高效液相色谱法测定炙甘草和炙甘草汤中甘草次酸的含量
作者:张淑萍~田嘉铭~白雪梅~李旺
【摘要】 目的利用高效液相色谱,HPLC,法测定炙甘草和炙甘草
汤中甘草次酸的含量。方法色谱柱为YWG-C18,250 mm×4.6 mm~10
μm)~以乙腈-5%醋酸水,65?35)为流动相~检测波长为250 nm~
流速为1.0 ml〃min-1。结果甘草次酸对照品浓度在9.375,300
mg〃ml-1范围内线性关系良好~回归方程:A=31.545C-82.030(n=6,
r=0.999 1)~炙甘草加样回收率为99.81%,炙甘草汤为100.28%。结
论HPLC法准确可靠~可为控制炙甘草和炙甘草汤质量提供检测依据。
【关键词】 炙甘草,炙甘草汤,甘草次酸,高效液相色谱法
Abstract:ObjectiveTo determine the glycyrrhetinic contents in Zhi Gancao root and Zhi Gancao Decoction by HPLC. MethodsYWG-C18 column (250 mm×4.6 mm~10 μm) was used with
Acetonitrile and 5% Acetic acid-water as mobile phase. The detection wavelength was 250 nm, and the flow rate was 1.0 ml〃min-1. Results The linear relationship was good in the range
of 9.375,300 mg〃ml-1. The regression equation
was:A=31.545C-82.030(n=6,r=0.999 1), the average recovery rate of Zhi Gancai and Zhi Gancao decoction were 99.81% and 100.28% respectively. Conclusion HPLC method is accurate and valuable for the quality control of Zhi Gancao and Zhi Gancao decoction.
Key words:Zhi Gancao; Zhi Gancao decoction;
Glycyrrhetinic acid; HPLC
炙甘草汤出自汉代张仲景的《伤寒论》~为治疗“心动悸、脉结代”
的古代名方~由炙甘草、生姜、桂枝、人参、生地黄、阿胶、麦门冬、
麻子仁、大枣组成。近年来~大量的实验研究证明~炙甘草汤确有抗
心律失常的作用~对各种心脏疾病所致的心律失常均有较好的疗效~
且药理作用广泛而持久~极具开发价值,1,。炙甘草为炙甘草汤的君
药~甘草次酸为甘草提取物的有效成分之一。目前文献报道多为测定
甘草酸的含量~而测定甘草次酸的含量的方法少见报道,2,。为了探
讨中药主要单体在中药配伍中的变化规律~实验采用HPLC法对炙甘
草和炙甘草汤中甘草次酸的含量进行了测定~为炙甘草汤的复方制剂
研究提供一定的实验依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪,HP1100~美国Agilent。包括在线脱气机~四元泵~柱温箱~紫外检测器~3D化学工作站,~A/D电子分析天平,1/10万~日本,~756紫外分光光度仪,上海分析仪器总厂,~超声波清洗器,KQ-500B~江苏省昆山市超声波仪器有限公司,。
1.2 试药
甘草次酸对照品,中国药品生物制品检定所,~甲醇,色谱纯~美国,~乙腈,色谱纯~天津科密欧,~蒸馏水为本室自制~其他试剂均为分析纯。方剂中九味中药均购自河北北方学院中医门诊部~并按照《中国药典》,2000年版,各单味药
进行检定。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱YWG-C18,250 mm×4.6 mm~10 μm)~流动相为乙腈?5%的醋酸水=65?35,流速:1ml〃min-1,检测波长:250 nm,柱温:25?,进样量:20 μl。
2.2 对照品溶液的制备精密秤取一定量的甘草次酸对照品~臵
5 ml容量瓶中~加流动相溶液稀释至刻度摇匀~配成1 mg/ml甘草次酸对照品溶液备用。
2.3 供试品溶液的制备样品?为炙甘草汤~按传统工艺煎煮两次~合并煎煮液浓缩成0.1 g/ml,含炙甘草,的溶液,样品?为炙甘草单味药材按上述方法制成0.5 g/ml,含炙甘草,的溶液。精密吸取样品?、?各2 ml~分别加入6 ml甲醇进行醇沉~离心5000 r/min 5 min~上清液过0.45 μm滤膜备用。
2.4 阴性对照实验按炙甘草汤处方比例制成缺炙甘草的阴性对照品~依照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。
2.5 线性关系观察精密吸取上述甘草次酸对照品溶液18.75~37.5~75~150~300~600 μl分别臵2 ml容量瓶中~加流动相溶液稀释至刻度~摇匀~按“2.1”项分别进样20 μl进行测定。以甘草次酸含量,C,为纵坐标~峰面积,A,为横坐标~得线性回归方程:A=31.545C-82.030,r=0.999 1(n=6)~结果表明甘草次酸含量在9.375,300 mg〃ml-1范围内~本法线性关系良好。
2.6 精密度实验精密吸取上述对照品溶液~按“2.1”项重复进样6次~峰面积的RSD为1.3%~表明本法精密度良好。
2.7 重复性考察取同一批药材样品~按样品制备方法平行制备5份~按“2.1”项进行测定。炙甘草中草次酸含量的RSD为1.98%~炙甘草汤中甘草次酸含量的RSD为2.03%~表明重现性良好。
2.8 回收率实验精密秤取己知含量的炙甘草和炙甘草汤方药材粉末适量~分别定量加入甘草次酸对照品~按照供试品溶液的制备方法操作~按“2.1”项进行测定~结果见表1。表1 加样回收率实验结果,略,
2.9 样品测定精密吸取供试品溶液稀释至合适浓度~按“2.1”项进行测定~代入回归方程~计算炙甘草和炙甘草中甘草次酸的含量~结果见表2~色谱图见图1。表2 炙甘草和炙甘草汤中甘草次酸的含量,略,
3 讨论
3.1 流动相的选择实验选用了不同的流动相比例~结果表明在现用流动相比例下甘草次酸出峰时间适中~分离度最好。
3.2 波长的选择用756MC分光光度仪对炙甘草和炙甘草汤进行全波长扫描~结果显示在250 nm处均有较高的吸收峰。
炙甘草汤中甘草次酸的含量高于炙甘草~分析其原因~可能是复方中的其他成分对目标成分有增溶作用~或复方中的其它药材也含有目标成分~结果有待于进一步深入研究。
【参考文献】
,1,郭春雨~宋 威~刘 芳~等.炙甘草汤抗心律失常的活性成分及药理研究概况,J,.长春中医学院学报~2001~17,2,:63.
,2,惠寿年~董阿玲.国内对甘草化学成分的研究进展,J,.中草药~1999~30,4,:245.