基因诊断与基因治疗

基因诊断与基因治疗 第十八章 基因诊断与基因治疗 20. 基因治疗 一、填空题 21. 核酸分子杂交 1. 基因突变可导致____的改变～从而引 22. Southern blotting ____。 起 23. 生物芯片 2. 基因变异包括____和____。 24. 免疫基因治疗 3. 内源性基因变异包括____、____、 25. 基因矫正 ____和____等。 26. 基因置换 4. 外源性基因变异是指____疾病。 27. 基因增补 5. 基因诊断常用技术方法有____、 28. 基因失活 ____、____和____。 29. 自杀基因 6. 核酸分子杂交技术是依据____、____ 30. 夹心杂交 和____原理的技术方法。 31. 引物 7. 常用固相核酸杂交方法有____、 32. Northern blotting ____、____、____、____和____等。 33. PCR 8. PCR是____的缩写～译为____。 9. PCR过程由____、____和____步骤组 成。 三、问答题 10. 生物芯片技术包括____、____、34. 简述基因诊断的特点。 ____、____、____和____。 35. 简述分子杂交程序。 11. 基因测序是将有关基因进行____～36. 简述PCR技术原理。 测出____～从中找出____所在。 37. 简述基因诊断的临床应用概况。 12. 基因治疗在概念上分为____和38. 基因治疗要符合哪些要求, ____。目前普遍接受的是____。 13. 基因治疗的总体策略主要有____、 ____、____、____、____、____和____等。 14. 基因治疗的基本程序包括____、 一、填空题 ____、____、和____。 1. 相应表型,疾病。 15. 获得治疗性基因的方法包括____、 2. 内源性基因变异,外源性基因变异。 ____、____、和____。 3. 点突变,缺失或插入性突变,染色体16. 常被用于基因治疗的基因转移载体 移位,基因重排和基因扩增。 有____、____和____。 4. 病原体感染性。 17. 基因治疗中的靶细胞也称为____细 5. 核酸杂交,PCR,基因芯片,基因测胞～靶细胞有____和____两大类。 序。 18. 基因转移方法概括地讲有____、 6. DNA双链碱基互补,变性,复性。 ____和____等。 7. Southern印迹杂交法,Northern印迹杂 交法,斑点或狭缝杂交法,菌落杂交法,夹二、名词解释 心杂交法,原位杂交法。 19. 基因诊断 8. Polymerase chain reaction,聚合酶链DNA芯片或基因芯片。生物芯片技术包括芯反应。 片制作、样品处理、分子间反应或杂交、检 9. DNA模板的变性,模板与引物结合,测、数据处理和综合信息分析。 引物延伸。 24. 是把产生抗病毒或肿瘤免疫力的相 10. 芯片制作(配体点阵及固定化),样品应的抗原决定族基因导入机体细胞～以达到处理(扩增和标记),分子间反应或杂交,检治疗目的的基因治疗技术。 测,数据处理,综合分析。 25. 是指将致病基因中的异常碱基进行 11. 分离,其碱基序列,其变异。 纠正～而正常部分予以保留的基因治疗技 12. 广义基因治疗,狭义基因治疗,广术。 义基因治疗。 26. 是指用正常基因通过基因同源重组 13. 基因矫正,基因置换,基因增补,技术～原位替换致病基因～使细胞内的DNA基因失活,“自杀基因”的应用,免疫基因治完全恢复正常的基因治疗技术。 疗,耐药基因治疗。 27. 即把正常基因导入体细胞～通过基 14. 治疗性基因的获得,基因载体的选因的非定点整合进入体细胞DNA～并使其表择,靶细胞的选择,基因转移方法的选择。 达～以弥补缺陷基因的功能～或使原有基因 15. 真核基因组文库,cDNA文库,PCR的功能得到增强～但致病基因本身并未除扩增,人工合成。 去。 16. 逆转录病毒,腺病毒,腺相关病毒。 28. 是将特定的反义核酸(反义RNA、反 17. 受体,生殖细胞,体细胞。 义DNA和核酶)导入细胞～在转录和翻译水 18. 化学法,物理法,生物(病毒)法。 平阻遏某些基因的异常表达～从而达到治疗 目的的基因治疗技术。 29. 在某些病毒或细菌中的某基因可产二、名词解释 生一种酶～它可将原本无细胞毒或低细胞毒19. 