有一定相关性, 可做为淋巴恶性肿瘤克隆起源的肿瘤性分子标 志,用于诊断和病情监测研究. 值得注意的是,起源于前B细胞分化阶 段的淋巴恶性肿瘤.常出现TCR或TCR基 因的系间交叉重排,而在起源于晚期成熟B 细胞的CLL或NHL中,很少发生TCR基 因重排.此现象是肿瘤细胞的特征,还是正常 淋巴前体细胞早期分化的表现尚未定论,通常 认为与肿瘤细胞起源F尚术定向分化的非T 非B淋巴前体细胞以及谢控Ig和TCR基因 重排的重组酶系功能异常等诸多因素有 关l4.此类复杂基因型的研究将有助于阐明 淋巴恶性肿瘤的病理过程及正常淋巴细胞的分 化增殖过程此外6例形态学无法确诊或诊断 为急性髓细胞自血病及3例T,B双表型 ALL,基因重排分析均支持免疫学分型诊 断.而5例缺乏明确系限分化抗原表达者中3 ,均检测到TCR基因重 例仅表达CD抗原 排和f或)TCR基因缺失,无IgH基因重排, 证明其淋巴前体细胞或早期T细胞起源.此 结果表明,基因重排分析对F缺乏细胞分化抗 原表达的淋巴恶性肿瘤,鉴定其淋巴细胞起源 及进一步分型诊断具有重要临床实用价值 参考文献 【张明玳.等淋巴纠胞臼精免幢{盘_{l免癌廊色法与 免碴髓光『上比较.L}|血液学杂忠l990.1l:4O 2朱等巴恶性肿瘤舶免疫球n基囡重排科学通 报.1991,36:1506 3SaiklRK.elalPrimer-allreeleden,maticamplification ofDNAwithathermostablcDNApolymeraseScience, 1988.239:487 4DyerMJST—cellreceptord/rearrangementsin lymphoidneoplasmsBIood.【989.74:l073 5GriesingerF,elalTcellreceplorgammaandddta rearrangementinhematologicmalignanciesJClin Invest.【989.84:506 (收犒:【992-09-09修回:】993-06-07) (本文编辑李敬东) 欢迎订阅《遗传性神经,肌肉疾病》一书 《遗传性神经肌肉疾病》由第二军医大学宰春和教授等编着,科学出版社出版,23万字,介绍有关遗传病 500余种,内容新颖,适合临床备科及有关单位应用参考,每册1l2元(含邮资)_邮购请寄『:海凤阳路长征医院 神经科李焰生.邮政编码200003