是利用分子生物学和分子遗传学的 药物前体转化为细胞毒性物质～将细胞本身技术方法～直接检测基因分子结构及表达水 杀死～此种基因称为“自杀基因”。 平是否异常～从而对疾病做出诊断的方法。 30. 用位于待测靶基因序列上两个相邻20. 为达到治疗目的～采用正常基因置 但不重叠的DNA片段(A、B)～分别制作捕捉换或增补患者体内变异基因的方法。 探针(不标记的、与A序列互补的片段)和检测21. 是依据DNA双链碱基互补、变性和 探针(标记的、与B序列互补的片段)～先后与复性原理～用已知碱基序列的单链核苷酸片 靶基因杂交。 段作为探针～检测样本中是否存在与其互补 31. 进行PCR扩增时需先设计一对序列的同源核苷酸序列的一种实验技术～是分子 与已知序列的DNA待测区两个3'-端的碱基生物学领域及基因诊断最常用的基本技术 互补的寡核苷酸～称为引物。 之一。 32. 是经典的RNA分析法～用于组织细22. DNA分子经限制性内切酶酶切和凝 胞中总RNA或mRNA的定性和定量分析～可胶电泳后～可按分子量大小分离～再进行变 确定其加工、剪接的缺陷及外显子的变异性处理～将单链DNA从凝胶中吸附转移到硝 等。 酸纤维素膜或尼龙膜上～然后在该滤膜上进 33. 即聚合酶链反应～是由Kary B.M.在行杂交反应～称为Southern印记杂交法。 1985年创建的～是一种在体外进行的由引物23. 主要用于DNA测序、基因表达谱的 介导的DNA序列酶促合成反应～又称为基因鉴定和基因突变体的检测与分析～故又称为 扩增技术。 变成单链。?模板与引物的结合:预先加入 反应体系中的两种引物在降温退火过程中 将分别同待扩增的DNA片段两条链对应的三、问答题 核苷酸互补结合～配对复性。?引物延伸:34. 基因诊断的对象是基因～它具有一 将反应体系调节到所选用的Taq酶的最适温般诊断所不具备的以下特点:?特异性高。 度～在有四种dNTP底物存在的条件下～聚合基因诊断是以特定的基因为探查靶点～所采 酶以待扩增DNA为模板～从引物的3′-端合成用的分子杂交技术是用特定基因序列作为 新的DNA链。 探针～故病因针对性很强。?灵敏度和精确 37. 基因诊断临床应用概况:?遗传病性高。分子杂交技术和PCR技术具有放大效 的基因诊断:如镰刀形红细胞贫血病的β珠应。其中PCR可检出pg水平靶基因。?实用 蛋白基因的第六个密码子发生单碱基突变。性强～诊断范围广。可用于内源性基因和外 这一突变改变了该基因内部的一个内切酶源性基因的检测。此外被检测基因样品几乎 Mst ?作用位点。当把正常人和带有基因突可以是任何状态的组织细胞～包括分化阶段 变者的基因组DNA用Mst ?酶解后～用β珠的特异性表达及异常表达～也可对血斑、精 蛋白基因探针杂交～结果会出现不同的DNA斑中的DNA等进行鉴定。 条带～依此对其进行基因诊断。?肿瘤的基35. 分子杂交程序主要包括下列内容: 因诊断:从分子生物学角度来看～肿瘤的发?待测核酸样本的制备。?特异性探针的制 生是由某些因素的作用所致的多个癌基因备与标记:制备的探针包括基因组探针、 的激活或抑癌基因的缺失。所以有人认为肿cDNA探针、寡核苷酸探针、RNA探针。核 瘤是一种多基因异常性疾病。依其基因突变酸探针必须标记。?待测核酸样本的电泳分 事实～可采用相应的技术对肿瘤进行基因诊离、变性、转移和固定。?非特异性DNA分 断。诊断结果对了解癌变机制～肿瘤分类分子的预杂交～标记探针的杂交、漂洗。?杂 型及预后均有指导意义。?感染性疾病的基交信号的检测:放射性核素标记的核酸探针 因诊断:采用分子杂交技术和PCR技术等对杂交信号～一般用放射自显影法检测。非放 感染性疾病进行基因诊断～可以快速准确地射性标记的核酸探针杂交信号～是通过酶促 诊断出致病微生物的种类,检测出带菌者和反应显色或发光来显示的。 潜在感染性,检测病原微生物耐药性～及进36. 采用PCR方法进行的基因扩增过程 行病原流行病学调查等。 类似于体内DNA的复制过程。不同之处是使 38. 基因治疗要符合:?属于为已明确用耐热的Taq酶取代DNA聚合酶～用合成的 的单基因缺陷性疾病,?仅限于体细胞,?DNA引物替代RNA引物。PCR全过程由DNA 靶细胞有亲缘性和可操作性等,?有明显疗模板变性、模板与引物结合和引物延伸三个 效和无或低危害性等,?表达水平稳定～时步骤组成～具体过程如下:?DNA模板的变 程长,?必须有动物实验基础。性:将待扩增的DNA高温变性～使双链解开